口炎清膠囊的質量控制和穩定性試驗

江 濤，雷 健，邢 茂，楊秋鳳，葛 勤

（中國人民解放軍第三軍醫大學新橋醫院藥劑科，重慶 400037）

扁平苔蘚是發生于口腔黏膜的一種非感染慢性炎癥，病損難愈，給患者造成嚴重的心理壓力［1－2］。我院研制的由赤芍、黃連、麥冬等藥材制成的中藥湯劑，具有解毒消腫、滋陰清熱等作用，臨床用于扁平苔蘚等口腔炎癥，療效較好；但湯劑口感不好，患者服藥依從性差，且水溶液久貯易酸敗，不易攜帶，應用受到一定限制。為解決上述問題，筆者將中藥湯劑制成膠囊。膠囊劑為固體制劑，有效期相對較長，易攜帶，患者依從性較好。為保證制劑質量，本試驗中對口炎清膠囊的制備工藝、質量控制和穩定性進行了研究。

1 儀器與試藥

1200型高效液相色譜儀儀系統（美國Agilent公司）；HWS24型電熱恒溫水浴鍋（上海科技一恒有限公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（重慶市永生實驗儀器廠）；電子天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）；SHH－SDT型綜合藥品穩定性試驗箱（重慶市永生實驗儀器廠）。鹽酸小檗堿（批號為110713－200911）、黃芩苷（批號為110715－201117）、芍藥苷（批號為 110736－201136）對照品，均購自中國食品藥品檢定研究院；黃連、黃芩、麥冬、赤芍等中藥材均購自重慶桐君閣中藥批發有限公司，經重慶醫科大學藥學院劉新教授鑒定為真品；淀粉（曲阜市藥用輔料有限公司，批號為20100201）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司，批號為110916）；口炎清膠囊（自制，批號為 20120109，20120116，20120120）；乙腈為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備

取處方中全部中藥材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇，濃縮，70℃烤成干浸膏。干浸膏粉碎，過80目篩，細粉加入20%淀粉，混勻，90%乙醇制成軟材，制粒，濕顆粒于60℃干燥3 h，20目篩整粒，得干顆粒。干顆粒加1%硬脂酸鎂，混合，0號膠囊填充，即得口炎清膠囊。

2.2 一般質量控制項目

性狀：本品為膠囊劑，內容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦。

水分測定：照 2010 年版《中國藥典（一部）》附錄ⅨH［3］中第一法（烘干法）測定。結果3批口炎清膠囊（批號分別為20120109，20120116，20120120）的含量水分別為 4.7% ，4.2% ，5.1% ，均小于9.0%，符合藥典規定。

裝量差異差異測定：照 2010 年版《中國藥典（一部）》附錄ⅠL［3］10中膠囊劑裝量差異項下方法測定。結果3批口炎清膠囊（批號分別為20120109，20120116，20120120）的裝量差異分別為±6.3%，±5.5%，±5.3%，均小于10%，符合藥典規定。

崩解時限測定：照 2010 年版《中國藥典（一部）》附錄Ⅻ A［3］71中崩解時限檢查法膠囊劑項下方法測定。結果3批口炎清膠囊（批號分別為 20120109，20120116，20120120）的崩解時限分別為 20，23，21 min，均在 30 min內，符合藥典規定。

2.3 薄層色譜法定性鑒別

黃連：取口炎清膠囊內容物2g，加甲醇25mL，加熱回流15min，濾過，濾液補加甲醇至25mL，作為供試品溶液。另取黃連對照藥材0.25 g，同法制成對照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。再按處方比例，取缺黃連的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法［3］34試驗，吸取上述4種溶液各1μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－乙酸乙酯－異丙醇－甲醇－水－三乙胺（3∶3.5∶1∶1.5∶0.5∶1）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液、對照品溶液色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性無干擾，見圖1 A。

麥冬：取口炎清內容物1 g，加鹽酸0.5mL、水10mL，加熱煮沸5min，放冷，三氯甲烷提取3次，每次7mL，分取三氯甲烷液，濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。取缺麥冬的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－丙酮（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至墨綠色斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾，見圖1 B。

黃芩：取本品3 g，加水40mL，超聲30min，加乙醚振搖提取2次，每次50mL，棄乙醚液，剩余溶液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。取缺黃芩的其他各味藥材，按制備工藝加工制成陰性樣品溶液，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯 －丙酮 －醋酸 －水（10∶4∶5∶3）為展開劑，預平衡30min，展開，取出，晾干，噴以5%三氯化鐵乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾，見圖1 C。

圖1 薄層色譜圖

2.4 芍藥苷含量測定［4－6］

2.4.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：HypersilODS柱（150mm×4.6mm，10μm）；流動相：乙腈 －0.1%磷酸溶液（13∶87）；檢測波長：229 nm；流速：1mL ／min；柱溫：室溫；進樣量：20μL。理論板數按芍藥苷峰計算應大于3000。

2.4.2 溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品12.5mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取口炎清浸膏粉2 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加40mL甲醇超聲處理30min，冷卻至室溫，加甲醇至刻度，振搖，過濾，即得供試品溶液。取缺赤芍的其他各味藥材，80%乙醇提取3次，每次2 h，合并提取液，濃縮，70℃烤成干浸膏，粉碎，按供試品溶液制備方法制備缺赤芍的陰性對照品溶液。

