布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株早熟系的免疫原性研究

廖貴城 劉麗丹 王文莉等

摘 要：經(jīng)過(guò)20代的選育，選育出了布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株早熟系蟲(chóng)株，該早熟系蟲(chóng)株與親本株均對(duì)常見(jiàn)的抗球蟲(chóng)藥物——克球素、地克珠利、磺胺喹惡啉和尼卡巴嗪高度敏感，敏感性與保定親本株一致；分別接種200個(gè)該早熟系蟲(chóng)株和親本株孢子化卵囊，21d后雞群均能抵抗1.0×105個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)強(qiáng)毒株孢子化卵囊的攻擊，說(shuō)明早熟株仍然保持良好的免疫原性。

關(guān)鍵詞：布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株；早熟株；藥物敏感性；免疫原性

中圖分類號(hào)：S858.312.72+3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2014）09-0016-04

雞球蟲(chóng)病是集約化養(yǎng)雞場(chǎng)中流行普遍、發(fā)病率高、危害嚴(yán)重的疾病之一[1]。布氏艾美耳球蟲(chóng)（Eimeria. brunetti）在國(guó)內(nèi)外流行較為廣泛，屬中等致病力蟲(chóng)種，可明顯地降低雞的飼料轉(zhuǎn)化率和增重，對(duì)雞的生產(chǎn)性能有較強(qiáng)的影響[2，3]。目前雞球蟲(chóng)病疫苗是防控該疾病的主要手段，國(guó)內(nèi)市面上銷售的主要是正典雞球蟲(chóng)病三價(jià)、四價(jià)疫苗，而包含布氏艾美耳蟲(chóng)種的疫苗產(chǎn)品只有先靈葆雅公司的八價(jià)種雞球蟲(chóng)活疫苗[1]。本公司采用Jeffers法，經(jīng)過(guò)20代的早熟選育，選育出了布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株早熟系蟲(chóng)株，該蟲(chóng)株潛隱期為88h，平均大小為24.4μm×20.0μm，形狀指數(shù)為1.22，與親本株一致，繁殖力和致病力顯著低于親本株[3，4，5]。為此，我們將該早熟系蟲(chóng)株進(jìn)行免疫原性測(cè)定，評(píng)價(jià)該蟲(chóng)株是否可作為疫苗的候選蟲(chóng)種。

1 材料和方法

1.1 材料 布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株，布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株早熟系蟲(chóng)株和布氏艾美耳強(qiáng)毒株由佛山市正典生物技術(shù)有限公司保存[3]；1日齡無(wú)球蟲(chóng)感染嶺南黃雞購(gòu)自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所種雞場(chǎng)；無(wú)添加抗球蟲(chóng)藥物和抗生素的全價(jià)飼料購(gòu)自中山市某飼料公司；克球素，成分為6%葵氧喹酯預(yù)混劑，購(gòu)自廣州市科虎生物技術(shù)公司；球安，成分為拉沙洛菌素，購(gòu)自河南大中農(nóng)動(dòng)物藥業(yè)有限公司；地克珠利，0.5%預(yù)混劑，購(gòu)自杭州豐禾生物技術(shù)有限公司；磺胺喹惡啉由佛山市正典生物技術(shù)有限公司提供；尼卡巴嗪，購(gòu)自山東魯西獸藥股分有限公司。

1.2 方法

1.2.1 布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株的親本株和早熟系蟲(chóng)株藥物敏感性試驗(yàn)

1.2.1.1 將7日齡的無(wú)球蟲(chóng)感染雞隨機(jī)分成7組，每組10羽；除第6、7組外，其它5組分別于飼料或飲水中添加克球素、球安、地克珠利、磺胺喹惡啉和尼卡巴嗪。飼養(yǎng)1d后，第1～6組的每組雞感染布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株親本株孢子化卵囊1000個(gè)/羽，隔離飼養(yǎng)。分別收集感染后96～192h的糞便。用麥克馬斯特方法（Mcmaster method）分別計(jì)數(shù)各組雞糞便中排出的卵囊數(shù)。以同樣的分組處理，第1～6組的每組雞感染布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株的早熟株孢子化卵囊1000個(gè)/羽，隔離飼養(yǎng)。分別收集感染后96～192h的糞便。藥敏試驗(yàn)見(jiàn)表1。

1.2.1.2 藥物敏感性評(píng)定指標(biāo)：以相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP=感染用藥組排出的卵囊總數(shù)/感染不用藥組的卵囊總數(shù)×100%）作為判定球蟲(chóng)對(duì)藥物抗藥性的指標(biāo)；當(dāng)ROP≥5%，則判定為耐藥；當(dāng)ROP≤5%，則判定為敏感。

