葡萄霜霉病有效藥劑篩選及藥效評價

畢秋艷， 楊曉津， 馬志強*， 張小風， 王文橋， 韓秀英

（1.河北省農林科學院植物保護研究所／河北省農業有害生物綜合防治工程技術研究中心，保定 071000；2.中國地質大學長城學院，保定 071000）

葡萄霜霉病有效藥劑篩選及藥效評價

畢秋艷1， 楊曉津2， 馬志強1*， 張小風1， 王文橋1， 韓秀英1

（1.河北省農林科學院植物保護研究所／河北省農業有害生物綜合防治工程技術研究中心，保定 071000；2.中國地質大學長城學院，保定 071000）

摘要采用葉盤漂浮法測定了保護性殺菌劑二硫代氨基甲酸鹽類、咪唑類、吡啶類，內吸性殺菌劑酰胺類、煙酰胺類、甲氧基丙烯酸酯類、三唑類、氨基甲酸酯類、惡唑類及多種復配劑等對葡萄霜霉病菌的毒力，并進行了田間藥效試驗。室內藥劑測定結果表明，當前生產上的主要藥劑和新投入到市場中的部分藥劑對葡萄霜霉病菌表現較高毒力；6種復配藥劑對葡萄霜霉病菌菌株的毒力高于單劑。田間試驗結果表明試驗藥劑均可有效地控制葡萄霜霉病的發生和危害。

關鍵詞葡萄霜霉病菌； 殺菌劑； 毒力； 防效

葡萄霜霉病（grape downy mildew）是葡萄種植中最重要的病害，在我國各葡萄產區均有分布，多發生在雨水較多的地區和年份，在5－6月份開始發生，7－9月為發病盛期。主要危害葉片，也能侵染嫩梢、花序、幼果等幼嫩組織。病害流行年份，病葉焦枯早落，病梢扭曲，發育不良，對樹勢和產量影響嚴重，給葡萄生產造成嚴重的經濟損失［1］。

目前生產上主要依靠化學藥劑進行防治。生產上防治葡萄霜霉病的藥劑主要有保護劑（波爾多液、代森錳鋅、氫氧化銅等）和內吸性殺菌劑及其混劑三大類。某些化學藥劑由于作用位點單一，連續大量使用后產生抗藥性［2-3］，有些藥劑使用后還具有副作用、藥害、污染等問題，已經不能適應現代葡萄產業的發展、不能保證葡萄生產的正常進行，篩選新型高效、安全的殺菌劑并提供合理安全的用藥技術已是葡萄生產中的迫切需求。

本項研究旨在確定葡萄霜霉病有效藥劑以及對葡萄霜霉病的田間控制效果，確定其藥劑應用技術，為生產中選擇防治葡萄霜霉病的高效藥劑提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

