苯扎溴銨消毒液殺菌試驗觀察

王艷萍

摘要 [目的]探討苯扎溴銨消毒液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌的殺菌效果。[方法]采用工作液直接接種法進行試驗觀察。[結果]苯扎溴銨對大腸埃希菌、綠膿桿菌基本無殺菌作用，對金黃色葡萄球菌有良好的殺菌效果，且應選擇濃度≥0.10%的苯扎溴銨作用10 min以上具有完全殺菌效力。[結論]苯扎溴銨濃度≥0.10%時，適用于對金黃色葡萄球菌消毒。

關鍵詞 苯扎溴銨；殺菌作用；金黃色葡萄球菌

中圖分類號 S188 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2014）20-06530-02

Observation on Germicidal Efficacy of Benzalkonium Bromide Disinfectant Solution

WANG Yanping （Chemistry & Textile Engineering Department，Jiangyin Polytechnic College， Jiangyin， Jiangsu 214405）

Abstract [Objective] The research aimed to know the germicidal efficacy of benzalkonium bromide disinfectant solution on Staphylococcus aureus， Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. [Method] Working fluid direct inoculation method was carried out for experimental observation. [Result]Benzalkonium bromide had no germicidal effect on Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa，but it had a efficacious effect on Staphylococcus aureus. For Staphylococcus aureus， the concentrations of benzalkonium bromide should be more than 0.10% and it was used for more than 10 minutes to complete germicidal efficacy. [Conclusion] Benzalkonium bromide concentrations that was more than 0.10% could be used for the disinfection of Staphylococcus aureus.

Key words Benzalkonium bromide； Germicidal effect； Staphylococcus aureus

苯扎溴銨為最常用的表面活性劑之一，具有潔凈、殺菌、消毒的作用。不同濃度稀釋液可用于外科手術前洗手、皮膚消毒和霉菌感染、黏膜消毒、創口感染的洗滌消毒[1]，具有高效、毒性小、可溶于水、不受水硬度影響、使用方便、成本低等優點。實驗室對消毒劑殺菌效力的測定方法通常參照美國政府農業化學師友會（AOAC）制定的消毒劑效力測定方法。標準驗證消毒劑效力的方法有載體試驗法、表面試驗法、工作液直接接種法3種[2]。該研究將采用工作液直接接種法進行苯扎溴銨的效力驗證。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1

試驗用菌種。有金黃色葡萄球菌（CMCC 26003）、大腸埃希菌（ATCC 25922）、綠膿桿菌（ATCC 15442）3種。

1.1.2

培養基和稀釋劑。有營養瓊脂培養基、營養肉湯培養基、0.9%無菌氯化鈉、pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液。營養肉湯培養基按干粉培養基說明書配制、分裝，于121 ℃高壓蒸汽滅菌后備用[3]。取氯化鈉9.0 g，加純化水溶解至1 000 ml，過濾，分裝至試管中，于121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌后備用，制得濃度0.9%無菌氯化鈉。取磷酸二氫鉀3.56 g、磷酸氫二鈉7.23 g、氯化鈉4.3 g、蛋白胨1 g，加純化水1 000 ml[4]，然后加熱溶解，過濾，分裝至試管中，于121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌后備用[5]，制得pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖劑。

1.1.3

試驗菌懸液的制備。將未用的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌儲存于冰箱中，在試驗前1 d取出，接種于營養瓊脂斜面，置于32.5 ℃培養箱中培養24 h，取出營養瓊脂斜面用無菌接種環刮出3種試驗菌，分別放入營養肉湯中，搖勻，放入30～35 ℃培養箱中培養24 h。取出培養好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、綠膿桿菌的營養肉湯培養物1 ml，用濃度0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至10-5～10-7，濃度達50～100 CFU/ ml，經活菌計數后備用。

