黃精-大棗藥對協同抗氧化及提高免疫活性的對比研究

褚福龍， 宋永佳， 刁立超， 賽 男， 張 健， 劉嘉慧， 張崇禧

（山東大學 （威海） 海洋學院， 山東 威海 264209）

黃精-大棗藥對協同抗氧化及提高免疫活性的對比研究

褚福龍， 宋永佳， 刁立超， 賽 男， 張 健， 劉嘉慧， 張崇禧*

（山東大學 （威海） 海洋學院， 山東 威海 264209）

目的 觀察不同配比黃精和大棗藥對協同抗氧化及提高免疫活性的作用，探究最佳藥對配比。方法 不同配比黃精和大棗藥對 （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 及單藥測定羥基自由基考察藥對體外抗氧化的作用； 各藥液灌胃給小鼠， 每天 1 次， 連續 20 d， 處死小鼠， 測定 SOD和 MDA考察體內抗氧化作用， 測定免疫器官指數考察對小鼠免疫器官的影響； 測定血清溶菌酶水平考察藥對對小鼠非特異性免疫的影響。 結果 體外實驗表明黃精-大棗各配比藥對及單藥均能顯著清除羥基自由基； 體內實驗表明黃精-大棗各配比藥對及單藥均能顯著提高 SOD活性、 降低 MDA水平、提高小鼠的免疫器官指數及血清溶菌酶水平。 結論 該藥對表現為協同作用， 其中以1∶1配比為最佳， 藥對抗氧化能力及提高非特異性免疫能力均比單藥效果好。

黃精；大棗；藥對；抗氧化；非特異性免疫

黃 精 為百合科黃精屬植物滇黃精 Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl.、 黃精 Polygonatum sibiricum Red.或多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖， 大棗 Zizyphus jujuba Mill為鼠李科植物的成熟果實。 黃精具有益腎潤肺、健脾益氣之功效，而大棗為益氣安神，緩和藥性的常用中藥，兩藥配伍可互補不足。現代藥理研究發現兩藥均具有抗氧化活性，課題組前期研究發現，黃精、大棗配伍后抗氧化能力提高，免疫力增強。目前對于兩藥的化學成分和藥理作用研究比較多，但對于兩藥配伍后的抗氧化活性研究較少。為了探討黃精、大棗藥對的最佳配伍比例及其可能的抗氧化及提高免疫力機理，作者對黃精、大棗單煎和黃精-大棗藥對不同配伍比例合煎的抗氧化及提高免疫力作用進行了比較。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 清潔級昆明種小鼠， 購自山東綠葉制藥有限公司， 合格證號 SCXK（魯） 2011 0007， 體質量 18 ～22 g， 雌雄兼用。 環境溫度 （22 ±2） ℃， 在 12 h 光照周期的動物室內飼養，自由飲水、進食，適應性飼養1周后用于本實驗。

1.2 實驗樣品 黃精、 大棗購于山東省威海市燕喜堂藥店， 經山東大學生藥學專家張崇禧教授鑒定。1～7號樣品依次為：黃精、大棗單味水煎濃縮液、藥對的不同配伍比例 （黃精∶大棗分別為 3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 水煎濃縮液。 每種供試品均取 100 g生藥， 煎煮3 次， 依次加8 倍量水、 6 倍量水、 4 倍量水， 分別煎煮 3 h、 2 h 和 1 h，過濾后合并濾液并濃縮至 1 g/mL， 置 4 ℃ 冰箱保 存，備用。

1.3 實驗試劑 羥基自由基試劑盒、 超氧化物歧化酶（SOD） 試劑盒、 丙二醛 （MDA） 試劑盒、 溶菌酶 （LZM）試劑盒 （南京建成生物工程研究所）； 考馬司亮藍 G250（上海試劑新分裝廠）； 牛血清白蛋白 （上?；瘜W試劑廠）；其余試劑均為國產分析純。