獲得田間連續用藥的甲霜靈抗藥菌株，用于新藥劑篩選試驗。

1.2 供試品種

試驗葡萄品種為‘玫瑰香’。

1.3 供試藥劑

85%丙森鋅（propineb）原藥，山東天成生物科技有限公司；80%代森錳鋅（mancozeb）可濕性粉劑，廣家農藥廠；20%氰霜唑（cyazofamid）懸浮劑，山東海利爾化工有限公司；98%氟啶胺（fluazinam）原藥，浙江禾田化工有限公司；95%雙炔酰菌胺（mandipropamid）原藥，沈陽化工研究院；97%甲霜靈（metalaxyl）原藥，沈陽化工研究院；97.1%高效甲霜靈（metalaxyl-M）原藥，先正達（中國）投資有限公司；97.6%烯酰嗎啉（dimethomorph）原藥，河北冠龍農化有限公司；92%氟嗎啉（flumorph）原藥，沈陽化工研究院；95%氟吡菌胺（fluopicolide）原藥，德國拜耳作物科學公司；95%霜脲氰（cymoxanil）原藥，美國杜邦公司；96%啶酰菌胺（boscalid）原藥，巴斯夫歐洲公司；；95%嘧菌酯（azoxystrobin）原藥，南京金土地化工有限公司；250 g／L吡唑醚菌酯（pyraclostrobin）乳油，巴斯夫歐洲公司；50%醚菌酯（kresoxim-methyl）水分散粒劑，陜西省浦城美爾果農化有限責任公司；30%氟菌唑（triflumizole）可濕性粉劑，山東天威農藥有限公司；722 g／L霜霉威鹽酸鹽（propamocarb hydrochloride）水劑，拜耳作物科學有限公司；96%惡霜靈（oxadixyl）原藥，西安近代農藥科技股份有限公司；60%吡唑醚菌酯·代森聯（pyraclostrobin·metiram）水分散粒劑，巴斯夫歐洲公司；75%苯酰菌胺·代森錳鋅（zoxamide· mancozeb）水分散粒劑，美國高文國際商業有限公司；69%烯酰嗎啉·代森錳鋅（dimethomorph· mancozeb）可濕性粉劑，江蘇新沂中凱農用化工有限公司；50%烯酰嗎啉·嘧菌酯（dimethomorph· azoxystrobin）可濕性粉劑，湖南農大海特農化有限公司；60%霜脲氰·嘧菌酯（cgmoxanil·azoxystrobin）可濕性粉劑，美國世科姆公司；20%烯酰嗎啉（dimethomorph）懸浮劑，深圳諾普信農化股份有限公司；50%烯酰嗎啉（dimethomorph）可濕性粉劑，安徽豐樂農化有限責任公司；20%嘧菌酯（azoxystrobin）水分散粒劑，美國世科姆公司；25%嘧菌酯（azoxystrobin）懸浮劑，先正達（中國）投資有限公司；20%烯酰嗎啉（dimethomorph）可濕性粉劑，山東科大生物創業有限公司。

1.4 室內藥劑篩選

1.4.1 孢子懸浮液準備

采集新鮮葡萄霜霉病葉，裝入放冰袋的保溫盒，帶回室內，用壓力0.08 MPa的QWJ－150型空壓機帶動喉頭噴霧器將病葉表面霜霉病菌層用蒸餾水沖洗掉，將其置于放有濕潤濾紙的塑料盒中，用保鮮膜將塑料盒封口，18℃黑暗條件下保濕培養24 h［4］，至產生大量新生孢子囊，蒸餾水沖洗葉片，洗下新鮮孢子囊，2層紗布過濾，以2 000 r／min 5 min離心2次，配制成孢子囊含量1×105～1.5×105個／mL的懸浮液，于4℃［5］冰箱15 min低溫處理后用于接種。

1.4.2 葡萄霜霉病菌對不同類型殺菌劑毒力測定

保護劑測定采用葉盤噴霧法進行［6］。根據葡萄霜霉病菌對藥劑的敏感程度將保護藥劑配成濃度為0.1、0.5、1、5、10、50、100μg／m L，將藥液均勻噴霧于選擇的健康葉片背面，使藥液分布均勻，以液珠不從葉片表面落下為宜。待葉片表面藥液風干后，用打孔器將生長健壯完好的葡萄葉片打成直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤置于預先鋪有兩層濕潤濾紙的培養皿中，用葡萄霜霉病菌株的孢子囊懸浮液接種葡萄葉盤（培養皿直徑9 cm），每皿15個葉盤，每葉盤接1滴（10μL），試驗重復3次。在每天18℃、16 h光照和8 h黑暗條件下培養6～8 d，待對照葉盤發病均勻后進行分級調查發病情況。

治療劑及復配劑測定采用葉盤漂浮法進行［7］。根據葡萄霜霉病菌對藥劑的敏感程度不同，將藥劑配制成系列濃度的藥液，用丙酮將原藥溶解后，加入適量去離子水，將甲霜靈及其他藥劑配制成濃度為0.1、0.5、1、5、10、50、100μg／mL，每皿倒藥液20 mL。用打孔器將生長健壯完好的葡萄葉片打成直徑1.5 cm的葉盤，將葉盤漂浮于藥液表面，再將葡萄霜霉病菌株的孢子囊懸浮液接種葡萄葉盤（培養皿直徑9 cm），每皿15個葉盤，每葉盤接1滴（10μL），試驗重復3次。在每天18℃、16 h光照和8 h黑暗條件下培養6～8 d，待對照葉盤發病均勻后進行分級調查發病情況。

