不同透皮促進劑對祖師麻體外透皮吸收的影響

范 彬， 石曉峰*， 李 爽

（1.甘肅省醫學科學研究院， 甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫學院， 甘肅 蘭州 730000）

不同透皮促進劑對祖師麻體外透皮吸收的影響

范 彬1， 石曉峰1*， 李 爽2

（1.甘肅省醫學科學研究院， 甘肅 蘭州 730050； 2.甘肅中醫學院， 甘肅 蘭州 730000）

目的 研究不同促滲劑對祖師麻體外透皮促滲作用的影響。 方法 采用 ZTY智能透皮試驗儀， 以離體雄性大鼠腹部皮膚為模型， 通過高效液相色譜法測定接受液中祖師麻甲素和 7-羥基香豆素的量， 計算不同時段藥物的累積滲透量和滲透速率。 結果 4%冰片、 4%油酸、 5%氮酮、 1% ～5%丙二醇、 1 ∶1 ～1 ∶4 氮酮-丙二醇均能促進祖師麻有效成分的吸收， 其中氮酮和丙二醇促滲效果明顯； 采用 4%氮酮時促滲效果最佳。 結論 可選擇 4%氮酮作為祖師麻經皮給藥制劑的最佳透皮吸收促進劑。

祖師麻； 透皮促進劑； 祖師麻甲素； 7-羥基香豆素； 透皮吸收

祖師麻 Daphne Cortex為 瑞 香科植物 黃 瑞香 Daphne giraldii Nitsche、 唐古特瑞香 Daphne tangutica Maxim及凹葉瑞香 Daphne retusa Hemsl的 干 燥 根 皮 與 莖 皮［1］。 始 載 于《陜西中草藥》， 辛、 苦， 溫、 有小毒； 歸肝經［2］。 祖師麻的主要化學成分為香豆素類、二萜類、木脂素類、黃酮類、蒽醌類及甾醇類等［3］， 其主要有效成分為瑞香素 （7，8-二羥基香豆素、 又稱祖師麻甲素， daphnetin） 、 瑞香苷 （ 祖師麻乙素， daphnin） 、 紫丁香苷 （ syringin） 、 傘形花內酯 （7-羥基香豆素、 7-Hydrangine） 等， 以祖師麻甲素為代表的香豆素類成分具有明顯的鎮痛、抗炎、抑菌、抗血栓、抗凝血等藥理作用［4］。 本實驗應用 ZTY智能透皮試驗儀， 以祖師麻甲素和 7-羥基香豆素作為測量指標， 考察不同促進劑對祖師麻浸膏粉中香豆素類成分透皮吸收的影響，希冀為祖師麻經皮給藥制劑的研究提供參考。

1 儀器、 材料與動物

1.1 儀器 Agilent1120 型高效液相色譜儀 （ 美國安捷倫公司）； ZTY智能透皮試驗儀 TP2A （鞏義市英峪予華儀器廠） ； AE260 型萬分 之 一 電 子 天 平 （ 瑞 士 Mettle Toledo公司）； SK3310HLC型超聲波清洗器 （上海科導超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 祖師麻浸膏粉 （批號 20111118） 由甘肅泰康制藥有限責任公司提供； 氮酮 （化學純， 批號 20111010）由上海山浦化工有限公司提供；油酸 （分析純，批號20100912） 由煙臺市雙雙化工有限公司提供； 1，2 丙二醇（分析純， 批號 20100619） 由天津博迪化工股份有限公司提供； 聚乙二醇 400 （分析純， 批號 20110322） 由天津市凱信化學工業有限公司提供； 甲醇 （色譜純， 批號20110627012）； 乙腈 （色譜純， 批號 2010100102） 均由西隴化工股份公司提供；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

1.3 動物 SD大鼠， 雄性， 體質量 300 g～350 g， 蘭州大學實 驗 動 物 中 心 提 供， 動 物 合 格 證 號： SCXK （ 甘）2009-0004

2 方法與結果

2.1 大鼠離體皮膚的制備 取 SD大鼠， 腹部皮膚用脫毛劑 8%Na2S 溶液脫毛， 清水洗凈皮膚表面， 飼養 24 h 后斷頸處死，剪下腹部皮膚，剝離皮下脂肪及黏液組織，用蒸餾水反復洗凈，再用生理鹽水漂洗后，浸于生理鹽水中，4℃冰箱短期保存， 備用［5］。

