紅芪替代補中益氣湯中的黃芪對老齡小鼠脾T淋巴細胞的影響

邢文婷， 張李峰， 衛東鋒， 程衛東，4*， 杜 娟

（1.蘭州大學中西醫結合研究所， 甘肅 蘭州 730000； 2.蘭州大學基礎醫學院免疫學研究所， 甘肅 蘭州730000； 3.中國中醫科學院中醫臨床基礎醫學研究所， 北京 100700； 4.南方醫科大學中醫藥學院， 廣東 廣州 510515； 5.甘肅中醫學院護理學院， 甘肅 蘭州 730000）

紅芪替代補中益氣湯中的黃芪對老齡小鼠脾T淋巴細胞的影響

邢文婷1， 張李峰2， 衛東鋒3， 程衛東1，4*， 杜 娟5

（1.蘭州大學中西醫結合研究所， 甘肅 蘭州 730000； 2.蘭州大學基礎醫學院免疫學研究所， 甘肅 蘭州730000； 3.中國中醫科學院中醫臨床基礎醫學研究所， 北京 100700； 4.南方醫科大學中醫藥學院， 廣東 廣州 510515； 5.甘肅中醫學院護理學院， 甘肅 蘭州 730000）

目的 比較含紅芪與含黃芪的補中益氣湯含藥血清對老齡小鼠脾 T淋巴細胞作用的影響。 方法 通過 MTT法檢測含紅芪和含黃芪的補中益氣湯含藥血清對老齡鼠脾淋巴細胞的刺激增殖作用，確定最佳稀釋濃度和作用時間；比較含紅芪和含黃芪的補中益氣湯含藥血清對脾 T淋巴細胞的增殖能力、 T淋巴細胞亞群百分比及細胞培養上清中 IL-2 的水平。 結果 當含藥血清質量分數為 40%， 時間為 48 h 時， 補中益氣湯含藥血清對老齡小鼠脾淋巴的促增殖作用最佳。含紅芪與含黃芪的補中益氣湯含藥血清均可改善老齡鼠脾 T淋巴細胞的增殖、 T細胞亞群中 CD28+T淋巴細胞數及細胞培養上清中 IL-2 的水平。 含紅芪的補中益氣湯在提高老齡小鼠 T淋巴細胞的增殖能力和 IL-2 的分泌方面優于含黃芪補中益氣湯 （P＜0.01）。 結論 含紅芪與含黃芪的補中益氣湯均可通過調節 T淋巴細胞起到一定的抗免疫老化的作用， 且含紅芪的補中益氣湯在促進脾細胞增殖和分泌 IL-2 方面優于含黃芪的補中益氣湯， 具有統計學意義。

紅芪；黃芪；補中益氣湯；老齡小鼠脾T淋巴細胞；抗免疫老化

紅芪與黃芪同科異屬，是甘肅優質道地藥材［1］。紅芪和黃芪的性味、 功效與主治基本相同，自古二者不分，在我國西北地區尤甚［2］。 但目前黃芪野生資源幾近枯竭，引種黃芪形態變異，混雜現象嚴重［3］， 無法滿足中藥材市場對中藥黃芪的需求量。因此合理開發中藥紅芪資源以彌補黃芪資源的緊缺，具有一定的科學和實際意義。研究表明紅芪和黃芪雖在成 分上有一定差異［4-5］， 但 均具有免疫調節 作 用［6-7］， 而 且 作 用 十 分 相 似［8-9］， 說 明紅芪在免疫功能方面替換黃芪具有可行性。

中醫防治疾病的主要臨床應用形式是以君、臣、佐、使組方為特征的中藥復方，并不是單味藥的累加［10］， 因此有必要研究作用于復方中的紅芪和黃芪可否替換。以黃芪為君藥的補中益氣湯提高免疫力的 功 效 也 已 得 到 驗 證［11-13］， 且 紅 芪補 中 益氣湯與原方一樣具有免疫調節功能，用紅芪對T淋巴細胞的調節作用優于用黃芪［14］。 隨著人口老齡化的日趨加重，對衰老的研究也相應增多。研究表明衰老過程中， 機體免疫系統最早最易受損［15］，且衰老和T淋巴細胞的關系已成為免疫老化學說研究的核心內容［16］。