1.4 實驗儀器 PL303 型分析天平 ［METTLER-TOLEDO儀器 （上海） 有限公司］， 722 型紫外可見分光光度計 （上海光譜儀器有限公司）。

2 方法

2.1 體外抗氧化活性測定［1-3］分別取各實驗藥液 1 mL，嚴格按照試劑盒說明書檢測各藥體外對抗羥基自由基能力，空白組加 1 mL蒸餾水， 陽性對照組給予等體積 1 g/mL的維生素 C。

2.2 動物分組與給藥方法［4-5］按隨機數字表法分為 9 組，即空白對照組、陽性對照組、黃精、大棗單味水煎液給藥組以及藥對 （3 ∶7， 4 ∶6， 5 ∶5， 6 ∶4， 7 ∶3） 給藥組，每組10只。 各給藥組均采用灌胃給藥， 每日 1次， 連續給藥 20 d， 給藥體積 20mL/kg， 空白組給予等體積的蒸餾水，陽性對照組給予等體積 1 g/mL的維生素 C。 末次給藥 24 h后，小鼠摘眼球取血后頸椎脫臼處死，測定相關實驗指標。

2.3 體內抗氧化活性測定 末次給藥 24 h 后， 小鼠摘眼球取 血 ， 分離 血 清備用。 取 小 鼠 肝 臟 ， 200 mg組 織 加 9 倍的生理鹽 水 冰浴下制 成 10% 組織勻漿 液 ， 以3 000 r/min 離心 10min， 取上清液， 按照試劑盒說明書測定 SOD、 MDA活性。

2.4 免疫活性測定 小鼠處死前稱定體質量， 處死后， 取脾臟、胸腺，分別稱定。根據以下公式計算相應免疫器官指數： 脾臟指數 =脾臟質量 （m） /體質量 （m）， 胸腺指數=胸腺質量 （m） /體質量 （m）。

未抗凝血液靜置后離心取血清，按照溶菌酶試劑盒說明書測定血清溶菌酶水平。

2.5 統計學處理 采用 SSPS 17.0 軟件對數據進行統計分析， 采用方差分析檢驗， 數據均以 （） 表示， P＜0.05代表數據有顯著性差異。

3 結果

3.1 對羥基自由基清除作用 與空白對照組比較， 各給藥組對羥基自由基的清除作用均表現顯著，各配比藥對對自由基的清除能力均大于兩單藥煎液， 藥對比為1∶1時清除作用最強，見表1。

表 1 各給藥組對羥基自由基的清除作用 （n=10，）

表 1 各給藥組對羥基自由基的清除作用 （n=10，）

注： 與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組別 ·OH清除率/% 43.62 ±1.20黃精 21.14 ±2.2*大棗 25.89 ±0.93*藥對 （3 ∶7） 31.92 ±0.68**Δ藥對 （4 ∶6） 38.71 ±1.01**Δ藥對 （5 ∶5） 42.35 ±2.01***ΔΔ藥對 （6 ∶4） 33.02 ±1.02**Δ藥對 （7 ∶3） 27.50 ±2.88**Δ陽性對照組

3.2 SOD和 MDA活性影響 各給藥組均可提高 SOD活性， 降低MDA水平。 與空白對照組相比， 各給藥組均顯著提高 SOD活性 （P＜0.05）， 其中以藥對 1 ∶1 配比為最顯著 （P＜0.001）； 各給藥組均可降低 MDA水平， 部分藥對效果顯著 （P＜0.05）， 以藥對 1 ∶1 配比為最顯著 （P＜0.01）， 見表 2。

