筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定

宋 強，謝 平，李政鑫

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉薩850000；2.西藏自治區藥檢所，西藏 拉薩850000；3.西藏格創藥業有限公司，西藏 拉薩850000)

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筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定

宋 強1，謝 平2，李政鑫3

(1.西藏正源生物科技有限公司，西藏 拉薩850000；2.西藏自治區藥檢所，西藏 拉薩850000；3.西藏格創藥業有限公司，西藏 拉薩850000)

目的：對筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量進行測定。方法：配制不同濃度梯度的苦參素標準品溶液，采用紫外分光光度計法測定其吸光度值，制作標準曲線，根據標準曲線方程求得待測筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量。結果：經檢測求得筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量為59.01μg/mL。結論：該方法簡便、快速、準確，可用于筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量的測定。

筋骨草皮膚抑菌液；砂生槐；苦參素；含量測定

筋骨草皮膚抑菌液是已故西藏自治區著名藏醫專家、西藏自治區藏醫藥研究院院長、西藏自治區藏醫院副院長次仁巴珠教授的臨床經驗方，由苞葉筋骨草、砂生槐、鐵棒錘、大籽蒿等藏藥材組成，對痹癥疼痛、各種神經性疼痛均有明顯緩解作用，對風濕性關節炎、類風濕性關節炎、痛風等紅腫炎癥皮膚具有消炎止痛顯著療效。本文為了增強筋骨草皮膚抑菌液的質量控制，對其所含有的苦參素含量進行了測定。

1 實驗材料和儀器

1.1 實驗材料

筋骨草皮膚抑菌液是本實驗室自主研發的新產品。苦參素標準品來源于中國食品藥品檢定研究院。

1.2 實驗儀器

實驗HF-2.0B 型超聲波循環提取機(上海銳元機械設備有限公司)、UV-2000 紫外-可見分光光度計(上海尤尼柯)與pH計(上海精密科學儀器有限公司)等。

1.3 化學試劑

溴麝香草酚藍、鹽酸、三氯甲烷、氫氧化鈉與95%醫用乙醇均購于雙雙化工。蒸餾水為實驗室自制。

2 實驗方法

2.1 筋骨草皮膚抑菌液及標準品溶液配制

供試品溶液的配制：取實驗室自制的濃度為10mg/mL的筋骨草皮膚抑菌液10mL，用蒸餾水定容至100mL待測。1mg/mL的苦參素標準品溶液的配制：稱取苦參素標準品100mg，溶于100mL蒸餾水中即得。

2.2 苦參素含量測定

本實驗采用紫外-分光光度法對筋骨草皮膚抑菌液中的苦參素含量進行測定。一般情況下，紫外-分光光度法是將溶液調至某一固定酸堿度(配制的標準品溶液)后再對所含的某物質的含量進行測定，然后將所得到的結果作為衡量標準進行比較。 鑒于此，本實驗在pH7.6條件下，在220nm 波長處測定苦參素標準品的吸光度值(A值)，然后制成標準曲線，求出A值與苦參素含量的關系。測定筋骨草皮膚抑菌液在220nm 波長下的A值后，將其代入到標準曲線關系式中，即可得出筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量。

2.2.1 苦參素標準曲線繪制 采用微量進樣器依次吸取制成的1mg/mL苦參素標準品溶液0、20、40、60、80μL，分別加入到50mL的磨口錐形瓶中，將其置于80℃水浴中進行蒸干，加入pH7.6的1.75×10-4mol/L溴麝香草酚藍緩沖溶液5.5mL，然后加入氯仿5.5mL，閉塞劇烈振搖3.5 min，分別倒入50mL的分液漏斗中，靜置1.5h，當氯仿層與水層之間完全分層之后，打開分液漏斗開關，放掉水層，將氯仿層放入準備好的磨口試管里，采用紫外-可見分光光度計于220nm 波長下測定準備好的標準樣品的吸收度(A值)。將測得的吸收度(A值)作為縱坐標，苦參素標準品的濃度作為橫坐標，采用Excel 2010軟件繪制出標準曲線。

2.2.2 筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定 空白管測定：取40μL蒸餾水置于容量為50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚藍緩沖液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波長處采用紫外-分光光度計測定樣品的吸光度值(A值)，即為A0。取配制好的筋骨草皮膚抑菌液40μL置于容量為50mL的三角瓶中，加入溴麝香草酚藍緩沖液5.5mL使PH=7.6，再加入氯仿5.5mL，在220nm 波長處采用紫外-分光光度計測定出A值，減去A0即為樣品的吸光度值(A值)，將A值代入到標準曲線方程中便可以求出其中所含有的苦參素含量。

