方劑配伍增加中藥方劑活性
——一項來自毒理學(xué)的實驗研究*

史鵬程，沈洪昇，胡人杰，姚 嬙

（1．天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心，天津 300020；2天津市人民醫(yī)院，天津 300121）

方劑配伍增加中藥方劑活性
——一項來自毒理學(xué)的實驗研究*

史鵬程1，沈洪昇1，胡人杰1，姚 嬙2

（1．天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心，天津 300020；2天津市人民醫(yī)院，天津 300121）

[目的]比較不同制備方法對清熱解毒方水煎劑毒性的影響。[方法]清熱解毒方中各味藥材分別制備成不同待測樣品：合煎樣品、分煎樣品及單味藥給藥樣品，采用簡化機率法測定各樣品對小鼠灌胃給藥的半數(shù)致死量（LD50），并比較測定結(jié)果。[結(jié)果]所測得合煎樣品和分煎樣品的LD50分別為（91．26±7．92）g/kg和（111．47±9．12）g/kg，與合煎樣品比較，分煎樣品的毒性顯著降低（P＜0．05），且動物死亡時間及死前表現(xiàn)不同。單味藥樣品給藥后多未出現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)。[結(jié)論]與單味中藥比較，復(fù)方配伍確能提高中藥的生物活性。

清熱解毒方；合煎；分煎；LD50

中藥是中國傳統(tǒng)文化的瑰寶，是中醫(yī)學(xué)極其重要的傳承，擁有廣闊的市場前景和極大的社會價值。除少數(shù)中藥單味使用外，方劑是中醫(yī)治療疾病的主要用藥形式，也是祖先留給中華民族的重要寶藏[1]。在對方劑配伍的研究中發(fā)現(xiàn)許多方劑中具有明確生物活性的成分含量會隨方劑中各藥物的配伍變化而出現(xiàn)明顯的變化，其藥理活性也會隨之發(fā)生變化[2]。中藥成分復(fù)雜，復(fù)方藥物合煎時，各化學(xué)成分間可能會相互影響、相互作用從而導(dǎo)致藥物成分及溶解度、藥效學(xué)、臨床療效等多方面的變化[3]。本實驗室在對清熱解毒方（白花蛇舌草、半枝蓮、生地、蒲公英、魚腥草）的毒理學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，由此五味中藥組成方劑的水煎劑，動物灌胃給藥顯示出相當(dāng)?shù)亩拘裕茨軌驕y定出半數(shù)致死量（LD50），這在以往的實驗室實踐中很少見到。為此，筆者對其做了進一步的探討。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 KM小鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量19～21 g，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動物實驗中心。生產(chǎn)許可證號：SCXK（軍）2009—003。2級實驗動物，屏障系統(tǒng)環(huán)境，飼喂普通顆粒飼料。

1.1.2 藥材與處方 清熱解毒方系臨床自擬方，由白花蛇舌草（Oldenlandia diffusa Willd．Roxb．）、半枝蓮（Scutellaria barbata mongdicum D．Don）、生地（Rehmannia glutinasa Libosch．）、蒲公英（Taraxacum Hand．－Mazz．）、魚腥草（Thunb．）組成（比例為3∶3∶2∶1∶2），均為市售藥材。藥材由天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所藥物制劑中心朱永智鑒定，于天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所腫瘤藥物研發(fā)中心實驗室保存。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥物制備 分別制備3種給藥樣品，合煎樣品：取5種中藥飲片置煎煮容器內(nèi)，加藥材量8倍冷水浸泡過夜，文火煮沸30 min，過濾，濾渣加6倍量水繼續(xù)煎煮，文火煮沸20 min，過濾。合并2次煎出液，于水浴上濃縮至適當(dāng)濃度，得到合煎樣品。分煎樣品：分別取5種中藥飲片置容器內(nèi)，按上述方法單獨進行煎煮，濃縮。將濃縮物按處方中各藥材比例混合，并配制成與合煎藥物相同濃度，得到分煎樣品。單煎樣品：各味藥物單獨煎制，各自濃縮后得到單煎樣品[4]。

1.2.2 實驗方法 采用簡化機率法測定樣品的LD50[5]，依據(jù)預(yù)實驗結(jié)果設(shè)計給藥劑量，k值取0．8，灌胃給藥，給藥后連續(xù)觀察14 d，記錄死亡情況。

1.3 數(shù)據(jù)處理 急性毒性實驗采用簡化機率法計算，組間比較，采用兩獨立樣本t檢驗，P＞0．05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 合煎及分煎樣品急性毒性實驗 按1．2．所述方法制備樣品并給藥，給藥后觀察并記錄動物死亡情況（表1），分別計算合煎樣品及分煎樣品LD50。兩組的LD50分別為（91．26±7．92）、（111．47±9．12）g/kg，合煎樣品的毒性明顯高于分煎樣品的毒性（P＜0．05）。

表1 合煎樣品及分煎樣品急性毒性實驗結(jié)果Tab.1 The results of acute toxicity test of mixed-decoction and single-decoction