葡萄霜霉病在葉片上的分級標準［8］：

0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的6%～25%；5級，病斑面積占整個葉面積的26%～50%；7級，病斑面積占整個葉面積的51%～75%；9級，病斑面積占整個葉面積的75%以上。

病情指數計算方法：

病情指數＝［∑（各級病葉數×相對級數值）／（調查總葉數×9）］×100；

防治效果（%）＝（對照病情指數－處理病情指數）／對照病情指數×100。

根據上述公式計算病情指數、相對防效，然后利用DPS數據處理軟件，將相對防效換算成幾率值，根據藥劑系列濃度的對數值及該濃度下相對防效的幾率值之間的線性回歸分析，求出藥劑對葡萄霜霉病菌的毒力回歸方程、相關系數及有效抑制中濃度（EC50）等。

1.5 田間藥效試驗

發病前施藥，藥液用量1 800 L／hm2的條件下，發病前第一次用藥，隔7～10 d施一次，連續4次施藥。田間試驗同一藥劑處理及其對照藥劑處理在同一地塊進行，每處理設置4次重復。第4次施藥后進行分級調查發病情況。葡萄霜霉病在葉片上的分級標準和防治效果計算方法同1.4.2所述。

2 結果與分析

2.1 不同類型藥劑對葡萄霜霉病菌的抑制作用

測定結果表明，當前生產上的主要藥劑和新投入到市場中的部分藥劑對葡萄霜霉病菌的甲霜靈抗藥性菌株表現較高毒力；6種復配藥劑對葡萄霜霉病菌菌株的毒力高于單劑，證明了合理復配藥劑的內在關系；應該根據各地抗藥性的狀況合理地用于防治。

藥劑EC50是用來衡量藥劑間毒力大小的重要指標［9］，EC50越小，即該藥劑對病菌的反應越靈敏，其抑制作用越強，反之抑制作用越差。供試藥劑EC50各不相同，毒力大小有很大差異。對病原菌的毒力大小整體趨勢依次為復配藥劑＞治療劑＞保護劑。

毒力回歸方程結果顯示，復配劑斜率值普遍大，即藥劑隨著濃度升高抑菌效果增強的幅度最大［10］，葡萄霜霉病菌對這種藥劑反應敏感，藥劑用量或濃度稍有變化就可以使藥效直線上升或下降。斜率值越小，說明該種藥劑隨著濃度的升高抑菌效果變化不大。復配劑隨著濃度的升高抑菌效果明顯。

表1 保護性殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力1）Table 1 Toxicity of the protective fungicides to Plasmopara viticola

表2 內吸性殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力Table 2 Toxicity of the systemic fungicides to Plasmopara viticola

表3 復配殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力Table 3 Toxicity of the mixtures to Plasmopara viticola

2.2 田間防治效果

試驗藥劑均可有效地控制葡萄霜霉病的發生和危害。試驗過程中發現生產上用來防治葡萄霜霉病較頻繁的酰胺類殺菌劑烯酰嗎啉和甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑嘧菌酯仍具有較好的防效；新型復配藥劑60%吡唑醚菌酯·代森聯水分散粒劑在試驗藥劑中防效表現突出。

表4 20%烯酰嗎啉懸浮劑防治葡萄霜霉病試驗結果1）Table 4 Control efficacy of 20%dimethomorph SC on grape downy mildew by field trials

表5 20%嘧菌酯水分散粒劑防治葡萄霜霉病試驗結果1）Table 5 Control efficacy of 20%azoxystrobin WG on grape downy mildew by field trials

表6 60%吡唑醚菌酯·代森聯水分散粒劑防治葡萄霜霉病試驗結果1）Table 6 Field trials of 60%pyraclostrobin·metiram WG for controlling downy mildew

3 結論與討論

保護劑中丙森鋅、氰霜唑毒力最高，對病菌作用抑制最強；治療劑中雙炔酰菌胺、氟吡菌胺、霜脲氰、吡唑醚菌酯、惡霜靈毒力值小于1，對病菌抑制作用均較強；6種復配劑毒力值均小于1；對病菌抑制作用優于單劑。