3 實驗結果

3.1 標準曲線制作

苦參素標準曲線見圖1。

圖1 苦參素的標準曲線

3.2 筋骨草皮膚抑菌液中苦參素含量測定結果

經過三次平行檢測后求均值，結果顯示樣品A=0.55。代入到標準方程中求得筋骨草皮膚抑菌液中苦參素的含量為59.01μg/mL。

4 討論

苦參素是一種生物堿，又名氧化苦參堿、注射用苦參素等，是從砂生槐子、苦豆子等藥材中提取出來的一種生物堿。苦參素注射液現已在臨床上廣泛使用[2]。目前，很多植物與中藥中均發現有苦參素的存在，因此為了中藥的全面開發與利用，有必要檢測其所含有的苦參素的含量。在藥典[3]中，苦參素含量的測定通常可以采用比色法、薄層掃描法、HPLC 法和高效毛細管電泳法等進行測定。資料顯示，有人采用高效液相色譜法測定了苦參的根、莖、葉中所含有的苦參素含量，結果顯示苦參素在根中的含量較多，莖中含量最少。有學者于2005年采用高效液相色譜法測定苦參素注射液中所含有的苦參素含量，結果顯示該方法簡便，重現性好，可用于苦參素的含量測定。有學者于2004年建立了苦參素含量的高效液相色譜測定方法，結果顯示220nm為苦參素的測定波長，且采用高效液相色譜測定苦參素方法穩定可靠[4]。另有學者于2005年也建立了采用高效液相色譜法測定苦參素膠囊中的苦參素含量的方法，結果顯示該法可靠性較強，可以用于苦參素的質量控制。另有學者于2012年建立了采用HPLC法測定苦參素中氧化苦參堿含量的方法，結果顯示HPLC法可以用于測定苦

參素中氧化苦參堿的含量，且其準確性較強，專屬性較好，靈敏度比較高，非常適用于苦參素中氧化苦參堿的含量測定[5]。縱觀這些研究發現，HPLC是一種檢測苦參素含量的較好方法，但是其費用高、硬件要求高，而紫外分光光度計法費用低，且比較穩定，因此比較實用。

砂生槐是西藏特有高原生物資源，在藏語中稱為“吉瓦”，或稱為西藏狼牙刺，屬于豆科槐屬，為多年生灌木植物。該植物生長在海拔2 800～4 400m的雅魯藏布江中段流域中的山坡、河谷與沙灘上。西藏砂生槐資源儲存量大，為當地老百姓的一種薪火植物。據中國科學院考察發現，經估算砂生槐生長面積約在200萬畝以上，每年可生產出種子3～6萬噸左右。砂生槐種子屬于藏醫常用藥材，收載于《部頒標準 藏藥》(1995年版)，藏醫認為該藥物具有一定的消炎解毒、催吐的功效，因此在藏醫中常被用于治療濕熱黃疸、白喉、痢疾、赤巴病、消化不良、蟲病等病。現代研究證明砂生槐含有的生物堿活性成分主要包括氧化苦參堿(Oxymatrine，C15H24N2O2)、苦參堿(Matrine，C15H24N2O)，其中氧化苦參堿又名苦參素。蘭州大學生命科學院李玉祥等人曾報道，砂生槐種子中被檢測出含有17種氨基酸，且總量均高達24.53%，分別是西藏小麥和青稞的1.57倍和2.55倍。同時，砂生槐原植物是典型的深根樹種，防沙固沙能力很強，對西藏生態保護具有重要生態價值。砂生槐主根穿透力極強，平均滲入地下3m，側根在距地表0.7～1.5m處形成了穩定的固沙層，是很好的固沙植物。砂生槐生物堿是醫藥中間體，也是消毒劑與生物農藥的重要原料，西藏正源生物科技有限公司已建成砂生槐生物堿生產線，對砂生槐產業發展具有積極示范意義。

[1] 張勝, 趙墾田, 向瑞.西藏砂生槐研究綜述[J]. 內蒙古林業科技， 2009，35(1): 57-59.

[2] 狄天云, 張蘆燕, 王坤. HPLC法測定苦參素中氧化苦參堿含量的方法學研究[J]. 寧夏醫學雜志, 2013, 35(8): 714-715.

[3] 中華人民共和國藥典委員會. 中國藥典[S]. 北京：中國醫藥科技出版社, 2010: 188-189.

[4] 陳玉華.高效液相色譜法對苦參素注射液的含量測定[J]. 中醫藥學報, 2008, 36(6): 41-42.

[5] 張萍，楊璐，王耀欣.高效液相色譜法HPLC測定自采苦參根莖和根中5個生物堿的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(3):512-513.

(責任編輯：魏 曉)

2014-03-31

宋強(1979-)，西藏正源生物科技有限公司質量工程師、執業藥師，研究方向為藏藥新藥和傳統藏藥的二次研究與開發。

R284.2

A

1673-2197(2014)13-0029-02