2.2 體外透皮吸收試驗測定 采用 ZTY智能透皮試驗儀，取制備好的鼠皮， 剪成適當大小的 3 片 （3.4 cm2）， 分別置于透皮試驗儀的3個供給池與接受池之間，角質層面向供給池，真皮層面向接受池，使皮膚結合緊密勿有氣泡。取0.500 0 g祖師麻浸膏粉與不同濃度的透皮促進劑混合均勻后， 貼 在 鼠 皮 表 皮， 接 受 室 內 為 15 mL接 受 液（ PEG400∶95%EtOH∶生理鹽水 =1 ∶3 ∶6） 。 開動恒溫水浴循環 （37 ±1）℃和磁力加熱攪拌器 （300 r/min）， 開始計時， 隨時排除接受池中氣泡， 在設定時間點 2、 4、 6、 8、10、 12、 24 h 分別從接受池取樣 1 mL， 并立即補充等體積37 ℃接受液。 取出樣品用 0.45 μm微孔濾膜過濾后， 以高效液相色譜 （HPLC） 法測定各時間祖師麻甲素、 7-羥基香豆素的質量濃度， 計算單位面積內的累積滲透量 Qn（μg· cm-2）。 計算公式 （1） 如下：

2.3 樣品測定

2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取祖師麻甲素對照品

式中， A為滲透面積 （3.4 cm-2）； V為接受室容積 （15 mL）； Vi為每次取樣體積 （1 mL）； Cn為第 n 次取樣時接收液中的藥物質量濃度 （μg/mL）； Ci為第 i次取樣時接收液中的藥物質量濃度 （μg/mL）。

然后以 時間 t（h） 為 橫 坐標， 累積滲透量 Qn（μg·cm-2）為縱坐標， 對曲線中的直線部分進行回歸分析， 所得方程即為 Qn-t方程， 其斜率為透皮速率常數 J（μg·cm-2·h-1）。 再以如下公式 （2） 計算促透劑的促透倍數 （Enhancement Ratio， ER） ， 其中 Jenhancers為加入促透劑后藥物的穩態透皮速率， Jcontrol為未加促透劑時藥物的穩態透皮速率［6-8］。 0.008 3 g， 置 10mL量瓶中， 加 40%乙醇溶解并定容至刻度，即得祖師麻甲素對照品貯備液。精密吸取上述貯備液2 mL于 5 mL量瓶中， 加 40%乙醇定容至刻度， 配制成每1mL含祖師麻甲素 0.332mg的對照品溶液。

精密稱取 7-羥基香豆素對照品0.010 4 g， 置 25 mL量瓶中， 加 40%乙醇溶解并定容至刻度， 即得 7-羥基香豆素對照品貯備液。 精密吸取上述貯備液 1 mL于 10 mL量瓶中， 加 40%乙醇定容至刻度， 配制成每 1mL含 7-羥基香豆素 41.6 μg的對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備 按 “2.2” 項下操作在設定時間點取滲透接受液 1 mL， 用 0.45 μm微孔濾膜過濾， 取續濾液作為供試品溶液。

2.3.3 色 譜 條 件 與系 統 適 用 性 試 驗［9-11］Agilent Eclipse Plus C18色譜柱 （4.6mm×250mm， 5 μm）； 流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液 （15 ∶85）； 體積流量 1.0mL/min； 檢測波長 327 nm； 柱溫 30 ℃； 進樣量 20 μL。 依上述色譜條件進樣測定。 結果樣品中祖師麻甲素、 7-羥基香豆素均得到較好分離， 與其相鄰色譜峰分離度 ＞1.5。 理論塔板數以祖師麻甲素峰面積計算不得低于3 000。 結果見圖 1。

圖1 對照品和樣品的高效液相色譜圖

2.3.4 線性關系的考察 分別精密吸取祖師麻甲素對照品溶液10、 100、 200、 400、 600、 800、 1 000 μL至1 mL量瓶中， 精 密 吸取 7-羥基 香 豆 素 對 照 品 溶 液 10、 100、 200、400、 600、 800 μL至 1 mL量瓶中， 用 40%乙醇稀釋至刻度， 搖勻。 分別精密吸取上述各對照品溶液 20 μL， 依次進樣測定峰面積。 以峰面積 （Y） 為縱坐標， 質量濃度 （X，μg/mL） 為橫坐標進行線性回歸。 得祖師麻甲素回歸方程：Y=1.260 41 ×106X-2.004 76 ×106（r=0.999 9）， 線性范圍 3.32 ～265.6 μg/mL。 7-羥 基 香 豆 素 回 歸 方 程： Y= 1.392 06 ×106X+416 583 （r=0.999 6）， 線性范圍0.416 ～33.28 μg/mL。 結果表明： 祖師麻甲素和 7-羥基香豆素在其質量濃度范圍內與峰面積值呈良好線性關系。