在前期工作中，實驗組已證實復方玉屏風散用黃芪在免疫調節作用和抗免疫老化方面與用紅芪具有相似性［17］。 為探討在其他復方中紅、 黃芪的可替換性，本實驗進一步以相同劑量的紅芪代替黃芪，比較含紅芪與含黃芪補中益氣湯含藥血清對自然衰老小鼠脾T淋巴細胞的影響，研究其抗免疫老化作用。為開發紅芪的藥用價值提供可靠的理論依據，并為研究紅芪補中益氣湯和黃芪補中益氣湯抗免疫老化作用提供實驗室依據。

1 材料

1.1 實驗藥物 經典補中益氣湯由炙黃芪、 黨參、炙甘草、 白術 （炒）、 當歸、 升麻、 柴胡、 陳皮組成，以同劑量紅芪代替黃芪，配伍成含紅芪的補中益氣湯。上述所用藥材均購自蘭州市藥材市場，由蘭州大學基礎醫學院程衛東教授鑒定合格，所用藥物劑量參照 《中國藥典》 2010 年版［18］， 并根據體表面積［19］換算得出小鼠的灌胃劑量為 4 g生藥 /（kg·d）。 將兩組藥材各加適量水浸泡0.5 ～1 h，煎兩次 （1.5 h， 1 h）， 混合濾液， 濃縮至 1 g生藥/mL， 4 ℃保存備用。

1.2 動物 青齡健康昆明種小鼠 120 只， 體質量18 ～22 g， 雌雄各半； 18 月齡健康昆明種老齡小鼠40 只， 體質量 45 ～50 g， 雌雄各半， 上述小鼠均由蘭州大學實驗動物中心提供，合格號：SKXK（甘） 201106-0014。

1.3 試劑 胎牛滅活血清 （杭州四季青生物工程材料有限公司）； 改良 RPMI-1640 培養基 （賽默飛世爾生物化學制品有限公司）； EZ-SepTMMOUSE IX淋巴細胞分離液 （深圳達科為生物技術有限公司）； MTT（美國 Sigma公司）； ConA （ 美國 Sigma公司）； SDS （ 天津化學試劑一廠）； FITC-抗小鼠CD3、 PE-抗小鼠 CD28 單克隆抗體 （ Biolegend 公司）； IL-2 酶聯免疫吸附 （ ELISA） 試劑盒 （ 深圳達科為生物技術有限公司）。

1.4 儀器 A06061422 超凈臺 （蘇州安泰空氣技術有限公司）； CO2培養箱 （日本 SANYO公司）；低溫冰箱 （日本 SANYO公司）；倒置顯微鏡 （德國 OLYMPUS 公司）； TDL-40B型和 TGL-16G型離心機 （上海安亭科學儀器廠）； 全自動酶標儀 （美國 BIO-RAD 公 司）；流 式 細 胞 儀 （美 國 貝 克 曼COULTER公司）。

2 方法

2.1 含藥血清的制備 取 120 只健康昆明種小鼠隨機分為3組：紅芪補中益氣湯 （含紅芪的補中益氣湯水提物）、 黃芪補中益氣湯 （含黃芪的補中益氣湯水提物） 和空白血清組 （生理鹽水組）， 每組 40 只。 中藥組分別給予 4 g生藥/（kg·d）， 空白血清組給予 0.9%生理鹽水， 3 組灌胃量均為0.4mL/（20 g·d）， 每日 1 次，連續 15 d； 末次給藥后 1 h （灌胃前禁食， 自由飲水 12 h）［20］， 摘眼球取血， 待全血凝固后， 3 500 r/min 離心 15 min，收集血清，同組混合， 56 ℃、 30 min 水浴滅活后，用孔徑為 0.22 μm的濾器除菌分裝， -80 ℃保存備用。

