高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷含量研究

趙春燕

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 靈壽 051430)

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高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷含量研究

趙春燕

(神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 靈壽 051430)

目的：采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量。方法：樣品的前期處理方法采取溶劑提取結(jié)合中性氧化鋁的方式進(jìn)行,采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相，柱溫為90℃，流速為0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為233nm，采取外標(biāo)法對(duì)峰面積進(jìn)行定量。通過(guò)HPLC的檢測(cè)方法與蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定黃芪甲苷含量。結(jié)果：通過(guò)采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法，測(cè)定黃芪甲苷在芪黃膠囊中的含量在0.75～7.96μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為99.94%(RSD=0.94%)。結(jié)論：高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法在對(duì)芪黃膠囊中黃芪甲苷含量測(cè)定時(shí)，具有操作準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，能在較短的時(shí)間內(nèi)測(cè)定出芪黃膠囊中黃芪甲苷含量，可為藥品質(zhì)量的檢測(cè)控制提供科學(xué)合理的依據(jù)。

芪黃膠囊；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法；黃芪甲苷；含量測(cè)定

芪黃膠囊主要的中草藥成分由茯苓和黃芪，以及水蛭和地黃等組成[1]。臨床主要功效為生津止渴，養(yǎng)陰益氣，以及泄火清熱等，治療的主要病癥是由氣虛而引起的消渴證[2]。由于該中成藥的組成成分較為復(fù)雜，當(dāng)前，對(duì)于該中成藥的藥物成分的檢測(cè)主要是通過(guò)測(cè)定地黃的含量來(lái)判斷藥物是否合格，存在一定的片面性，對(duì)其他草藥含量的測(cè)定還沒(méi)有建立統(tǒng)一的行業(yè)規(guī)范[3]。為了進(jìn)一步探索測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為臨床藥物檢測(cè)提供更準(zhǔn)確和簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法，根據(jù)多年藥物含量檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為該藥品的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 檢測(cè)儀器與檢測(cè)試藥

1.1 檢測(cè)儀器

本次研究中所使用的儀器主要包括二元梯度泵，島津高效液相色譜儀，SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，紫外檢測(cè)器；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器選用由美國(guó)奧泰科技(中國(guó))有限公司生產(chǎn)的ELSD2000型號(hào)；以及由日本島津生產(chǎn)的LC-solution色譜工作站和電子天平。

1.2 檢測(cè)試藥

由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)研制的芪黃膠囊(國(guó)家批準(zhǔn)文號(hào)：B200306358，規(guī)格：1.5g/粒)；由中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的批號(hào)為120684-200611的黃芪甲苷作為本次研究的對(duì)照品，實(shí)驗(yàn)中所使用的乙腈選用色譜純；實(shí)驗(yàn)中所使用的水為自制的純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相，柱溫為90℃，流速為0.8mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為233nm，采取外標(biāo)法對(duì)峰面積進(jìn)行定量。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取黃芪甲苷實(shí)驗(yàn)所用的對(duì)照藥材各1.5g，將其置于60mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相適量使上述對(duì)照藥材溶解，將其搖勻，稀釋至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取黃芪甲苷兩種對(duì)照藥材各1.5g，將其置于60mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相適量使上述對(duì)照藥材溶解，將其搖勻，稀釋至刻度，即得供試品溶液。

2.4 專屬性試驗(yàn)

取黃芪甲苷對(duì)照品溶液(A)和供試品溶液(B)以及陰性空白樣品溶液(C)，分別進(jìn)樣10μL在上述色譜條件下進(jìn)行，同時(shí)記錄色譜圖。通過(guò)圖譜可以發(fā)現(xiàn)(圖1)，研究當(dāng)中所使用的對(duì)照品與供試品之間在相對(duì)應(yīng)的位置上出現(xiàn)了明顯的色譜峰，還可以看到供試品色譜的中基線相對(duì)較為平穩(wěn)，同時(shí)具有較好的分離度；在該位置上沒(méi)有色譜峰出現(xiàn)的表明是陰性供試品。通過(guò)上述圖譜可以得出高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定黃芪甲苷不受雜質(zhì)對(duì)其的干擾。

2.5 線性關(guān)系考察

通過(guò)采取高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法，測(cè)定黃芪甲苷在芪黃膠囊中的含量在0.75～7.96μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r=0.9997，平均回收率為99.94%(RSD=0.94%)。

圖1 各溶液圖譜

3 討論

目前，隨著糖尿病的發(fā)病率越來(lái)越高，采用芪黃膠囊治療的患者也越來(lái)越多。該中成藥的組成成分較為復(fù)雜，當(dāng)前，對(duì)于該中成藥藥物成分的檢測(cè)主要是通過(guò)測(cè)定地黃的含量來(lái)判斷藥物是否合格，存在一定的片面性，對(duì)其他草藥含量的測(cè)定還沒(méi)有建立統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。因此，采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，對(duì)于今后對(duì)芪黃膠囊有效成分的精確測(cè)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

為了進(jìn)一步探索測(cè)定芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量，為臨床藥物檢測(cè)提供更準(zhǔn)確和簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法[4, 5]。我國(guó)2010年國(guó)家人民衛(wèi)生出版社出版的《中國(guó)藥典》中指出，通過(guò)采取高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測(cè)法可以測(cè)定出芪黃膠囊中黃芪甲苷的含量[6]。在本研究中，分別在紫外分光光度計(jì)上掃描黃芪甲苷對(duì)照品溶液，通過(guò)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，在233nm波長(zhǎng)的狀態(tài)下，黃芪甲苷處均有較大的吸收率，因此，將檢測(cè)波長(zhǎng)選定為233nm，在該波長(zhǎng)的檢測(cè)條件下，色譜峰的形狀較好，同時(shí)還能測(cè)定兩個(gè)組分值。高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法在對(duì)芪黃膠囊中黃芪甲苷含量測(cè)定時(shí)，具有操作準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的優(yōu)勢(shì)，能在較短的時(shí)間內(nèi)測(cè)定出芪黃膠囊中黃芪甲苷含量，可為藥品檢測(cè)的質(zhì)量控制提供科學(xué)合理的依據(jù)。

[1] 郭志輝, 劉鳳清. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定消結(jié)安合劑中黃芪甲苷的含量[J]. 山西醫(yī)藥雜志:下半月版, 2009,38(14):645.

[2] 李翔, 朱臻宇, 朱東亮, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)梯度洗脫法測(cè)定黃芪藥材中黃芪甲苷的含量[J]. 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006,27(3):331-333.

[3] 李曉亮, 邵旭, 牛海軍, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定補(bǔ)陽(yáng)還五苷酮膠囊中黃芪甲苷的含量[J]. 安徽醫(yī)藥, 2010,14(11):1286-1287.

[4] 徐小利, 陳曉虎, 謝靜. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法測(cè)定補(bǔ)中益氣丸(濃縮丸)中黃芪甲苷含量[J]. 中國(guó)藥業(yè), 2008,17(19):34-35.

[5] 湯淏, 崔恩忠, 唐安福, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定氣血雙補(bǔ)口服液中黃芪甲苷的含量[J]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào), 2013,26(3):287-289.

[6] 王鵬, 趙承孝, 李青山, 等. 高效液相色譜-蒸發(fā)光散射測(cè)定蒙古黃芪中黃芪甲苷的含量及其提取工藝的優(yōu)化[J]. 中國(guó)藥物與臨床, 2010,10(2):134-136.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-07-20

趙春燕(1980-)，女，神威藥業(yè)集團(tuán)有限公司助理工程師，研究方向?yàn)樗幬锓治觥?/p>

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1673-2197(2014)21-0021-01