2.4 透皮吸收促進劑的優選

2.4.1 不同透皮吸收促進劑的考察 精密稱取祖師麻浸膏粉0.500 0 g， 分別加入 4%冰片 （borneol）、 4%油酸 （Oleic acid， OA） 、 5%氮酮 （ azone） 、 1% ～5%丙 二 醇 （1， 2-propyleneglycol， PG） 、 1 ∶1 ～1 ∶4 氮酮-丙二醇 （ azone-PG）混合均勻， 按 “2.3.2” 項下制備樣品， 比較不同透皮促進劑對祖師麻甲素累計滲透量的影響。 結果見表1。 由表1可知， 12種透皮促進劑對祖師麻甲素均具有經皮促透效果，以 4%油酸、 5%氮酮、 4% 丙二醇和氮酮-丙二醇 （1 ∶1）對祖師麻甲素的促透效果顯著； 比較24 h 累積滲透量， 5%氮酮 和 4%丙二醇的明顯大于其他促進劑； ER顯示 5%氮酮大于4%丙二醇，故選用氮酮作為促進劑。

2.4.2 氮酮的最 佳 質 量分數考 察 取 祖 師 麻 浸 膏 粉0.500 0 g， 分別加入 1%、 2%、 3%、 4%、 5%氮酮混合均勻， 比較不同質量分數氮酮對祖師麻甲素和 7-羥基香豆素的累計滲透量的影響。 結果見表 2、 圖 2。 當氮酮的質量分數為 4%時， 促滲效果最好， 祖師麻甲素和 7-羥基香豆素24 h 累積滲透量分別為1 260.433 μg/cm和 174.500 μg/cm，ER分別為 4.880 和 4.05， 尤以 7-羥基香豆素的透皮效果顯著。 故最終選用4%氮酮作為祖師麻的透皮促進劑。

表1 不同透皮促進劑對祖師麻甲素的經皮滲透的影響

表 2 不同質量分數氮酮對祖師麻甲素和 7-羥基香豆素的經皮滲透的影響 （n=3）

圖 2 不同質量分數氮酮對祖師麻甲素 （A） 和 7-羥基香豆素 （B） 的體外透皮吸收曲線

3 討論

3.1 透皮給藥劑型使用安全、 方便、 毒副作用小、 療效確切，可有效避免肝臟首過效應。促進藥物透皮吸收的方法有藥劑學方法、 化學方法和物理方法［12］； 添加適宜的透皮吸收促進劑是迄今研究最多和最直接有效的經皮滲透促進方法［13-14］， 故尋找促進藥物 經皮滲 透的方法是 開發透皮吸收制劑的關鍵。

3.2 實驗中制備不含透皮促進劑樣品時， 加入 4%的接受液， 即 PEG 400 ∶95%EtOH∶生理鹽水 =1 ∶3 ∶6 與祖師麻浸膏粉混合均勻后制備樣品。此外，實驗中，盡量選用離體鼠皮腹部中間薄厚一致部位，以此減少實驗誤差；接受液液面與離體鼠皮充分接觸，以防氣泡產生；接受液溫度保持 （37 ±1）℃， 以免影響透皮效果。 通過考察不同轉速對祖師麻的透皮吸收的影響，其差異性不顯著，故將攪拌器轉速固定為 300 r/min。

3.3 本實驗通過對常見的幾種透皮促進劑的透皮效果的比較， 發現 4%油酸作為透皮促進劑時， 其 24 h 累計滲透量為 673.305 μg·cm-2， ER值為 3.367， 但 t1ag大于 0， 表明采用4%油酸有時滯產生， 不利于祖師麻浸膏粉的透皮吸收； 選用4%丙二醇作為透皮促進劑時， 其透皮速率常數J為 35.921 μg·cm-2·h-1， ER值為 3.747， 均小于 5%氮酮的透皮速率常數和ER值；而氮酮和丙二醇兩種促滲劑合用時，其透皮吸收效果略遜于單獨使用氮酮的。

3.4 氮酮是目前公認的優良促透劑， 對皮膚的毒性、 刺激性都很低， 其最佳促透質量分數為 0.1% ～5%， 再提高并不能增強其效果， 甚至產生降低作用［15］， 故本實驗選擇的氮酮分數范圍在 1% ～5%。 結果表明， 在促滲劑 4%氮酮的作用下， 祖師麻浸膏粉中主要成分祖師麻甲素和 7-羥基香豆素的透皮吸收速率和 24 h累計滲透量最大， 故確定4%氮酮作為祖師麻經皮給藥制劑的最佳透皮吸收促進劑。

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R944

： B

： 1001-1528（2014）03-0631-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.03.043

2013-03-12

甘肅省普通中醫藥科研課題 （ GZK-2011-81） ； 2013 年蘭州市第三批 （ 社會發展類） 科技計劃 （2013-3-39）

范 彬 （1979—） ， 女， 碩 士， 主管 藥師。 研究方 向： 中藥 化學 及中藥 質量 標準。 Tel： （0931） 2614521-2110， E-mail：fb1124@sina.com

*通信作者： 石曉峰 （1964—） ， 男， 主任藥師， 教授， 碩士生導師。 研究方向： 天然藥物化學。 Tel： （0931 ） 2614521-6039， E-mail：shixiaofeng2005@sina.com