2.2 小鼠脾淋巴細胞懸液的制備 老齡和青齡小鼠頸脫臼處死，超凈臺下無菌取其脾臟。嚴格按照EZ—SepTM小鼠淋巴細胞分離液的說明書提取脾淋巴細胞，制備老齡鼠和青齡鼠脾淋巴細胞懸液備用。

2.3 脾淋巴細胞增殖活性的測定［21］用完全 RPMI-1640 培養液稀釋上述 “2.1” 項制備好的紅芪補中益氣湯、黃芪補中益氣湯和空白血清組含藥血清， 使 含 藥 血 清 的 質 量 分 數 分 別 為 1.25%、2.5%、 5%、10%、 20%、 40%、 80%。 調整上述“2.2”項制備的老齡鼠脾淋巴細胞懸液的細胞密度為 1 ×105個/mL， 加入 96 孔細胞培養板， 每孔100 μL， 再加入 3 組不同質量分數的含藥血清各100 μL， 每個質量分數設 12 個復孔。同時設老齡組 （不加含藥血清老齡鼠脾淋巴細胞） 和青齡組（青齡鼠脾淋巴細胞）。 另設不同質量分數含藥血清和只加完全 RPMI-1640 培養液的空白孔。 分別培養24 h、48 h 和 72 h 后， 加入終質量濃度為 5 mg/mL的 MTT 20 μL， 孵育 4 h， 加入 100 μL 10%的 SDS， 吹打混勻， 37 ℃過夜， 于酶標儀 570 nm處測 OD值， 空白孔校正調零， 結果以 OD值表示。 根據 MTT的結果選擇含藥血清的最佳稀釋質量分數和培養時間，與老齡小鼠脾淋巴細胞共培養用于下述實驗。

2.4 對 ConA誘導的老齡小鼠脾 T淋巴細胞體外增殖的測定［22］取 “2.2”項制備出的老齡鼠脾淋巴細胞懸液， 細胞密度調整為 2 ×105個/mL， 加入 96 孔細胞培養板， 每孔 50 μL； 并分別加入“2.3” 項所確定的紅芪補中益氣湯、 黃芪補中益氣湯和空白血清組最佳質量分數含藥血清，每孔50 μL。老齡組和青齡組脾細胞懸液每孔 50 μL。每組樣本 8 個復孔， 其中 4 孔加 ConA 100 μL， 4孔不加 ConA。 設每組最佳質量分數含藥血清和只加 完 全 RPMI-1640 培 養 液 的 空 白 孔。 按 上 述“2.3”項所確定的最佳培養時間培養 48 h 后， 各孔加 MTT 20 μL（終質量濃度為 5 mg/mL）， 孵育4 h， 加 100 μL 10%的 SDS， 吹打混勻， 37 ℃過夜， 于酶聯免疫檢測儀 570 nm處測 OD值， 空白孔校正調零，實驗結果用 OD值表示。最后按以下公式計算剌激指數： 刺激指數 =ConA誘導孔 OD均值/無 ConA孔 OD均值。

2.5 對老齡小鼠脾淋巴細胞 CD3 和 CD28 分子表達的測定 取上述 “2.2”項制備的老齡鼠脾淋巴細胞懸液， 調整細胞密度為 2 ×107個/mL， 加入24 孔細胞培養板， 每孔 500 μL， 并 分別加入“2.3”項確定的紅芪補中益氣湯、 黃芪補中益氣湯和空白血清組最佳質量分數含藥血清， 每孔 500 μL， 老齡組和青齡組脾細胞懸液每孔 500 μL， 五組樣本均設3個復孔。 培養48 h后， 收集細胞至2 mL離心管， 離心，將培養上清保留， -20 ℃保存備用。 0.01 mol/L PBS 洗滌細胞沉淀， 1 mol/L PBS 重懸， 調整細胞數約為 1 ×107個/mL。 取各組細胞懸液 100 μL， 分別加 FITC-抗小鼠 CD3 1 μL，PE-抗小鼠 CD28 2.5 μL，輕輕混合，4 ℃避光孵育30 min，PBS 洗 1 次細胞， 2 500 r/min 離心 5 min，棄上清， 細胞沉淀中加 500 μL PBS， 混勻， 上流式細胞儀檢測。

