柴胡與醋柴胡疏肝解郁作用比較研究

汪 巍， 陳映輝， 王麗娜， 許 枬， 賈天柱

（遼寧中醫藥大學藥學院， 遼寧 大連 116600）

柴胡與醋柴胡疏肝解郁作用比較研究

汪 巍， 陳映輝， 王麗娜， 許 枬， 賈天柱*

（遼寧中醫藥大學藥學院， 遼寧 大連 116600）

目的 比較柴胡與醋柴胡疏肝解郁作用的差異。方法 選擇小鼠懸尾應激、小鼠強迫游泳、利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型，比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用差異，并通過測定小鼠全血膽堿酯酶活力對其疏肝解郁作用機制進行探究。結果 各給藥組均可以對抗小鼠因強迫懸尾及強迫游泳造成的抑郁癥狀，使其失望不動時間縮短，可對抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降， 并能降低小鼠全血膽堿酯酶活力。 其中醋柴胡和陽性組作用顯著， P＜0.01。結論 醋柴胡的疏肝解郁作用優于生柴胡。

柴胡；醋柴胡；疏肝解郁；乙酰膽堿酯酶

柴胡為 傘形科 植物柴胡 Bupleurum chinense DC或狹葉柴胡 Bupleurum scorzoneri folium W illd 的 干 燥 根， 按 性 狀 不同， 分別習稱 “北柴胡” 及 “南柴胡”。 性味辛、 苦， 微寒，歸肝、膽、肺經。疏散退熱，疏肝解郁，升舉陽氣。用于感冒發熱，寒熱往來，胸脅脹痛，月經不調，子宮脫垂， 脫肛［1］。 柴胡傳統炮制方法有： 醋柴胡、 鱉血柴胡、酒柴胡、蜜炙柴胡，中國藥典目前只收載醋柴胡。自古便有柴胡 “入解表藥生用， 清肝炒熟用” 的說法， 在傳統理論中，生柴胡的升散作用較強，多用于解表退熱；醋柴胡可以緩和升散之性，降低解表退熱作用，并可增強疏肝止痛作用，多用于肝郁氣滯的脅痛、腹痛及月經不調等癥。兩者的疏肝解郁作用到底如何呢？故考察醋制前后柴胡疏肝解郁作用差異及其解郁作用機制，選用小鼠懸尾應激、小鼠強迫游泳、 利血平所致眼瞼下垂小鼠抑郁模型［2-6］， 比較柴胡醋制前后疏肝解郁作用的差異。并通過測定小鼠全血膽堿酯酶活力對其疏肝解郁作用機制進行探究。

1 材料

1.1 藥材來源 柴胡飲片購于遼寧正大祥和藥業集團有限公司， 批號 201105245， 產地遼寧。

1.2 試劑 利血平注射液， 天津金耀氨基酸有限公司公司， 批號 1203241； 鹽酸氯米帕明， 江蘇恩華藥業， 批號H32022974； 甲硫酸新斯的明注射液， 批號 H110202； 乙酰膽堿酯酶 （TChE） 測定試劑盒， 購于南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器 日立 U-3010 型分光光度計， 日立公司。

1.4 動物 昆明種小鼠， 雌雄兼用， 體質量 （18 ～22） g，由大連醫科大學實驗動物中心提供， 清潔級 （CL）。

2 實驗方法

2.1 生、 醋柴胡疏肝解郁作用差異比較

2.1.1 醋柴胡水煎液的制備 分別將生柴胡及 3 種醋柴胡用水煎煮制成1 ∶2 濃度水煎劑 （相當于生藥）， 備用。

2.1.2 小鼠懸尾試驗 按文獻［7］方法進行試驗， 取小鼠60 只。 隨機分成 6 組， 每組 10 只， 分別為生柴胡組、 醋柴胡 1 組 （每 100 kg柴胡用米醋 20 kg）、 醋柴胡 2 組 （每100 kg柴胡用米醋 40 kg）、 醋柴胡 3 組 （每 100 kg柴胡用米醋 60 kg）、 生理鹽水陰性對照組、 氯米帕明陽性對照組。給藥組分別給生柴胡及3 種醋柴胡水煎劑， 參照文獻 ［8］中給藥方法及劑量， 按 30 mL/kg灌胃給藥， 陰性對照組灌服等容量生理鹽水， 陽性對照組灌服氯米帕明 20 mg/kg。連續灌胃7 d， 于末次灌胃給藥后1 h 后將小鼠尾端2 cm處固定于水平面上， 使其呈倒掛狀態， 頭部離臺面約 30 cm，四周以板隔離動物視線， 記錄小鼠在 6 min 內的不動時間為失望時間。

2.1.3 小鼠強迫游泳試驗 按文獻［7］中方法， 先做預試驗， 將小鼠放入水槽 （2 000 mL燒杯， 高 20 cm， 直徑 14 cm， 水深 10 cm， 置于水浴鍋內） 中， 調節水溫保持 25 ℃左右， 持續觀察 6 min， 累 計 6 min 內小 鼠 在 水中 停 止 掙扎、呈漂浮狀態、僅有細小的肢體運動以保持頭部浮在水面的持續時間 （不動時間）， 將不動時間超過 150 s或低于60 s者小鼠剔除。 將合格老鼠隨機分組 （分組及處理同懸尾實驗）， 連續灌胃 7 d， 于末次灌胃 1 h 后按預試驗方法進行強迫游泳試驗， 記錄小鼠 6 min 內累計不動時間。