其中接受合煎樣品死亡的動物，大多死亡于給藥后2 h，個別動物死亡時間稍晚，但死亡時間不超過給藥后4 h。其中132．00 g/kg劑量組（最高給藥劑量組）動物給藥后2 h內(nèi)死亡10只（其中多在15 min內(nèi)死亡），4 h后其余兩只先后死亡。死亡迅速（15 min內(nèi)）的動物死前均表現(xiàn)出跳躍、抽搐等神經(jīng)興奮癥狀。死亡延遲的動物（主要為給藥劑量較低者）則主要表現(xiàn)出安靜少動、反應(yīng)遲鈍、行動遲緩等神經(jīng)功能抑制的表現(xiàn)。而且，表現(xiàn)為神經(jīng)興奮度增高的動物百分之百死亡，表現(xiàn)為神經(jīng)興奮度減低的動物部分死亡，部分可以存活，存活的動物給藥后24～48 h恢復(fù)常態(tài)。接受分煎樣品死亡的動物與接受合煎樣品的動物相比較，動物死亡前僅表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)抑制癥狀，未見出現(xiàn)相應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)興奮性表現(xiàn)，且動物死亡速度亦較合煎樣品給藥組稍緩，142．47 g/kg劑量組給藥后2 h內(nèi)動物死亡10只（大多死于給藥后30 min左右），4 h后死亡1只，另外一只則一直存活到實驗結(jié)束。出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀的小鼠部分死亡、部分可存活，且在給藥后8 h可恢復(fù)常態(tài)。另外發(fā)現(xiàn)，91．18 g/kg劑量組中1只存活的雌性小鼠在接受給藥后1．5 h出現(xiàn)一過性腹瀉，其余動物未見異常表現(xiàn)。

2.2 單煎樣品急性毒性實驗 依據(jù)清熱解毒方中5味藥材在方劑中所占比例（3∶3∶2∶1∶2）進行拆分，分別按照單味藥物在處方中所占比例劑量（LD50）給藥。給藥后觀察并記錄動物的死亡情況，各味藥物給藥劑量及動物死亡情況詳見表2。表2顯示給藥后15 min，僅半枝蓮組有1只動物死亡，除此之外，其余各給藥組動物均全部存活，亦未見任何異常表現(xiàn)。

表2 單味藥急性毒性實驗結(jié)果Tab.2 The results of acute toxicity test of single-drugdecoction

3 討論

方劑在中醫(yī)藥物治療中具有極其重要的意義，根據(jù)組方內(nèi)的每一味中藥的性味歸經(jīng)及其功效，按照君、臣、佐、使的原則進行組方，其最終目的是發(fā)揮組方內(nèi)每一味中藥之間的協(xié)同和相加作用增加藥效，或發(fā)揮拮抗作用降低毒性，即達到“增效減毒”的治療目的。筆者在對幾個治則不同的抗腫瘤方劑進行急性毒性的實驗觀察中發(fā)現(xiàn)，其中1個由性味均屬無毒的中藥組成的方劑，經(jīng)水煎制備后產(chǎn)生了明顯的致死性毒性（相比較其余方劑均未出現(xiàn)明顯的毒性），這一現(xiàn)象確屬少見，為此，筆者對其做了進一步的探討。

該方劑系治則為清熱解毒的臨床自擬方，主要用于證屬濕熱聚毒的腫瘤患者，方中五味中藥性味均屬無毒[6-7]（單味藥物煎劑給藥的實驗數(shù)據(jù)亦顯示，按照組方劑量給藥，除半枝蓮出現(xiàn)1只動物死亡外，其余藥物確實沒有毒性反應(yīng)）。但將5味中藥組方后水煎樣品（合煎樣品）對小鼠灌胃給藥顯示出了致死性的毒性LD50=（91．26±7．92）g/kg。將5味藥物單獨煎制，將單獨煎制的樣品混勻后再次進行急性毒性實驗，該分煎混合的給藥樣品（分煎樣品），同樣可以對小鼠產(chǎn)生致死性毒性，但是與前述煎劑相比較，毒性明顯降低，LD50=（111．47±9．12）g/kg。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，兩次測定結(jié)果存在顯著性差異（P＜0．05）。最后，按照分煎樣品的LD50劑量與各味藥物在方劑中所占比重，將5味藥分別單獨煎制的樣品（單煎樣品）分別給小鼠灌胃，觀察其毒性反應(yīng)，其結(jié)果顯示，除了半枝蓮組出現(xiàn)了1只動物死亡外，未見其它動物死亡，亦未見異常表現(xiàn)。為什么合煎樣品、分煎樣品、單煎樣品表現(xiàn)出不同的毒性（或生物活性呢）？筆者推測其原因大致主要來自2個方面。其一，藥物在煎制過程中其各自所含有的化合物之間產(chǎn)生了某些化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生了新的活性物質(zhì)，或使原活性物質(zhì)的煎出量發(fā)生了變化，最終導(dǎo)致其毒性發(fā)生變化。其二，藥物活性之間的相加或協(xié)同作用。其中，合煎樣品毒性增強的主要原因更可能歸結(jié)于“化學(xué)反應(yīng)”，由于在合煎過程中加熱的條件下，可能對反應(yīng)起到了催化的作用，從而使得合煎樣品的“化學(xué)反應(yīng)”比分煎樣品更加充分，因此毒性更大。合煎樣品給藥后動物死亡前表現(xiàn)出的狀態(tài)與分煎樣品不同，呈現(xiàn)出神經(jīng)興奮性表現(xiàn)，分煎樣品各組別則呈現(xiàn)出靜臥少動等神經(jīng)功能抑制的表現(xiàn)。這一現(xiàn)象顯示出合煎樣品及分煎樣品中活性物質(zhì)的含量有所差異或二者中所含的活性物質(zhì)種類不盡相同。此外，以上實驗結(jié)果也證明了該組方的合理性，即組方后增強了藥物的活性，且合煎活性更強。中藥成分復(fù)雜，復(fù)方中藥在不同條件下會發(fā)生不同的反應(yīng)，使得其各成分含量發(fā)生變化或生成新物質(zhì)，從而影響其藥效和毒性等。其他學(xué)者的研究[8-12]也從不同方面證明了這一現(xiàn)象。文章僅介紹了對清熱解毒方毒性研究中發(fā)現(xiàn)的一些現(xiàn)象，對于其發(fā)生的原理和過程以及涉及到的具體物質(zhì)現(xiàn)正在進一步研究和探討中。

