蝴蝶蘭叢生芽組織培養的研究

華海霞

摘要

采用1/2MS培養基，以蝴蝶蘭果莢為外植體進行快速繁殖的研究。對蝴蝶蘭快速繁殖各階段的條件進行了優化，結果表明，最佳外植體為果莢，培養基的最適pH為5.8;各階段最佳培養基濃度，誘導原球為1/2MS+2.0 mg/L 6BA+0.5 mg/L NAA，原球莖增殖為1/2MS+3.0 mg/L 6BA + 0.2 mg/L NAA，誘導原球莖分化為1/2MS+1.0 ?mg/L 6BA + 0.2 ?mg/L NAA，誘導生根為1/2MS+ 0.6 mg/L IBA。此外，培養基中還需加入10%的香蕉泥上清液、蔗糖2%、瓊脂0.8%、活性炭2.0 g/L效果最好。

關鍵詞 蝴蝶蘭;叢生芽;組織培養

中圖分類號 S682.31 ?文獻標識碼

A ?文章編號 0517-6611（2014）34-12059-02

蝴蝶蘭是國際上最具有商業價值的四大觀賞熱帶蘭之一。但其種子無胚乳，自然條件下很難萌發，用常規的無性繁殖，增殖速度慢，難以滿足市場的需求，因此研究蝴蝶蘭的快速繁殖途徑具有重要意義。用組培方法直接采用無菌幼苗誘導原球莖，具有取材方便、操作簡單、繁殖系數高等優點，能在短時間內大量培育蝴蝶蘭。筆者分別以蝴蝶蘭的果莢、莖尖、葉片3種外植體為組織培養材料，采用1/2MS培養基，其配制時將MS培養基的大量元素減半，其他組成不變[1]，對蝴蝶蘭叢生芽組織培養進行了研究。

1 材料與方法

1.1 原球莖的誘導增殖與繼代培養 將原球莖在未分化時切開進行繼代培養。原球莖不宜切得過小，2～3個為宜，一般30 d左右須轉接1次，這樣既可以擴大繁殖系數，也可以有效地抑制培養基褐化。在1/2MS培養基中添加1.0、1.5、2.0、2.0、3.0 ?mg/L 6BA和0.2、0.2、0.4、0.2、0.2 mg/L NAA，組成5個處理，比較增殖結果，確定最佳的激素濃度。

1.2 原球莖的分化

將原球莖接種到分化培養基上，可進一步誘導其分化，長出幼芽，設計0.5、0.5、1.0、1.0、1.5 mg/L 6BA和0、0.5、0.2、0.5、0.2 mg/L的NAA組合，比較原球莖的分化情況，得出最佳激素濃度配比[2]。

1.3 誘導生根 將具有2～3片小葉的大芽接入生根培養基中，進行生根誘導，分化形成完整的植株。分別設定0.2、 0.5 、1.0 ?mg/L IBA和0.2、 0.5及 1.0 mg/L NAA處理，研究其對生根的影響。培養28 d后觀察并計算生根率[3]。

1.4 煉苗與移栽

當蝴蝶蘭幼苗長至3～4片葉、4～5條根，且形體健壯時，打開封口膜在室溫下煉苗7 d，栽培介質宜選水苔，其提前消毒浸泡4 h[2]。移栽時將小苗輕輕夾出培養瓶，洗凈根部培養基，用0.1%的高錳酸鉀水溶液浸泡5 min，自然晾干后移栽。注意控制栽培環境，溫度保持在25～29 ℃，相對濕度保持在80%，低光照。14 d后，逐步提高光照強度。30 d后轉入常規栽培管理，成苗率可在85%以上。

2 結果與分析

2.1 原球莖的誘導

2.1.1 激素濃度對原球莖誘導的影響。

以果莢的種胚為外植體進行原球莖誘導，采用1/2MS培養基，6BA和NAA的濃度見表1[4]。

由表1可知，NAA對原球莖誘導的影響不大，而6BA的影響顯著。隨著6BA濃度的增加，原球莖增殖數量增多，顆粒也飽滿，當6BA 2.0 mg/L、NAA0.5 mg/L時，原球莖形態最佳。而當6BA超過2.0 mg/L時，增殖量雖然增加，但顆粒變小，顏色也開始由綠變黃。研究認為，低濃度6BA更有利于原球莖的增殖。NAA對原球莖增殖分化影響不明顯。低濃度的NAA對原球莖增殖有促進作用，高濃度的則不利[5]。所以原球莖誘導的最佳激素濃度為6BA 2.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L。