2.1.4 利血平拮抗試驗 按文獻［9］中方法， 取實驗動物隨機分組 （分組及處理較懸尾試驗增加利血平模型組） 連續灌胃給藥 7 d， 末次給藥 30 min 后每只小鼠按 2.5 mg/kg腹腔注射利血平 （0.1 mL/log） 觀察小鼠眼瞼下垂情況，準確記錄1 h時的眼瞼下垂度和體溫，觀察自發活動、耳尾顏色及腹瀉等情況。 按 Rubin 分級標準判斷下垂度。 0 度為正常開目； 1 度為眼瞼下垂 1/4； 2 度為眼瞼下垂 1/2； 3度為眼瞼下垂 3/4； 4 度為眼瞼完全閉合。

2.2 醋柴胡疏肝解郁作用機制探究 小鼠全血膽堿酯酶活力測定 取小鼠 50 只。 隨機分為 5 組， 每組 10 只， 分別為醋柴胡 1 組 （每 100 kg柴胡用米醋 20 kg）、 醋柴胡 2 組（每 100 kg柴胡用米醋 40 kg）、 醋柴胡 3 組 （每 100 kg柴胡用米醋 60 kg）、 生理鹽水陰性對照組、 甲硫酸新斯的明陽性對照組。 給藥組分別給 3 種醋柴胡水煎劑， 按 30 mL/kg灌胃給藥， 陰性對照組灌服等容量生理鹽水， 陽性對照組灌服甲基硫酸新斯的明 0.2 mg/kg， 給藥后 1 h 摘眼球取血，按照試劑盒說明書中步驟用化學比色法測定小鼠全血膽堿酯酶活力。

2.3 統計處理 應用 SPSS 軟件進行統計學處理。 各給藥組均與對照組進行比較，采用單因素方差分析比較。P＜0.05 時， 兩組間差異有顯著性。

3 結果

3.1 生、 醋柴胡對小鼠強迫懸尾、 游泳不動時間、 利血平引起小鼠體溫下降、眼瞼下垂的影響 從實驗結果可以看出，生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳不動時間，并且可以對抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降，且醋柴胡和氯米帕明的作用優于生柴胡。 結果見表1 ～3。

表1 生、 醋柴胡對小鼠強迫懸尾不動時間的影響 （）

表1 生、 醋柴胡對小鼠強迫懸尾不動時間的影響 （）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/s生理鹽水組組 別 動物 數 劑 量 6 min 不動 時間10 30 m L/kg 167.07 ±24.59生 柴胡組 10 30 m L/kg 134.79 ±23.32*醋 柴胡 1 組 10 30 m L/kg 122.53 ±34.00**醋柴胡 2 組 10 30mL/kg 112.28 ±22.23**醋柴胡 3 組 10 30mL/kg 117.23 ±26.30**氯米帕明組 10 20 mg/kg 96.49 ±13.18**

表2 生、 醋柴胡對小鼠強迫游泳不動時間的影響 （）

表2 生、 醋柴胡對小鼠強迫游泳不動時間的影響 （）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/s生理鹽水組組 別 動物 數 劑 量 6 min 不動 時間10 30 m L/kg 101.55 ±11.39生 柴胡組 10 30 m L/kg 86.69 ±14.64*醋柴胡 1 組 10 30mL/kg 83.13 ±12.75**醋 柴胡 2 組 10 30 m L/kg 80.98 ±13.02**醋 柴胡 3 組 10 30 m L/kg 82.23 ±12.79**氯米帕明組 10 20 mg/kg 79.99 ±10.78**

表3 生、 醋柴胡對利血平引起小鼠抑郁模型的影響 （）

表3 生、 醋柴胡對利血平引起小鼠抑郁模型的影響 （）

注： 與生理鹽水組比較，△P＜0.05； 與利血平模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

/℃生理鹽水組組 別 動物數 劑量 眼瞼下垂度/度 體溫10 30 m L/kg 0 36.94 ±0.19利血平模型組 10 2.5 mg/kg 3.50 ±0.71△ 36.15 ±0.23△生柴 胡組 10 30 m L/kg+利血 平 2.50 ±0.85* 36.48 ±0.21*醋柴 胡 1 組 10 30 m L/kg+利血 平 2.30 ±0.95** 36.55 ±0.17**醋柴 胡 2 組 10 30 m L/kg+利血 平 1.70 ±1.06** 36.65 ±0.40**醋柴胡 3 組 10 30mL/kg+利血平 2.20 ±0.63** 36.73 ±0.31**氯米帕明組 10 20 mg/kg+利血平 1.00 ±1.05 36.58 ±0.33**