表 2 各給藥組對 SOD和 MDA活性影響 （n=10，）

表 2 各給藥組對 SOD和 MDA活性影響 （n=10，）

注： 與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 SOD活性/（U·mg-1）MDA活性/（mmol·m L-1）空白對照組213.52 ±10.33 21.43 ±5.76陽性對照組 342 ±11.42 13.76 ±2.32黃精 253.48 ±12.40* 19.74 ±4.59大棗 282.83 ±11.54* 18.16 ±4.28藥對 （3 ∶7） 287.62 ±12.46**Δ 18.63 ±4.89藥對 （4 ∶6） 310.16 ±10.49**Δ 16.74 ±3.90*藥對 （5 ∶5） 337.96 ±11.45***ΔΔ 14.13 ±2.17**Δ藥對 （6 ∶4） 295.46 ±12.12**Δ 17.28 ±3.12*藥對 （7 ∶3） 283.94 ±10.42* 17.69 ±3.93*

3.3 對免疫器官指數的影響 與空白對照組比較， 大棗組及各配比藥對組對兩個免疫器官指數的增大作用顯著（P＜0.05）， 說明大棗及各配比藥對能促進正常小鼠免疫器官發育， 而黃精組對免疫器官的影響不顯著 （P＞0.05）， 見表 3。

表 3 各給藥組對免疫器官指數的影響 （n=10，）

表 3 各給藥組對免疫器官指數的影響 （n=10，）

注： 與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 脾臟指數 （ ×10-3） 胸腺指數 （ ×10-3）4.5 ±0.4 3.7 ±0.3陽性對照組 5.9 ±0.2 4.6 ±0.1黃精 4.7 ±0.3 3.8 ±0.1大棗 4.9 ±0.2* 4.0 ±0.2*藥對 （3 ∶7） 5.2 ±0.2* 4.3 ±0.2*藥對 （4 ∶6） 5.3 ±0.3* 4.5 ±0.1**Δ藥對 （5 ∶5） 5.6 ±0.1**Δ 4.6 ±0.2**Δ藥對 （6 ∶4） 5.1 ±0.1* 4.3 ±0.1*藥對 （7 ∶3） 4.9 ±0.2* 4.2 ±0.2空白對照組*

3.4 對血清溶菌酶的影響 各藥對組中血清溶菌酶與空白對照組比較均有顯著性差異 （P＜0.05）。 各藥對組均可顯著提高正常小鼠血液溶菌酶活性， 其中配比為1∶1藥對的效果極顯著 （P＜0.01）， 見表 4。

表 4 各給藥組對血清溶菌酶的影響 （n=10，）

表 4 各給藥組對血清溶菌酶的影響 （n=10，）

注： 與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01； 與黃精或大棗比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

組 別 溶菌酶/（ μg·m L-1）8.12 ±1.66陽性對照組 10.97 ±1.35黃精 10.03 ±1.24大棗 10.12 ±1.68藥對 （3： 7） 10.47 ±1.32*藥對 （4 ∶6） 10.66 ±1.70*藥對 （5 ∶5） 10.82 ±1.31**Δ藥對 （6 ∶4） 10.62 ±1.47*藥對 （7 ∶3） 10.42 ±1.73空白對照組*

4 討論

由于黃精與大棗藥對在中藥復方中的配伍比例不一，本實驗對黃精、大棗單用及精棗藥對合用不同配伍比例水煎劑的抗氧化和提高免疫力作用進行了研究，結果證明黃精-大棗藥對 1 ∶1 的配伍比例的抗氧化、 提高免疫力作用最強。

生物機體內的超氧化物歧化酶 （SOD） 具有顯著的清除自由基作用，隨著年齡的逐漸增長，其活性開始降低而誘導脂質過氧化， 脂質過氧化的最終代謝產物 MDA增多將誘導細胞整合性能下降［6-11］。 SOD和 MDA是檢測提高體內抗氧化能力最常用的指標。同時，自由基引發的脂質過氧化，能夠誘導核酸代謝錯誤，酶活性降低等，對細胞產生較嚴重的損傷作用［12］。 本實驗研究表明黃精和大棗藥對可顯著清除羥基自由基， 提高 SOD活性和降低 MDA水平，實驗結果表明精棗藥對抗氧化的機制除了能直接清除自由基還可能和提高 SOD活性有關。

脾臟、胸腺是哺乳動物最主要的中樞和外周免疫器官，小鼠的免疫器官指數是其免疫器官發育和反映免疫應答強弱的重要指標［13］； 溶菌酶是固有免疫分子， 它能水解細菌細胞壁的肽聚糖使細菌崩解死亡，是機體非常重要的非特異性防御因子。本實驗表明黃精和大棗藥對可提高小鼠的免疫器官指數及血清溶菌酶水平，可以顯著提高非特異性免疫［14-16］。

［ 1］ 楊文建.8 種傳統中藥藥對抗氧化協同機制的研究［D］.泰安： 山東農業大學， 2009.

