葡萄糖調節蛋白78在胰腺導管腺癌中的表達及其臨床意義

袁新普，周建平，李 新，高 威，董 明

中國醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，遼寧沈陽 110001

葡萄糖調節蛋白78在胰腺導管腺癌中的表達及其臨床意義

袁新普，周建平，李 新，高 威，董 明

中國醫科大學附屬第一醫院 胃腸外科，遼寧沈陽 110001

目的 探討在胰腺導管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDCA)中葡萄糖調節蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)的表達及臨床意義。方法應用免疫組織化學技術分析30例胰腺癌組織和對應的癌旁組織中GRP78蛋白的表達水平，并分析GRP78的表達與患者臨床病理資料的關系。結果免疫組化結果顯示GRP78在癌組織中表達明顯高于癌旁組織(73.3% vs 23.3%，P＜0.05)。單因素分析發現GRP78高表達的患者預后較差(P=0.009)。Western blot顯示GRP78在中低分化癌細胞中的表達明顯高于高分化癌細胞(P＜0.05)。結論GRP78在胰腺癌組織中高表達，可能參與胰腺癌的發生發展，GRP78高表達可能有助于判斷胰腺癌患者的預后。

胰腺癌；葡萄糖調節蛋白78；預后

胰腺導管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDCA)是一種侵襲性很強、預后很差的惡性腫瘤，5年生存率＜5%[1]。主要由于胰腺癌缺乏典型的早期癥狀，早期又容易浸潤周圍組織、血管、神經，同時對放化療敏感性差，因此探尋有助于早期診斷、輔助治療和判斷預后的分子生物學標記物成為診治胰腺癌新的突破口[2-3]。葡萄糖調節蛋白78(glucose regulated protein，GRP78)作為內質網分子伴侶的重要一員，在蛋白質的正確折疊、轉運及內質網應激中都發揮非常重要的作用[4-6]。目前研究發現GRP78在肝癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、子宮癌、前列腺癌等腫瘤的發生、發展及生物學標記方面同樣發揮非常重要的作用[7-15]。但是有關GRP78在胰腺癌中的表達及其意義，目前國內外尚無報道。本實驗主要通過免疫組化和免疫印跡方法探討GRP78在胰腺癌中的表達，并分析GRP78的表達與患者的臨床病理學資料的關系。

材料和方法

1 資料 收集2006 - 2011年在我院有完整臨床資料的胰腺導管腺癌標本30例，均有癌旁組織作為對照。所有患者術前均未接受放、化療治療，且術后病理診斷為胰腺導管腺癌。30例中，男18例，女12例，平均年齡56.9歲。每位患者均有完整隨訪資料。

2 免疫組化 30例癌組織和30例癌旁組織標本經石蠟包埋連續切片，厚度4 μm。經0.01%枸櫞酸鹽微波抗原修復20 min，3%過氧化氫孵育15 min，消除內源性過氧化氫酶，1∶100稀釋的GRP78 (購自Santa Cruz)一抗4℃過夜，滴加二抗(兔抗羊IgG)稀釋液室溫孵育30 h，現配的DAB進行顯色3 min，蘇木紫復染，脫水封片。于光學顯微鏡下觀察。結果參考文獻[16]評分方法，兩個獨立觀察者分別進行評分：①染色強度，染色弱表達1分，染色強表達2分。②計算陽性細胞所占視野面積的平均百分數，陽性細胞＜5%為0分，陽性細胞數5% ～ 10%為1分，10% ～ 50%為2分，＞50%為3分；上述兩項得分的乘積為分級標準，＞3分記為陽性。

3 統計學方法 采用SPSS19統計軟件，癌與癌旁GRP78表達比較采用Wilcoxon符號秩和檢驗。不同臨床病理學參數患者GRP78蛋白表達比較采用Fisher檢驗。采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗分析隨訪資料。Western blot結果應用Image J軟件取目的蛋白在細胞中表達條帶灰度(吸光度)/ GAPDH灰度值(吸光度值)的對數值，使其呈正態分布資料后，采用配對t檢驗比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

圖 1 GRP78在胰腺癌和癌旁組織中的表達Fig. 1 GRP78 expression levels in pancreatic cancer and its adjacent tissue samples

1 GRP78在胰腺癌和癌旁組織中的表達 GRP78在胰腺癌組織中的表達率73.3%(22/30)，在癌旁組織中的表達率23.3%(7/30)，GRP78在癌組織中的表達明顯高于癌旁組織(P＜0.05)，主要集中于細胞質，在細胞核、細胞膜及細胞外也有少量的表達。在癌或癌旁組織的胰島和導管上皮細胞中，GRP78都有較高的表達。見圖1。

2 GRP78的表達與臨床指標及病理學的關系GRP78在中低分化的癌組織中的表達高于高分化癌組織，但差異無統計學意義。GRP78表達與患者的年齡、性別、腫瘤部位、大小、臨床分期等差異均無統計學意義。見表1。

3 GRP78的表達與患者術后生存的關系 單因素分析發現，在胰腺癌組織中GRP78陽性表達患者術后生存時間208.535 d，比陰性表達患者術后生存時間466.727 d有明顯的縮短，且差異有統計學意義(P=0.009)，見圖2。同時單因素分析發現腫瘤的部位、大小、臨床分期與預后無明確統計學意義。