1.2.2 布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株早熟株免疫原性

1.2.2.1 將雞隨機(jī)分成4組，每組10羽，第1組為陰性對(duì)照組，不免疫不攻蟲(chóng)；第2組為陽(yáng)性組，不免疫攻蟲(chóng)組；第3、4組為免疫組，第3組于4日齡經(jīng)口免疫200個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)早熟株孢子化卵囊，第4組于4日齡經(jīng)口免疫200個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株孢子化卵囊。置實(shí)驗(yàn)室平養(yǎng)，地上鋪上木糠作為墊料。25日齡時(shí)，第2、3、4組雞每羽口服攻擊1×105個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)強(qiáng)毒孢子化卵囊，攻蟲(chóng)后觀察6～7d，記錄各組雞的糞便、精神狀況和飲食欲，第7天各試驗(yàn)組稱重并剖殺，作病變記分。

1.2.2.2 免疫原性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：糞便記分標(biāo)準(zhǔn)及腸道病變記分；試驗(yàn)雞攻蟲(chóng)前后增重情況，相對(duì)增重率=各試驗(yàn)組的平均增重/陰性對(duì)照組的平均增重×100%；免疫保護(hù)率。

2 結(jié)果

2.1 藥物敏感性 布氏艾美耳球蟲(chóng)保定株的親本株和早熟株藥物敏感試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，除了球安用藥組外，親本株和早熟株的其它各用藥組的相對(duì)卵囊產(chǎn)量（ROP）均≤5%，該蟲(chóng)株的親本株和早熟株對(duì)球安之外的4種藥物均敏感。

2.2 免疫原性

2.2.1 雞增重情況 見(jiàn)表3。

由表3增重結(jié)果可見(jiàn)，攻蟲(chóng)后兩個(gè)免疫組雞的相對(duì)增重稍低于陰性組，但明顯高于陽(yáng)性組；陽(yáng)性組雞受強(qiáng)毒卵囊攻擊后增重受影響，而免疫了布氏艾美耳球蟲(chóng)早熟株和親本株的雞相對(duì)增重率相近，說(shuō)明免疫后能產(chǎn)生一定的免疫力，當(dāng)用強(qiáng)毒攻擊時(shí)，對(duì)雞體的影響小于未接受免疫的雞。

2.2.2 糞便記分、腸道病變記分及保護(hù)率 攻蟲(chóng)后6d，陽(yáng)性組雞的糞便明顯出現(xiàn)異常，發(fā)病雞拉稀、糞便呈黃色水樣，雞只飲食欲下降、精神沉郁、打堆、兩翅下垂，腳脫水干癟；早熟株免疫組和親本株免疫組雞糞便正常或含較多水分，雞只精神良好，有正常飲食，無(wú)明顯臨床發(fā)病癥狀。表4腸道平均病變記分的結(jié)果顯示，免疫組雞攻蟲(chóng)后病變明顯低于陽(yáng)性組，用早熟系蟲(chóng)株和親本株分別免疫后可以抵抗1×105個(gè)強(qiáng)毒孢子化卵囊的攻擊。

3 分析與討論

3.1 藥物敏感性 早熟株對(duì)球蟲(chóng)的抗藥性與親本株比較，雖然早熟株每羽雞的排卵囊數(shù)量與低于保定親本株，但相對(duì)卵囊產(chǎn)量即感染用藥組與感染不用藥組的比率，顯示早熟株與保定株的藥物敏感性是一致的，早熟株和保定親本株都對(duì)球安有耐藥性，對(duì)其余四種藥物敏感，說(shuō)明早熟株具有保定親本株的遺傳特性。

3.2 免疫原性 通過(guò)免疫攻蟲(chóng)試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，早熟株與保定株同樣免疫劑量免疫21d后，能夠抵抗1×105個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)強(qiáng)毒孢子化卵囊的攻擊，陽(yáng)性組糞便記分為3分，糞便呈水樣且含淡黃色粘液，而兩免疫組的糞便無(wú)明顯異常；陽(yáng)性組平均病變記分為3.2分，兩個(gè)免疫組腸道平均病變記分均小于1分，從攻蟲(chóng)后增重、糞便記分及病變記分結(jié)果表明陽(yáng)性組與免疫組的差異顯著，說(shuō)明經(jīng)過(guò)早熟選育之后，早熟株具有良好的免疫原性。胡景輝等研究指出，當(dāng)免疫500個(gè)布氏艾美耳球蟲(chóng)孢子化卵囊時(shí)，該蟲(chóng)株的免疫效果最好[6]；而在本研究中，當(dāng)接種劑量為200個(gè)時(shí)，就可以獲得理想的免疫保護(hù)效果。一般認(rèn)為子孢子和第一代裂殖體是球蟲(chóng)產(chǎn)生免疫最重要的階段，早熟株是球蟲(chóng)在發(fā)育史中最后一代裂殖生殖發(fā)生缺乏或缺陷，因而早熟系的免疫原性不會(huì)因?yàn)樵缡爝x育而產(chǎn)生影響[7]。本研究結(jié)果表明布氏艾美耳球蟲(chóng)早熟系蟲(chóng)株能使雞群建立良好的抗布氏艾美耳強(qiáng)毒株免疫力，是雞球蟲(chóng)病活疫苗理想的候選蟲(chóng)株。

參考文獻(xiàn)：

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