地喹氯銨含片含量測定分析

劉佳琪

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430010)

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地喹氯銨含片含量測定分析

劉佳琪

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430010)

目的：采用HPLC法測定地喹氯銨含片中的地喹氯銨含量。方法：選用Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(pH3.8)(3∶7)，進樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測波長為240nm。結果：地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系；精度實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.36%；穩定性實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.70%；重復性實驗中，地喹氯銨峰面積RSD為0.99%，均符合要求。結論：采用HPLC法測定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩定性、重復性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

地喹氯銨；HPLC；含量測定

地喹氯銨為非抗生素藥物，其對革蘭氏陽性菌及陰性菌等均具有顯著的抑制作用，還可有效清除真菌及抗酸桿菌，且不會對機體產生刺激作用，臨床常用于治療咽喉細菌感染等[1]。地喹氯銨又名克菌定，是雙季銨鹽表面活性劑的一種，其作用機理為其能與真菌和細菌細胞胞漿膜內的磷酸根產生很強的結合作用，改變細胞膜的通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細胞內代謝物滲出，改變菌體蛋白質性質，進而殺死細菌[2]。目前，測定地喹氯銨含量的常用方法包括毛細管電泳法、共振光散射光譜法、高效液相色譜法及熒光分析法等。本研究在EP5.0(歐洲藥典)的基礎上，對色譜條件進行了改進，有效地將地喹氯銨峰從雜質峰中分離出來，現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津生產的高效液相色譜儀，型號為SPD-10Avp/LC-10ATvp；上海精密科學儀器有限公司生產的紫外-可見光分光光度計，型號為756C；德國Sartorius天平，型號為BT25S；上海大普儀器有限公司生產的精密酸度計，型號為PHS-3C。

1.2 試藥

已烷磺酸鈉、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；抽取3種規格為0.25mg的地喹氯銨含片作為測定對象；對照品為日本明治果生產的含量為99.8%的地喹氯銨(DCWS-65-1)；空白對照為珠海生物化學制藥廠提供的空白輔料。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

選擇Phenomenex/Luna C18(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為甲醇-己烷磺酸鈉溶液(濃度為0.67%，配制方法：于300g純水中加入己烷磺酸鈉2g，完全溶解后，采用冰醋酸將其pH調至3.8)(3∶7)，進樣體積為20μL，流速為1mL/min，檢測波長為240nm。

2.2 對照品溶液制備

稱取適量對照品(稱取前需將地喹氯銨置于105℃下進行干燥，待總重量無變化后方可稱取)，加入磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)，充分溶解后將其稀釋為10μg/mL地喹氯銨溶液，即得。

2.3 樣品溶液制備

取10片待測樣品，將其研磨成粉末，精密稱定0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)適量，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾后即得。

2.4 測定方法

精密吸取樣品溶液及對照溶液各20μL，注入液相色譜儀中，采用外標法，根據樣品峰面積計算地喹氯銨含量。

2.5 專屬性考察

分別取地喹氯銨對照品溶液和空白輔料溶液各20μL，按照上述色譜條件注入液相色譜儀，測定結果表明空白輔料不會干擾樣品的色譜測定結果，如圖1所示。

2.6 線性關系考察

精密稱取干燥后的地喹氯銨對照品9.94mg，采用流動相將其稀釋至100mL(濃度99.400μg/mL)，放入容量瓶中備用。采用移液管分別吸取上述溶液1.5mL、1.25mL、1.0mL、0.75mL、0.5mL，置于10mL容量瓶內，加流動相稀釋至刻度，分別得到14.910μg/mL、12.425μg/mL、9.940μg/mL、7.455μg/mL、4.970μg/mL的地喹氯銨溶液，依次進樣測定。以地喹氯銨濃度(C)為橫坐標，峰面積積分(A)為縱坐標，進行線性回歸，結果表明地喹氯銨在4.970～14.910μg/mL濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