1.2 方法

1.2.1

消毒劑的配置。將苯扎溴銨消毒劑用經滅菌的純化水稀釋成下列不同濃度，即0.05%、0.08%、0.10%、0.12%、0.15%、0.20%。

1.2.2

濃度0.10%苯扎溴銨消毒液殺菌試驗。

取滅菌試管，先加入1 ml試驗菌懸液，再加入1 ml濃度0.10%苯扎溴銨消毒液，混勻，立即開始用秒表記錄時間，5 min時移植入營養肉湯培養液中。其余10、15 min組的操作同上，但應注意加菌液與接種移植時要嚴格掌握時間，不超過規定時間±5 s。然后，將3組培養液置于32.5 ℃培養48 h，觀察結果。若培養液呈渾濁者，則為陽性，表示有菌生長，記為“+”號；若培養液呈澄清透明者，表示無菌生長，則為陰性，記為“-”號。同時，做平行試驗。

1.2.3

不同濃度的苯扎溴銨消毒液殺菌試驗。取滅菌的試管，先加入1 ml營養肉湯培養基，再加入1 ml “1.2.1”中不同濃度的苯扎溴銨消毒液，最后加入0.1 ml金黃色葡萄球菌的菌懸液，混和均勻。將試管置于32.5 ℃培養48 h后，觀察結果。若培養后呈澄明狀態，則表明該管無菌生長；若培養后呈現渾濁狀態，則表明該管有菌生長。從無菌生長的試管中找出最低消毒劑濃度的試管，即為最低抑菌濃度。

2 結果與分析

2.1 苯扎溴銨消毒液殺菌試驗

分別對3種試驗菌在每個時間段驗證6株。從表1可以看出，當苯扎溴銨消毒劑對大腸桿菌作用5、10、15 min時，分別只有1、1、3株顯示抑菌作用；對綠膿桿菌作用5、10、15 min時，分別只有0、1、2株顯示抑菌作用；對金色葡萄球菌作用5、10、15 min時，分別有2、6、6株顯示抑菌作用。由此可知，苯扎溴銨消毒劑對大腸桿菌和綠膿桿菌均沒有顯示出抑菌效果，對金色葡萄球菌顯示出抑菌效果。苯扎溴銨消毒劑作用于金黃色葡萄球菌的時間為5 min時，滅菌率達33.3%；作用10、15 min時，苯扎溴銨消毒劑對金黃色葡萄球菌有完全的殺菌效果。所以，苯扎溴銨消毒劑對金黃色葡萄球菌作用時間為10 min以上時具有完全的殺菌效果。

2.2 不同濃度的苯扎溴銨消毒液殺菌試驗

從表2可以看出，試驗共測金黃色葡萄球菌9株。當苯扎溴銨消毒液濃度≤0.05%時，不能殺滅金黃色葡萄球菌；當苯扎溴銨消毒液濃度為0.08%時，有5株金黃色葡萄球菌有耐藥性；當苯扎溴銨消毒液濃度為0.10%時，還有1株金黃色葡萄球菌有耐藥性；當苯扎溴銨消毒液濃度≥0.12%時，所有菌株都被殺滅。所以，當用苯扎溴銨消毒液殺滅金黃色葡萄球菌時，選擇濃度大于0.10%時可殺滅全部菌株。

3 結論

苯扎溴銨為季銨鹽陽離子表面活性廣譜殺菌劑，能降低水溶液表面張力，改變細胞膜的通透性，使得細菌蛋白質變性。其分子結構中的疏水基因與親水基因可分別滲入細胞漿膜的類脂質和蛋白質層，使細菌的通透性發生變化，導致細胞內物質流失而使細菌死亡。研究表明，在不了解消毒劑的性狀、作用機理的情況下，不能隨意使用消毒劑對細菌進行消毒，如苯扎溴銨消毒劑并不是對每種細菌都具有殺菌作用，只顯示對金黃色葡萄球菌具有殺菌效果，苯扎溴銨濃度大于0.10%且作用時間大于10 min時殺菌效果良好。這為在今后的使用過程避免了盲目性。

參考文獻

[1]

彭義剛，王秀云，都國基.苯扎溴銨消毒液抑菌試驗及應用效果觀察[J].中國消毒學雜志，2006，23（5）：397.

[2] 馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學檢測手冊[K].北京：科學出版社，2000.

[3] 陳德源.醫學微生物學[M].4版.北京：人民衛生出版社， 1996.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].北京：化學工業出版社，2000.

[5] 汪穗福.微生物檢測驗證技術[M].北京：中國醫藥科技出版社，2005.