圖 2 GRP78的表達與患者術后生存的關系Fig. 2 Relation between GRP78 expression and postoperative survival time of pancreatic cancer patients

表1 GRP78的表達與臨床指標及病理學的關系Tab. 1 Relation between GRP78 expression and clinicopathological factors (n, %)

討 論

葡萄糖調節蛋白GRP78最早發現于20世紀70年代末，是由細胞在無糖條件下分泌的一種細胞蛋白[8]。最初發現GRP78主要存在于內質網腔，近來研究發現在線粒體、細胞核、細胞膜及細胞外都有一定程度的表達，是內質網分子伴侶中的重要一員，在促進蛋白質的正確折疊和轉運、錯誤合成蛋白酶體的降解、內質網應激(ER stress)及非折疊蛋白反應(UPR)中發揮非常重要的作用[7]。GRP78在許多成人的組織器官如腦、肺、心臟中表達水平很低，但在腫瘤細胞包括泌尿系統、消化系統、生殖系統、呼吸系統、大腦等腫瘤組織中表達水平卻很高[10-11]。研究證實GRP78在腎癌和胃癌組織中表達明顯高于其周圍正常組織[14-15]。有關GRP78在胰腺癌中的表達目前國內外還沒有報道。GRP78在胰腺癌組織中表達高于癌旁組織，差異有統計學意義(P＜0.05)。GRP78在癌組織中主要表達于細胞的細胞質，在細胞核、細胞膜及細胞外也有一定程度的表達，這與研究一致[10,17]。結合臨床及病理學資料分析發現，GRP78的表達與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、浸潤深度及TNM分期無關，這與GRP78在其他癌組織的報道相符[10,14,17]。有學者研究發現在人肺癌組織中，GRP78在低分化組織中的表達高于中高分化組織[17]。本實驗結果顯示，在胰腺癌中GRP78在中低分化癌組織中的表達高于高分化癌組織，但差異無統計學意義。這可能是樣本量不足、各分化型組織分布不均等原因所致。今后我們將加大樣本量，平衡各型分布進一步明確GRP78的表達與胰腺癌病理資料的關系。

GRP78在腫瘤中的表達與患者的預后有一定關系。在食管癌和腎癌中，GRP78高表達的患者預后較低表達患者差[18-19]。本實驗研究結果顯示，GRP78癌組織中的表達與患者的預后相關，隨GRP78表達的增高，患者的預后變差(見圖2)，其差異有統計學意義(P=0.009)。

綜上所述，本實驗初步研究了GRP78在胰腺癌及癌旁組織中的表達，隨著GRP78與胰腺癌研究的深入，GRP78可能會成為胰腺癌診治新的生物學標記物，GRP78高表達可能有助于判斷胰腺癌患者的預后。

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Expression of glucose-regulated protein 78 in pancreatic ductal adenocarcinoma and its clinical signifcance

YUAN Xin-pu, ZHOU Jian-ping, LI Xin, GAO Wei, DONG Ming
Department of Gastrointestinal Surgery, First Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning Province, China

ZHOU Jian-ping. Email：zjphama@163.com

ObjectiveTo study the expression of glucose-regulated protein 78 (GRP78) in pancreatic ductal adenocarcinoma (PDCA) and its clinical signifcance.MethodsGRP78 expression levels in pancreatic cancer and its adjacent tissue samples from 30 PDCA patients were measured by immunohistochemistry. Relation between GRP78 protein expression levels and clinicopathological parameters of PDAC patients was analyzed.ResultsImmunohistochemistry showed that the GRP78 expression level was signifcantly higher in pancreatic cancer tissue samples than in its adjacent tissue samples (73.3% vs 23.3%, P＜0.05). Univariate analysis displayed that the prognosis was poorer in patients with a higher GRP78 expression level than in those with a lower expression GRP78 level (P＜0.05). Western blot revealed that the GRP78 expression level was signifcantly higher in poorly and moderately differentiated pancreatic cancer cells than in highly differentiated pancreatic cancer cells (P＜0.05).ConclusionHigh GRP78 expression level in pancreatic cancer tissue may participate in the development and progression of PDAC, thus contributing to predicting the prognosis of PDAC.

pancreatic cancer; glucose regulated protein 78; prognosis

R 735.9

A

2095-5227(2014)07-0744-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.07.027

時間：2014-04-01 17:41

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140401.1741.003.html

2013-12-16

遼寧省科技廳科學技術計劃項目(2013225021)

Supported by the Natural Science Foundation of Liaoning Science and Technology Committee(2013225021)

袁新普，男，在讀碩士，醫師。研究方向：胰腺癌的分子生物學研究。Email：yuanxin.pu@163.com

周建平，男，博士，主任醫師，教授，碩士生導師，副主任。Email：zjphama@163.com