圖1 地喹氯銨空白輔料(上)及地喹氯銨對照品(下)液相色譜

2.7 精密度試驗

取濃度為9.940μg/mL對照品溶液6份，按照上述色譜條件依次進樣，結果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.36%，說明該測定方法具有較高的精密度。

2.8 穩定性試驗

取濃度為9.940μg/mL的對照品適量，分別放置0h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h后進樣測定，結果表明地喹氯銨峰面積RSD為0.70%，說明該對照品溶液在24h內具有較高的穩定性。

2.9 重復性試驗

分別配制6份同批次的地喹氯銨樣品溶液，進樣測定，結果表明地喹氯銨平均含量為標示量的97.9%，峰面積RSD為0.99%，說明該測定方法具有良好的重復性。

2.10 樣品測定

取10片待測樣品，將其研磨成粉末，精密稱取0.25mg，加入適量磷酸-甲醇-水溶液(1∶15∶5)溶解，超聲處理5min，待冷卻后用磷酸-甲醇-水溶液將其稀釋至25mL，搖勻過濾。精密吸取20μL樣品溶液進樣測定，采用峰面積歸一化法計算地喹氯銨含量，結果表明地喹氯銨平均含量為標示量的97.9%，符合要求。見圖2。

圖2 地喹氯銨含片液相色譜

3 討論

地喹氯銨是常用的陽離子表面活性劑之一，其產生的陽離子可改變細胞膜結構及通透性，從而有效抑制病原體的糖酵解和呼吸作用，使細胞內的代謝物滲出，改變菌體蛋白質性質，進而殺死細菌。地喹氯銨對堿金屬離子具有較強的絡合能力，可建立堿金屬離子滲透通道，將離子順利輸送至膜內，從而增加膜內滲透壓，造成細胞膜破損，起到殺菌作用。

3.1 檢測波長選擇[3]

對稀釋后的地喹氯銨溶液進行紫外掃描，波長范圍為200～400nm，結果表明地喹氯銨在240nm波長處吸光度最大，因此選擇240nm為檢測波長。

3.2 流動相選擇

采用國家藥品標準規定的含量測定方法，即流動相為0.005mol/L庚烷磺酸鈉溶液-甲醇-乙腈-三乙胺(20∶60∶20∶0.5)進行含量測定，不論是改變流動相比例、pH值，還是更換色譜柱，地喹氯銨主峰仍不能與溶劑峰分開，因此筆者參照EP5.0的流動相條件，并對流動相比例和pH值進行優選[4]，得出最佳色譜條件為：0.67%己烷磺酸鈉溶液-甲醇(30∶70)。結果表明，采用優化后的色譜條件，主峰與雜質分離效果良好，峰形對稱，保留時間適宜，適用于地喹氯銨含片含量測定。

3.3 耐用性考察

采用多種品牌、不同國家生產的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱測定同一樣品，測定結果間相差較小，說明該法具有較好的耐用性。

綜上所述，采用HPLC法測定地喹氯銨含片中地喹氯銨含量精密度高，能有效分離主峰和干擾峰，且穩定性、重復性及耐用性均較好，可廣泛推廣和使用。

[1] 李超,黃永旺.復方地喹氯銨含片臨床應用[J].天津藥學,2002,14(4):54-55.

[2] 白若琬,李永春,朱建東,等.HPLC法測定洛度沙胺氨丁三醇滴眼液的含量[J].食品與藥品,2005,7(7):42-44.

[3] 張琳,薛榮奇,董金鳳. 地喹氯銨噴霧劑治療急性咽炎30例[J]. 陜西醫學雜志,2006,35(10):1344-1345.

[4] 王敬風.奧美拉唑鈉腸溶片中奧美拉唑鈉含量測定方法的改進[J]. 河北化工,2011,34(1):46-47.

(責任編輯：尹晨茹)

2014-04-29

劉佳琪(1990-)，男，湖北省武漢市中醫醫院藥師，研究方向為醫院藥學。

R927.2

A

1673-2197(2014)16-0028-02