3.2 醋柴胡中加醋量不同對于小鼠膽堿酯酶活力的影響從實驗結果可以看出，醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性，從而減少乙酰膽堿的水解，進而達到解郁的作用。而且與對照組比較，三組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力，其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力 （P＜0.01）。 結果見表 4。

4 討論

抑郁癥在中醫理論中辯證為郁癥，多由于肝郁氣滯所致，而肝郁，多由情志抑郁，氣機阻滯所致。是 “肝氣郁”， “肝氣郁結” 的簡稱。 肝有疏泄的功能， 可條暢氣機，喜升發舒暢，疏泄有度，則氣機暢達，氣血調和，疏泄不足，則氣機郁滯。如因情志不舒，惱怒傷肝，或因其他原因影響氣機升發和疏泄，氣郁日久，日久化火，就會引起肝郁的病癥。治療肝郁癥可通過疏肝理氣，即疏肝解郁［10-11］。 柴胡為中醫臨床對 抑郁癥治療 應用廣 泛且療效較好的藥物之一。 又 《素問·宣明五氣篇》中說： “酸入肝”，又酸味具有收斂，固澀的作用。所以醋柴胡相較之于生柴胡，可以緩和生品的升散之性，降低解表退熱作用，卻可增強其疏肝止痛作用［12］。

表4 醋柴胡中加醋量不同對于小鼠膽堿酯酶活力影響（）

表4 醋柴胡中加醋量不同對于小鼠膽堿酯酶活力影響（）

注： 與生理鹽水組相比較，*P＜0.05，**P＜0.01

動物數 劑量 膽堿酯酶活力生理鹽水組組別10 30 mL/kg 38.90 ±3.010醋柴 胡 1 組 10 30 mL/kg 33.79 ±3.346*醋柴 胡 2 組 10 30 mL/kg 25.04 ±4.520**醋柴 胡 3 組 10 30 mL/kg 33.65 ±3.362*甲硫酸新斯的明組 10 0.2mg/kg 21.98 ±5.177**

文中選取小鼠懸尾、強迫游泳、利血平所致眼瞼下垂體溫下降等模型均為經典的情志和藥物所致的抑郁模型，可用來篩選和觀察抗抑郁藥物。動物在一個局限環境中拼命掙扎試圖逃跑而又無法逃脫后出現不動狀態，此狀態反映了絕望行為［13-15］。 本 實驗選 用氯米帕明 為陽性對照， 其為臨床常用三環類抗抑郁藥，用于治療各種抑郁狀態。主要通過抑制神經元對釋放于突觸間隙的 NA和 5-HT的再攝取、 又以抑制 5-HT的重攝取為主， 有效治療抑郁癥［16］。但由于其相應的阻斷了膽堿能受體，臨床會常常表現出口干、便秘、排尿困難、視物模糊、頭暈、嗜睡、體位性低血壓、 記憶影響和心動過速等多種不良反應［17］， 副作用明顯。所以應找出新型藥效良好但副作用小的新型抗抑郁藥。

從實驗結果可以看出生、醋柴胡和氯米帕明均可縮短小鼠尾懸掛的失望時間和大鼠強迫游泳不動時間，并可對抗因利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降，且醋柴胡和氯米帕明的作用優于生柴胡。結果顯示柴胡具有疏肝解郁的作用，且醋柴胡的疏肝解郁作用明顯優于生柴胡。這一結果驗證了傳統理論的科學性，也證明了中藥炮制的重要性，為臨床準確用藥提供了依據。

臨床上，肝郁患者常表現為兩脅苦滿、腹脹、納減及神志上的異常等，這除了由于個別臟器的病理性病變外，還與植物神經、中樞神經系統功能失調有很大關系。由于植物神經功能紊亂，可影響到人的情緒上的異常改變，亦可影響到消化系統。乙酰膽堿是中樞內廣泛存在的一種神經介質，作為植物神經節前纖維和副交感神經節后纖維神經遞質，可以興奮膽堿能神經，起到調節神經、消化系統的功能，其可被乙酰膽堿酯酶所水解，膽堿酯酶的活力間接影響著中樞神經系統的功能［8］。

從實驗結果可以看出，醋柴胡能夠抑制膽堿酯酶的活性，從而減少乙酰膽堿的水解，進而達到解郁的作用。而且與對照組比較，3組醋柴胡均能減低小鼠全血膽堿酯酶活力，其中醋柴胡2組能顯著降低小鼠全血膽堿酯酶活力（P＜0.01）。 說明在炮制的過程中加醋量的不同， 炮制品的藥理藥效作用也會產生差異。提示我們應該進一步優化炮制工藝，使得柴胡等中藥飲片發揮其最大藥效。

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R285.5

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： 1001-1528（2014）03-0617-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.039

2013-03-18

國家中醫藥管理局中醫藥行業專項項目 （201107007）

汪 巍 （1988—） ， 女， 碩士生， 研究方向： 中藥炮制。 Tel： 15004149605， E-mail： 95772134@qq.com

*通信作者： 賈天柱 （1951—）， 男， 教授， 研究方向： 中藥炮制工藝與原理解析。 Tel： （0411） 87586329