乳癖舒片的質(zhì)量標準研究

胡軍林顧承剛吳 寧

（1 湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，湖北 武漢 430064；2 武漢藥谷科技開發(fā)有限公司，湖北 武漢 430070）

乳癖舒片的質(zhì)量標準研究

胡軍林1顧承剛2吳 寧2

（1 湖北省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院，湖北 武漢 430064；2 武漢藥谷科技開發(fā)有限公司，湖北 武漢 430070）

目的建立乳癖舒片的質(zhì)量控制方法。方法用薄層色譜法對乳癖舒片中的丹參、延胡索、土貝母、赤芍進行定性鑒別；采用HPLC法，以芍藥苷為對照品，測定乳癖舒片中赤芍的含量。色譜柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流動相：乙腈-水（12∶88）；檢測波長：230 nm。結(jié)果在薄層色譜中均能檢出丹參、延胡索、土貝母、赤芍；含量測定中芍藥苷線性范圍0.178～1.78 μg（r=0.9999），回收率為100.68%，RSD=0.73%（n=6）。結(jié)論本方法操作簡便，靈敏度高，專屬性和重線性好，可有效地控制乳癖舒片的質(zhì)量。

乳癖舒片；芍藥苷；反相高效液相色譜法；丹參；延胡索；土貝母；赤芍

乳癖舒片由瓜蔞皮、蒲公英、丹參、赤芍、土貝母、柴胡、延胡索等七味中藥組成，由乳癖舒膠囊改變制劑成型工藝而成，具有舒肝解郁，活血解毒，軟堅散結(jié)之功效，用于肝氣郁結(jié)，毒瘀互阻所致的乳腺增生，乳腺炎。原膠囊劑收載于中華人民共和國國家藥品監(jiān)督管理局標準地標升國標外科分冊，標準號：WS-10152-（ZD-0152）-2002[1]。在將原劑型改變劑型的研究過程中，對新制劑的質(zhì)量標準進行了研究，以控制本品的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司），型號P3000，檢測器3000UV；CQ250超聲波儀（上海超聲波儀器廠），硅膠G（青島海洋化工廠），羧甲基纖維素鈉（國藥集團化學試劑有限公司）。乳癖舒片由武漢藥谷科技開發(fā)有限公司提供（批號20090701、20090702、20090703、20090801、20090802、20090803）；芍藥苷對照品（批號110736-200421供含量測定用）、丹參酮ⅡA對照品（批號110766-200402供含量測定用）、延胡索乙素對照品（批號110726-200307供含量測定用）、土貝母苷甲對照品（批號1536-200001供含量測定用）均由中國食品藥品檢定研究院提供，乙腈為色譜純，水為重蒸水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的薄層色譜鑒別[1]

取本品20片，除去包衣，研細，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL使溶解，用乙醚振蕩萃取3次，每次20 mL，預留水層，乙醚液合并，水浴揮干，殘渣用無水乙醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取不含丹參的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對照溶液。取丹參酮ⅡA對照品，用無水乙醇配制成0.5 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（9.5∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干。自然光下觀察，結(jié)果供試品溶液在與對照品溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液無斑點顯現(xiàn)，說明陰性樣品無干擾。見圖1。

2.2 延胡索的薄層色譜鑒別[1]

取2.1項下預留水層，濾過，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～10，用乙醚萃取3次，每次20 mL，預留氨試液層備用，合并乙醚液，水浴上揮干，殘渣用甲醇1 mL溶解，作為供試品溶液。另取不含延胡索的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對照溶液。取延胡索乙素對照品，用甲醇配制成0.5 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B）試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮（9∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，以稀碘化鉍鉀試液顯色。結(jié)果供試品溶液在與對照品溶液色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照溶液無斑點顯現(xiàn)，說明陰性樣品無干擾。見圖2。

2.3 土貝母的薄層色譜鑒別[1]