2.4.3 方法學考察

專屬性試驗：取2.4.2項下3種溶液，分別進樣20μL，按擬訂色譜條件依法進樣測定，記錄色譜圖。結果陰性對照品溶液對芍藥苷的測定無干擾，見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密吸取0.5 g／L芍藥苷對照品溶液0.1，0.5，1.5，2.5，4.5mL，置 5mL 容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成質量濃度分別為 0.05，0.15，0.25，0.35，0.45 g／L 的溶液。分別吸取20μL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以質量濃度為橫坐標（X）、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝13997X－52.45（r＝0.9999）。結果表明，芍藥苷質量濃度在0.05～0.45 g／L范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取芍藥苷對照品溶液20μL，按擬訂色譜條件重復進樣6次，測定，結果芍藥苷峰面積的RSD為0.75%（n＝6）；連續測定4 d，結果芍藥苷峰面積的RSD為0.68%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取口炎清浸膏粉5份，依法制備供試品溶液，精密吸取20μL，按擬訂色譜條件測定，記錄峰面積。結果芍藥苷峰面積的RSD為1.15%（n＝5），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取同一供試品溶液20μL，按擬訂色譜條件，于 0，2，4，8，24 h 時進樣，依法測定并記錄峰面積。結果芍藥苷峰面積的RSD為0.88%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：取已知芍藥苷含量的口炎清浸膏粉0.1 g共9份，分別置10mL容量瓶中，分別加入0.5 g／L的對照品溶液1.0，1.2，1.5mL，制成低、中、高 3 種質量濃度，分別精密吸取 20μL，按擬訂色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。2.4.4 含量測定

表1 芍藥苷加樣回收試驗結果（n＝9）

分別取3批口炎清膠囊，依法制備樣品溶液，按擬訂色譜條件，精密吸取樣品溶液20μL，進樣測定芍藥苷含量。結果見表2。

2.5 穩定性考察［7］

2.5.1 影響因素試驗

高溫試驗：取口炎清膠囊（批號為20120109），置平皿中，60℃恒溫箱中放置10 d時，于第5，10天時取樣，測定水分、崩解時限、芍藥苷含量。高濕度試驗：取口炎清膠囊（批號為20120109），置平皿中，在25℃ 、相對濕度（75±5）%的恒濕密閉容器中放置10 d，于第5，10天時取樣，測定水分、崩解時限、芍藥苷含量。強光照射試驗：取口炎清膠囊（批號為20120109），置平皿中，放在裝有日光燈的光照箱內，于照度（4500±500）lx條件下放置10 d，于第5，10天時取樣，觀察性狀，測定水分、崩解時限、芍藥苷含量。結果在上述試驗條件下口炎清膠囊內容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項目均符合要求，見表3。2.5.2 加速試驗

表2 口炎清膠囊中芍藥苷含量測定結果（n＝3）

表3 口炎清膠囊的影響因素試驗結果

取 3批口炎清膠囊（批號分別為 20120109，20120116，20120120），模擬臨床用藥包裝（口服藥用高密度聚乙烯瓶，鋁箔封口，瓶內放干燥劑），在溫度（40±2）℃ 和相對濕度（75±5）%條件下放置6個月，在試驗第0，1，2，3，6個月末分別取樣，測定水分、崩解時限、芍藥苷含量。結果口炎清膠囊內容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項目均符合要求，見表4。

表4 口炎清膠囊的加速試驗和長期試驗結果

2.5.3 長期試驗

取 3批口炎清膠囊（批號分別為 20120109，20120116，20120120），模擬臨床用藥包裝（口服藥用高密度聚乙烯瓶，鋁箔封口，瓶內放干燥劑），在溫度（25 ±2）℃，相對濕度（60 ±10）%條件下放置 12 個月，分別于 0，3，6，9，12 個月時取樣，測定水分、崩解時限、芍藥苷含量。結果口炎清膠囊內容物為棕紅色至棕色顆粒，氣香，味微苦，其他檢查項目均符合要求，見表4。

3 討論

藥材產地影響藥材的品質，藥材品質直接影響制劑的質量，產地不同的藥材有效成分含量均有差異［8－9］。同一產地的藥材，也會因采收時間、貯藏、運輸等不同，質量差異很大［9－10］。因此，在制訂制劑質量標準時，首先需對藥材質量進行嚴格控制，保證藥材符合2010年版《中國藥典》的有關規定，這是保證制劑質量的先決條件。

黃芩的鑒別首先參考2010年版《中國藥典（一部）》黃芩項下的薄層色譜鑒別方法，但由于本方為復方制劑，成分復雜，樣品點樣困難，色譜斑點分離不好，背景干擾較大。因此，通過多次試驗，不斷摸索提取方法，調節展開條件及顯色方法，結果所用方法分離良好，斑點清晰，簡便易行，重復性好，可作為該制劑的定性質量控制方法。

本試驗比較了多種流動相，如乙腈－0.02moL／L磷酸二氫鈉、乙腈－0.1%磷酸、乙腈－水、甲醇－水、乙腈－0.5%三乙胺水、甲醇－0.4%磷酸、甲醇－0.05moL／L磷酸二氫鉀的分離效果。結果，乙腈－0.1%磷酸的分離效果最為理想，芍藥苷色譜峰的保留時間適當，分離度高，重現性好。

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