［2］ 張志東，王一飛，錢垂文，等.裙帶菜多糖的體外抗氧化作用研究［ J］ .中藥材， 2012， 35（4） ： 620-622.

［3］ 黃 梅，王學軍，楊 凱.中藥抗氧化成分及抗氧化活性的體外評價方法［J］.重慶科技學院學報， 2006， 8（3）：109-111.

［ 4］ 陳 奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京： 人民衛生出版社， 2002： 298-308.

［5］ 周愛珍，尹 華，王知青.大黃、 黃芩與黃柏藥對配伍提取工 藝 的 研 究 ［ J］.中 國 中 藥 雜 志， 2012， 37 （4 ）：461-465.

［ 6 ］ 馬 宏， 張宗玉， 童坦君.衰老的生物學標志［J］.生理科學進展， 2002， 33（1）： 65-68.

［7］ 郭重儀.黃芩苷對脂質過氧化及內皮細胞氧化損傷的保護作用［ J］ .中藥材， 2012， 35（2） ： 288-290.

［8］ 歐世平，蔣中仁，葛宇杰，等.黃精大棗等成分口服液緩解體力疲勞研究［J］.預防醫學情報雜志， 2008， 24（2）：102-104.

［ 9 ］ 周彥鋼， 賈建萍， 黃 良.康健口服液的研制［J］.食品工業科技， 2009， 30（2）： 230-231

［10］ 馬鳳巧， 王愛梅， 歐陽靜萍.黃精對衰老大鼠海馬組織SOD活性及 MDA含量影響的研究［J］.中國現代藥物應用， 2010， 4（2）： 149-150.

［11］ Zhang X L， Jiang B， Li Z B， et al.Catalpol ameliorates cognition deficits and attenuates oxidative damage in the brain of senescentmice induced by D-galactose［ J］ .Pharmacol Biochem Behav， 2007， 88（1） ： 64-72.

［12］ Nordberg J， Arner E S.Reactive oxygen species， antioxidants， and themammalian thioredoxin system［J］ .Free Radio Biol Med， 2001， 31（11）： 1287-1312.

［13］ Zhang SE， Zhang Y H， TAO Y， et al.Effects of goat p lacental preparations on immunity and hypoxia tolerance in mice［J］ .Chin JBiochem Pharm， 2008， 29（3） ： 189-191.

［14］ Callewaert L， Michiels CW.Lysozymes in the animal kingdom［J］ .JBiosciences， 2010， 35（1） ： 127-160.

［15］ 李小兵.桑葉多糖對長期大負荷運動訓練小鼠免疫功能的影響 ［ J］. 中 國 實 驗 方 劑 學 雜 志， 2012， 18 （24 ）：269-272.

［16］ 沈建利， 劉利萍， 錢建鴻.黃精多糖對免疫抑制小鼠的免疫功 能 的 影 響 ［ J］.藥 物 研 究 評 價， 2012， 35 （5 ）：328-331.

R285.5

： B

： 1001-1528（2014）03-0614-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.038

2013-02-14

山東大學科技創新項目 （A12018）

褚福龍 （1992—） ， 男， 本科在讀。 Tel： 18769198364， E-mail： 827901972@qq.com

*通信作者： 張崇禧 （1954—）， 男， 博士， 教授， 研究生導師， 執業藥師， 研究方向： 中藥現代化及藥理。 Tel：（0631）5675313， E-mail： zcx_11@126.com