田間用藥防治葡萄霜霉病時，建議在發病前進行預防用藥，隔7～10 d施1次，連續4次施藥，降低后期病害發生程度。

葡萄霜霉病菌在田間菌量大、繁殖快，易對殺菌劑產生抗藥性，為減緩葡萄霜霉病單一藥劑抗藥性的產生，不存在交互抗藥性或不同作用機理的藥劑進行輪換、混合或替換使用才能從根本上解決藥劑的抗藥性。復配劑不易產生抗藥性。根據室內篩選的結果，且考慮田間的防效成本，選擇復配劑在田間使用效果最好。建議生產中進一步試驗上述混劑的使用技術。

生產中發現，即使連續和高劑量使用藥劑防治，病菌仍可以再次侵染葡萄新生嫩梢，使病原菌得以生存。最好的管理方法是去除新葉，保護老葉，來減少用藥次數和用藥量。

將內吸劑與保護劑或其他不同作用機理的內吸劑混合使用能擴大殺菌譜，兼治多種病害；延長持效期，減少用藥次數；有時還能獲得增效作用，提高藥效；延緩防治對象對內吸性殺菌劑的抗性產生。

參考文獻

［1］ 曾士邁，楊演.植物病害流行學［M］.北京：中國農業出版社，1986.

［2］ 袁善奎，周明國.植物病原菌抗藥性遺傳研究［J］.植物病理學報，2004，34（4）：289-295.

［3］ 閆秀琴，劉慧平，韓巨才.我國植物病原菌抗藥性研究進展［J］.農藥，2001，40（12）：4-6.

［4］ Davide Gobbin，Ilaria Pertot，Cesare Gessler.Identification of microsatellite markers for Plasmopara viticola and establishment of high throughput method for SSR analysis［J］.European Journal of Plant Pathology，2003，109（2）：153-164.

［5］ Marie-France Corio-Costet，Marie-Cécile Dufour，Jérémy Cigna，et al.Diversity and fitness of Plasmopara viticola isolates resistant to QoI fungicides［J］.European Journal of Plant Pathology，2011，129（2）：315-329.

［6］ 杜興蘭.葡萄霜霉病和白粉病生物防治的研究［D］.保定：河北農業大學，2008.

［7］ 喬桂雙，王文橋，韓秀英，等.兩種候選甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對黃瓜霜霉病的作用方式［J］.植物保護學報，2009，36（2）：173-178.

［8］ 方中達.植病研究方法［M］.第3版.北京：中國農業出版社，1998.

［9］ 劉霞，路永貴，閆當萍.EXCEL在農藥毒力測定中的應用［J］.中國農學通報，2009，25（19）：206-208.

［10］田麗麗，梁巧蘭，徐秉良，等.切花百合枯萎病菌室內藥劑篩選及田間防治效果［J］.甘肅農業大學學報，2008，43（5）：113-116.

中圖分類號：S 436.631.1，S 482.2

文獻標識碼：B

DOI：10.3969／j.issn.0529-1542.2014.03.039

收稿日期：2013-06-26

修訂日期：2013-07-29基金項目： 公益性行業（農業）科研專項（201203035）

*通信作者E-mail：mazhiqiang304＠163.com

Evaluation of fungicides for control of grape downy mildew caused by Plasmopara viticola

Bi Qiuyan1， Yang Xiaojin2， Ma Zhiqiang1， Zhang Xiaofeng1， Wang Wenqiao1， Han Xiuying1
（1.IPM Centre of Hebei Province，Institute of Plant Protection，Hebei Academy of Agricultural and Forestry Sciences，Baoding 071000，China；2.China University of Geosciences Great Wall College，Baoding 071000，China）

AbstractEfficacy of fungicides，including the protective fungicides of dithiocarbamates，imidazoles，pyridines，the systemic fungicides of amides，nicotinamide，strobilurins，three azoles，carbamate，soxazoles，and 6 mixtures of fungicides，against grape downy mildew（Plasmopara viticola）was evaluated by leaf disc test and field trials. Leaf disc test showed that all selected fungicides had good efficacy and the mixtures were more efficient than single fungicide.Field trials demonstrated that all fungicides from pesticides market were effective against the grape downy mildew.

Key wordsPlasmopara viticola； fungicides； toxicity； control effect