取2.2項下的氨試液層，加水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 mL，合并正丁醇液，加正丁醇飽和的水震蕩分離3次，每次20 mL，水層棄去，取正丁醇液于水浴上蒸干，殘渣用甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液。另取不含土貝母的自制樣品20片，同供試品溶液的制法制成陰性對照溶液。取土貝母苷甲對照品，用甲醇配制成2 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水（12∶3∶8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，以醋酐-硫酸-乙醇（1∶1∶10）混合溶液顯色，在110 ℃烘烤至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜與對照品溶液色譜在相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性樣品對結(jié)果無干擾。見圖3。

2.4 赤芍的薄層色譜鑒別[1]

取不含赤芍的自制樣品20片，照2.3項下的供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。另取芍藥苷對照品，用甲醇配制成1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取2.3項下的供試品溶液和上述對照品及陰性樣品溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，用三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴灑5%的香草醛硫酸溶液，加熱烘烤至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品溶液色譜與對照品溶液色譜在相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性樣品對結(jié)果無干擾。見圖4。

2.5 芍藥苷的含量測定

2.5.1 色譜條件及系統(tǒng)適應性試驗

色譜柱：Eurospher-100 4.6×150 mm 5 μm；流動相：乙腈-水（12∶88）；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；流速：1 mL/min；進樣量：10 μL；檢測靈敏度：1.0000AUFS；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算應不低于3000。色譜圖見圖5。

2.5.2 對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品適量，以甲醇制成80 μg/mL的對照品溶液。取本品20片，精密稱定，除去包衣，研細，取約0.3 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加稀乙醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，得供試品溶液。另取不含赤芍的自制樣品20片，同法制備陰性對照溶液。

2.5.3 方法學考察

圖1 丹參TLC

圖2 延胡索TLC

圖3 土貝母TLC

圖4 赤芍TLC

圖5 樣品、 對照品、陰性樣品色譜圖

表1 準確度試驗結(jié)果

線性相關(guān)性考察：取芍藥苷對照品，精密稱取17.81 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并至刻度，分別精密吸取1、3、5、7、9、10 μL，注入色譜儀，測定。得回歸方程為y=420439.7x+3117.5（縱坐標為峰面積，橫坐標為芍藥苷的量），相關(guān)系數(shù)為0.9999。結(jié)果表明芍藥苷進樣量在0.1781～1.781 μg范圍內(nèi)與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：精密吸取芍藥苷對照品溶液10 μL，按系統(tǒng)適用性要求，重復測定6次，峰面積測定結(jié)果RSD=0.49%，儀器精密度符合實驗要求。

穩(wěn)定性試驗：分別在0、2、4、6、8、10 h對同—份供試品溶液10 μL進樣測定，測得峰面積結(jié)果的RSD為0.83%（n=6），結(jié)果顯示供試品溶液在10 h的測定時間內(nèi)穩(wěn)定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20090701）6份，按系統(tǒng)適用性要求操作，同時測定樣品含量，測得芍藥苷平均值為6.24 mg/g，RSD（%）=1.14%，顯示方法的重現(xiàn)性符合測定要求。

準確度試驗：取已測得含量的樣品（批號為20090701，含量為6.24 mg/g）6份，分別精密加入濃度為0.952 mg/mL的芍藥苷對照品溶液1 mL，照供試品溶液制備方法配制成加樣供試品溶液，測定每份芍藥苷含量，計算，測得回收率為100.7%，表明方法的準確度良好。結(jié)果見表1。

2.5.4 樣品含量的測定

取6批樣品，除去薄膜衣，研細，取約0.3 g，精密稱定，按前述方法制成供試品溶液和對照品溶液，精密吸取兩種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，按外標法計算芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

①本文建立了乳癖舒片通用的質(zhì)量控制方法，通過對丹參、延胡索、赤芍、土貝母薄層色譜和赤芍含量測定進行質(zhì)量控制，可在一定程度上控制乳癖舒片的質(zhì)量。②目前，中藥材染色現(xiàn)象時有發(fā)生，本文在控制中藥材染色方面有待進一步研究。③本文在丹參的薄層鑒別中，用甲醇為提取溶劑較乙醚提取效率高，提取后的水層可為其余鑒別項利用，減少取樣量，縮短產(chǎn)品檢驗時間。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M]. 2010版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2005:13-109.

R927.2

B

1671-8194（2014）17-0082-02