表1 各激素組合誘導原球莖的結果比較

編號 6BA

mg/L NAA

mg/L原球莖的形態

①0.50.2 顆粒小，數量少，顏色發黃

②0.51.0顆粒小，數量少，顏色微黃

③1.00.2顆粒中等，數量少，顏色微黃

④1.01.0顆粒中等，數量少，顏色微綠

⑤2.00.2質量中等，數量多，顏色鮮綠

⑥2.00.5顆粒大，數量多，顏色翠綠

⑦3.00.2顆粒小，數量多，顏色微綠

⑧3.00.5顆粒小，數量多，顏色微黃

2.1.2

蔗糖濃度對原球莖誘導的影響。

蔗糖作為培養基中的碳源，既為培養基提供能源物質又起到調節滲透壓的作用。試驗中蔗糖濃度分別為1.0%、2.0%、3.0%，新增原球莖的個數分別為54、80、35，原球莖形態分別為顆粒中等，顏色微綠;顆粒大，顏色鮮綠;顆粒中等，顏色微黃。可見添加1.0%和2.0%蔗糖時，新增原球莖數為54、80個，且原球莖呈綠色、顆粒狀。當蔗糖濃度增加到3.0%時，此時培養基滲透壓較高，前期不利于原球莖的誘導。故最佳的蔗糖濃度應為2.0%。

2.2 原球莖的增殖

選取1.0、1.5、2.0、3.0 mg/L的6BA和0.2 mg/L的NAA組合（分別為1、2、3、4號培養基），原球莖的增殖快慢比較結果：1.5～2.0 mg/L的6BA有利于原球莖的增殖，繁殖速度較快，增殖數量較多，2.0 mg/L時效果最佳;濃度超過2.0 mg/L時，不利于其增殖，繁殖速度慢。NAA對原球莖的增殖作用不明顯，但低濃度的NAA有協同作用[6]。所以最佳原球莖增殖培養基為 1/2MS+ 6BA 2.0 ?mg/L+ NAA 0.2 mg/L。 不同激素濃度的4種培養基對原球莖增殖的影響見圖1。

注：a.1號培養基;b.2號培養基;c.3號培養基;d.4號培養基

圖1 不同激素濃度對原球莖增殖的影響

2.3 原球莖的分化增殖

原球莖的分化及增殖所需6BA和NAA的濃度相對較原球莖誘導及增殖的濃度要低，且兩者的比值也小。6BA與NAA的濃度組合及分化結果見表2。

由表2可知，原球莖的增殖與分化主要取決于6BA濃度的大小。低濃度的6BA有利于分化，6BA濃度超過2.0 mg/L時，不促進增殖。NAA的作用亦不顯著，但不加入NAA時，原球莖也難以分化出芽。所以最佳原球莖分化激素濃度為6BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L。不同激素濃度處理對原球莖分化結果見圖2。

表2 不同激素濃度對原球莖分化的影響

編號6BA∥mg/L ?NAA∥mg/L觀察結果

①0.50極少數分化

②0.50.5少數分化

③1.00.2完全分化

④1.00.5多數分化

⑤1.50.2部分增殖

⑥2.00.5多數增殖

圖2 不同激素濃度對原球莖分化的影響

2.4 誘導生根

2.4.1 不同激素對誘導生根的影響。選用IBA和NAA 2種激素進行誘導生根，培養基組成及生根情況見表3。

由表3可知，IBA和NAA均能誘導生根，但兩者相比，IBA誘導生根的效果比NAA更好，生根率高達90%。所以最佳誘導生根的培養基為1/2MS外加激素IBA。

表3 誘導生根的結果比較

編號基本培養基IBA

mg/L生根率

%平均根數

條

①1/2MSIBA 0.2502～3

②1/2MSIBA 0.5904～5

③1/2MSIBA 1.0843～4

④1/2MSNAA 0.2402～3

⑤1/2MSNAA 0.5633～4

⑥1/2MSNAA 1.0582～3

2.4.2

不同濃度的IBA對誘導生根率的影響。由表4可知，幼苗開始生根天數隨IBA濃度的增加而縮短，IBA濃度為0.4～0.6 mg/L時，隨IBA濃度的增加，組培苗的生根率、每株根數增加。當IBA濃度超過0.6 mg/L時生根率開始下降。綜合比較，以IBA 0.6 mg/L組培幼苗的生根效果最好，為28 d左右，根數平均有4～5條，根長達3.5 cm，小苗生長發育正常。

2.5 煉苗與移栽

蝴蝶蘭對溫度要求比較嚴格，最適栽培溫度為白天25～28 ℃，夜間18～10 ℃，蝴蝶蘭不適于強烈陽光下生長，夏天要用遮陽網遮蔽陽光;基質選用水苔作基質的盆栽法，主要適用多孔塑料盆，盆高最好小于直徑，盆下部用小塊泡沫填充以利排水，上面用水苔填充，將小苗栽植于盆中，切不可壓得太緊，以防爛根;蝴蝶蘭在溫度適宜條件下生長迅速，因此，其需肥量比其他蘭花稍多，主要以液肥為主，春天適當多施，夏秋少施。

表4 不同濃度IBA的誘導生根的比較

IBA

mg/L生根率

%平均根

數∥條根長

cm開始生根

天數∥d

0.2581/24.236

0.4862/33.933

0.6984/53.528

0.8894/52.825

1.0843/41.721

3 結論與討論

研究表明，誘導原球莖的最佳外植體為果莢，且果莢生長期為4個月最好;采用1/2MS培養基為基本培養基，添加蔗糖2.0%、瓊脂0.8%、有機添加物為10%香蕉泥的上清液最佳;添加活性炭2.0 g/L防止褐化效果最好。蝴蝶蘭組織

培養添加激素為6BA、NAA和IBA，各階段最佳激素及濃度