2.6 培養上清 IL-2 的測定 取 “2.5”項所得培養上清， 酶聯免疫吸附方法檢測培養上清 IL-2 的水平，操作步驟嚴格按說明書進行，結果經酶標儀450 nm波長測定 OD值，并根據對照品繪制標準曲線， 計算其質量濃度， 單位為 pg/mL。

3 結果

3.1 含藥血清對脾淋巴細胞增殖活性的影響 結果如表1所示，隨著含藥血清質量分數的升高和細胞培養時間的延長，脾細胞的增殖活性先增加后減少。 在相同的培養時間下， 40%的含藥血清脾淋巴細胞增殖活性均高于其他質量分數組，與相同質量分數空白血清組比較，脾淋巴細胞增殖活性均顯著增高 （P＜0.01）， 且紅芪補中益氣湯優于黃芪補中益氣湯 （P＜0.05）。 同時， 培養 48 h 的增殖活性優于 24 h 和 72 h。 因此將含藥血清定為 40%，培養時間定為48 h作為后續實驗的研究條件。

表1 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清與脾細胞增殖的時效量效關系 （， n=10）Tab.1 Time-effect and concentration-response relationship of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and con taining Hedysari Radix on sp leen cells（， n=10）

表1 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清與脾細胞增殖的時效量效關系 （， n=10）Tab.1 Time-effect and concentration-response relationship of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and con taining Hedysari Radix on sp leen cells（， n=10）

注： 與青齡組比較，**P＜0.01； 與相同質量分數的空白血清組比較，△△P＜0.01； 與相同血清質量分數黃芪補中益氣湯比較，▲P＜0.05

不同培養時間脾細胞增殖活性24 h 48 h 72 h青齡組分 組 質量分數/% 1.062 ±0.108 1.312 ±0.145 1.100 ±0.085老齡組 0.596 ±0.033** 0.682 ±0.075** 0.555 ±0.047**空白血清組 1.25 0.585 ±0.100 0.649 ±0.103 0.569 ±0.079空白血清組 2.5 0.580 ±0.057 0.684 ±0.119 0.611 ±0.073空白血清組 5 0.583 ±0.064 0.669 ±0.095 0.589 ±0.103空白血清組 10 0.609 ±0.070 0.681 ±0.092 0.623 ±0.111空白血清組 20 0.646 ±0.082 0.682 ±0.109 0.630 ±0.075空白血清組 40 0.651 ±0.074 0.737 ±0.040 0.646 ±0.045空白血清組 80 0.695 ±0.096 0.806 ±0.053 0.680 ±0.086黃芪補中益氣湯 1.25 0.584 ±0.078 0.647 ±0.103 0.587 ±0.065黃芪補中益氣湯 2.5 0.573 ±0.085 0.645 ±0.108 0.600 ±0.055黃芪補中益氣湯 5 0.583 ±0.076 0.707 ±0.125 0.589 ±0.068黃芪補中益氣湯 10 0.671 ±0.072 0.727 ±0.116 0.636 ±0.086黃芪補中益氣湯 20 0.754 ±0.071 0.822 ±0.118 0.797 ±0.125黃芪補中益氣湯 40 0.910 ±0.121△△ 0.984 ±0.029△△ 0.903 ±0.061△△黃芪補中益氣湯 80 0.750 ±0.109 0.793 ±0.149 0.786 ±0.130紅芪補中益氣湯 1.25 0.594 ±0.060 0.675 ±0.119 0.666 ±0.068紅芪補中益氣湯 2.5 0.696 ±0.057 0.657 ±0.077 0.651 ±0.071紅芪補中益氣湯 5 0.682 ±0.083 0.727 ±0.144 0.695 ±0.033紅芪補中益氣湯 10 0.741 ±0.129 0.720 ±0.145 0.698 ±0.108紅芪補中益氣湯 20 0.786 ±0.108 0.829 ±0.155 0.757 ±0.081紅芪補中益氣湯 40 0.949 ±0.107△△ 1.071 ±0.102△△▲ 0.946 ±0.045△△紅芪補中益氣湯80 0.770 ±0.077 0.875 ±0.079 0.777 ±0.084