[1]年 莉,李慧平,王亞萍，等．對方劑配伍規(guī)律研究的幾點認識[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013,32(3):129-131．

[2]胡人杰．中藥方劑配伍的實驗研究[J]．中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27（1):117-119．

[3]鄧軼淵,高文遠,陳海霞，等．中藥復(fù)方合煎與分煎的差異性研究進展[J]．中草藥，2005,36（12):1909-1911．

[4]李儀奎．中藥藥理實驗方法學(xué)[M]．第2版．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006：119．

[5]徐叔云,卞如濂,陳 修．藥理實驗方法學(xué)[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社,1982:400-404．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版（一部）[S]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010．

[7]宋立人,洪 恂,丁緒亮，等．現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[S]．北京:人民衛(wèi)生出版社,2001．

[8]周思思,馬增春,梁乾德,等．人參附子不同比例配伍對小鼠急性毒性的影響[J]．天津中醫(yī)藥,2013,30（1):43-46．

[9]吳 嬌,李 進,陳 濤,等．葛根—石膏藥對不同配伍比例中有效成分含量變化研究[J]．天津中醫(yī)藥,2013,30(9):557-560．

[10]鐘正靈,梁光義,張麗艷，等．當(dāng)歸六黃湯分煎與合煎樣品中阿魏酸含量的比較[J]．時珍國醫(yī)國藥,2008,19(6):1291-1292．

[11]崔景朝,趙自明．中藥配方顆粒研究進展（II）——中藥單煎與合煎對比研究概況[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(4):240-245．

[12]李德順,李亞清．定喘湯及其拆方治療哮喘藥理作用實驗研究[J]．天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2003,22(1):16-18．

Prescription compatibility can raise activity of Chinese medicine-An experimental research from toxicology

SHI Peng-cheng1，SHEN Hong-sheng1，HU Ren-jie1*，YAO Qiang2
（1.Anti tumor drugs R&D Centre,Tianjin Institute of Medical and Pharmaceutical Science,Tianjin 300020,China;2.Tianjin People's Hospital,Tianjin 300121,China）

[Objective]To compare the effect of toxicity of Qingre Jiedu(clearing heat and detoxification)prescription in different preparation method．[Methods]The drugs contained in Qingre Jiedu prescription were prepared to different samples:single-decoction,mixeddecoction,and single-drug-decoction．The LD50of each sample after intragastric administration was determined in mice by simplified probit method,and the results were compared．[Results]The LD50of mixed-decoction and single-decoction samples were(91．26±7．92)g/kg and（111．47±9．12）g/kg respectively．Compared with the mixed-decoction samples,the toxicity of single-decoction samples was decreased significantly(P＜0．05)．Different death time and different behaviors before death were fund in animals．Single-drug-decoction samples showed no toxic reaction in most animals after administration．[Conclusion]Compared with single-decoction sample and single-drugdecoction sample,compatible prescription has a certain effect of raising the bioactivity of Chinese medicine．

Qingre Jiedu prescription;mixed-decoction;single-decoction;LD50

R223．11

A

1672-1519（2014）09-0567-03

2014-03-25）

（本文編輯：高 杉，張震之）

10．11656/j．issn．1672-1519．2014．09．17

天津市衛(wèi)生局中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合課題項目（07038）。作者簡介：史鵬程（1986-），男，研究實習(xí)員，主要從事中藥藥理學(xué)和腫瘤藥理學(xué)研究工作。

胡人杰，E-mail:renjiehu@163．com。