3.2 對 ConA誘導的老齡小鼠脾 T淋巴細胞體外增殖的影響 結果如表2所示，與青齡組比較，老齡組脾淋巴細胞體外自身增殖、 ConA誘導增殖能力和刺激指數明顯降低 （P＜0.01）。 含紅芪和含黃芪的補中益氣湯含藥血清分別作用于老齡小鼠脾淋巴細胞，與空白血清組比較，增殖能力和刺激指數均升高 （P＜0.05）。且含紅芪補中益氣湯效果優于含黃芪補中益氣湯 （P＜0.05）。

3.3 對老齡小鼠脾淋巴細胞 CD3 和 CD28 分子表達的影響 結果如表3所示，與青齡組比較，老齡組 CD3+CD28+T淋巴細胞亞群減少， CD3+CD28-T淋巴細胞亞群增多 （P＜0.01）。 含紅芪和含黃芪的補中益氣湯含藥血清作用于老齡小鼠脾淋巴細胞后， 與空白血清組比較， 脾淋巴細胞 CD28 分子的表達發生改變， CD3+CD28+T淋巴細胞亞群增多 （P＜0.05）。

3.4 對培養上清 IL-2 的影響 結果如表 4 所示，與青齡組比較， 老齡組體外分泌 IL-2 的水平明顯減少 （P＜0.01）。 含紅芪和含黃芪的補中益氣湯含藥血清分別與老齡小鼠脾淋巴細胞共培養后，與空白血清組比較， 培養上清 IL-2 的水平增多 （ P＜0.01）。 含紅芪補中益氣湯優于含黃芪補中益氣湯（P＜0.05）。

表 2 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對 T淋巴細胞增殖的影響 （ˉ， n=10）Tab.2 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on proliferative capacity of T lym phocytes（ ˉ， n=10 ）

表 2 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對 T淋巴細胞增殖的影響 （ˉ， n=10）Tab.2 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on proliferative capacity of T lym phocytes（ ˉ， n=10 ）

注：與青齡組比較，**P＜0.01； 與空白血清組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01； 與黃芪補中益氣湯比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

組 別 劑量/（g·kg-1） 自身增殖 ConA誘導增殖 刺激指數青齡組 —1.180 ±0.177 1.976 ±0.135 1.702 ±0.199老齡組 — 0.669 ±0.114** 0.687 ±0.110** 1.029 ±0.026**空白血清組 4 0.671 ±0.091 0.702 ±0.086 1.049 ±0.067黃芪補中益氣湯 4 0.795 ±0.020△ 1.010 ±0.040△△ 1.270 ±0.036△紅芪補中益氣湯 4 0.902 ±0.008△△▲ 1.245 ±0.070△△▲▲ 1.380 ±0.075△△▲

表 3 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對 CD3+、 CD28+脾淋巴細胞亞群的影響 （， n=10）Tab.3 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on CD3+and CD28+in sp leen T lym phocyte subgroups（， n=10）

表 3 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對 CD3+、 CD28+脾淋巴細胞亞群的影響 （， n=10）Tab.3 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on CD3+and CD28+in sp leen T lym phocyte subgroups（， n=10）

注： 與青齡組比較，**P＜0.01； 與空白血清組比較，△P＜0.05

組 別 劑量/（g·kg-1） CD3+CD28-/% CD3+CD28+/%青齡組 —3.03 ±0.65 35.07 ±3.58老齡組 — 6.23 ±0.80** 26.12 ±2.03**空白血清組 4 5.97 ±1.11 26.33 ±2.17黃芪補中益氣湯 4 5.36 ±0.40 28.83 ±1.56△紅芪補中益氣湯 4 5.42 ±0.60 29.27 ±2.21△

表4 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對脾淋巴細胞培養上清 IL-2 水平的影響 （， n=10）Tab.4 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on IL-2 leve1 of sp leen T lym phocytes（， n=10）

表4 含黃芪和含紅芪補中益氣湯含藥血清對脾淋巴細胞培養上清 IL-2 水平的影響 （， n=10）Tab.4 Effect of Buzhong Yiqi Decoction containing Astragali Radix and containing Hedysari Radix on IL-2 leve1 of sp leen T lym phocytes（， n=10）

注：與青齡組比較，**P＜0.01； 與空白血清組比較，△△P＜0.01； 與黃芪補中益氣湯比較，▲P＜0.05

組 別 劑量/（g·kg-1）IL-2/（pg·m L-1）青齡組 —112.64 ±10.02老齡組 — 15.73 ±3.64**空白血清組 4 16.65 ±5.36黃芪補中益氣湯 4 63.78 ±4.66△△紅芪補中益氣湯 4 71.00 ±6.87△△▲

4 結論

基于目前在免疫調節方面，對紅、黃芪單味藥和在復方中應用的研究以及T淋巴細胞在抗免疫老化中所起的關鍵作用，實驗組前期研究表明紅芪替換黃芪應用于復方補中益氣湯在細胞免疫調節方面具有相似性［14］，本實驗進一步選擇了以黃芪為君藥的補中益氣湯，用紅芪代替原方中黃芪配伍成含紅芪的補中益氣湯，對抗免疫老化作用進行了體外對比研究。 實驗選擇中藥血清藥 理學方 法［23］，用中藥復方水提物給小鼠灌胃制備含藥血清對細胞進行體外培養。 通過 MTT法觀察含藥血清作用于老齡鼠脾淋巴細胞刺激增殖作用，實驗結果表明以血清質量分數為 40%的含藥血清培養 48 h 增殖效果最佳，且含紅芪補中益氣湯效果優于含黃芪補中益氣湯。

T淋巴細胞功能變化對衰老有一定影響，是免疫老化 的突 出 表 現［24-25］。 隨著 年 齡 增長， 體 外 有絲分裂原刺激后細胞增殖能力降低［26］， 且 IL-2 的生成減少［27］。 刺激 T淋巴細胞體外增殖的絲裂原應首選 ConA［28］。 本實驗再次用 MTT法觀察含藥血清作用于老齡鼠脾細胞對T淋巴細胞增殖的反應， 結果表明， 兩方 40%的含藥血清對老齡小鼠脾細胞作用48 h， 均能不同程度地提高老齡鼠 T淋巴細胞自身增殖和 ConA誘導的增殖能力， 刺激指數也相應增加，且紅芪補中益氣湯的作用更好。

伴隨年齡的增長，T淋巴細胞功能相關的許多分子發生改變， CD28-T細胞頻率是老年個體免疫功能不全的關鍵預 報因子［29-30］。 CD28 分子 的減少已作為免疫老化的重要標志之一［30］， 在細胞復制性衰老的進程中起關鍵作用［31］。 本實驗將含紅芪與含黃芪補中益氣湯含藥血清與老齡小鼠脾淋巴細胞共培養后， 發現加藥老齡鼠脾細胞 CD3+CD28+T淋巴細胞數量較不加藥老齡組增加， CD3+CD28-T淋巴細胞數減少， 紅芪補中益氣湯與黃芪補中益氣湯作用相似。

IL-2 主要由活化的 CD4 和 CD8 T細胞產生，是參與免疫應答的重要細胞因子［32］。 隨著年齡的增長， 機體 T淋巴 細 胞 分泌 IL-2 的 能 力明 顯 減弱［33］。本實驗結果也證實老齡組脾淋巴細胞的培養上清中 IL-2 的水平減少， 分別與紅芪和黃芪補中益氣湯含藥血清作用后，老齡小鼠T淋巴細胞分泌的 IL-2 的能力增強， 且紅芪補中益氣湯作用效果優于黃芪補中益氣湯。

綜上所述，紅芪補中益氣湯與黃芪補中益氣湯均可通過調節T淋巴細胞在抗免疫老化方面起到一定作用，二者作用相似，且紅芪補中益氣湯在促進脾細胞增殖和分泌 IL-2 方面優于黃芪補中益氣湯，因此紅芪代替補中益氣湯中黃芪在抗免疫老化方面具有可行性。本研究為開發甘肅道地藥材紅芪的藥用價值及深入研究紅芪與黃芪在復方中的抗免疫老化機制提供了實驗依據。

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Substitution of Hedyseri Radix for Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction results in change of sp leen T lym phocytes of aging m ice

XINGWen-ting1， ZHANG Li-feng2， WEIDong-feng3， CHENGWei-dong1，4*， DU Juan5
（1.Instituteof Integrated Chineseand Western Medicine， Lanzhou University， Lanzhou 730000， China； 2.Immunologic Institute， Schoolof Basic Medical Science， Lanzhou University， Lanzhou 730000， China； 3.Institute of Basic Research in Clinical Medicine， China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700， China； 4.Institute of Traditional Chinese Medicine， Southern Medical University， Guangzhou 510515， China； 5.College of Nursing，Gansu College of Traditional Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China）

AIM To study the effect of the substitution of Hedysari Radix for Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction on spleen T lymphocytes of agingmice.M ETHODS MTTmethod was used to detect the proliferation of the serum from both Hedyseri Radix and AstragaliRadix of Buzhong YiqiDecoction acting on spleen lymphocyte in aged mice， and to determine the optimum incubation time and serum concentrations.The comparison wasmade with the proliferative capacity of T lymphocytes， the percentage of T-lymphocyte subsets and the level of IL-2 in the culture supernatant.RESULTS MTT results showed that 40%of drug concentration with serum training 48 h stimulated proliferation bestby acting on spleen lymphocyte in agedmice.While both could significantly increased T lymphocyte proliferation， the T lymphocyte count of CD28+in T lymphocyte subgroup， and the level of IL-2. Hedysari Radix was superior to Astragali Radix in Buzhong Yiqi Decoction in raising T lymphocyte proliferation and IL-2 leve1.CONCLUSION Buzhong Yiqi Decoction containing Hedysari Radix has a similar role in anti-immunosenescence as Astragali Radix， and Hedysari Radix is statistically better in terms of T cell proliferation and IL-2 leve1.

Hedyseri Radix； Astragali Radix； Buzhong Yiqi Decoction； spleen T lymphocytes of aging mice；anti-immunosenescence

R285.5

： A

： 1001-1528（2014）03-0450-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.003

2013-06-17

國家自然科學基金面上項目 （81373806） ； 2012 年省衛生廳中醫藥科研立項課題 （ GZK-2012-43） ； 蘭州大學中央高?；究蒲袠I務費專項資金資助 （ lzujbky-2013-172）

邢文婷 （1988—） ， 女， 碩士生， 從事中西醫結合臨床研究。 TeL： 18298331246， E-mail： xingwentinghaha@126.com

*通信作者： 程 衛東 （ 1963—） ， 男， 教 授， 博 士， 博士 生 導 師， 從事中 西 醫 結合治 療 常 見 病 研 究。 Tel： （ 0931 ） 8915184， E-mail：chengweidong888@sina.com