草菇育種方法及相關分子標記研究進展

林鋒　李國賢　趙妍　汪虹　陳明杰

摘 要 草菇是一種原產于中國熱帶與亞熱帶地區的栽培食用菌，對草菇主要育種方法，包括人工選擇育種、雜交育種、誘變育種、原生質體融合育種、基因工程育種及相關分子標記技術，如RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）、RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）、SRAP（Sequence-Related Amplified Polymorphism）、SCAR（Sequence-Characterized Amplified Regions）、草菇交配型基因的分子標記、SSR（Simple Sequence Repeat）、SNP（Single Nucleotide Polymorphism）的研究進展進行了綜述，并針對當前存在的問題與現狀，對草菇育種今后的發展方向進行了展望。

關鍵詞 草菇；育種方法；分子標記

中圖分類號 S646.11 文獻標識碼A

草菇[Volvariella volvacea（Bull.ex.Fr.）Sing]又名稻草菇、中國蘑菇，在分類學上屬真菌門（Eumycetes）、擔子菌綱（Basidiomycetes）、傘菌目（Agaricales）、光柄菇科（Pluteaceae）、小苞腳菇屬（Volvariella）[1]。草菇原產中國熱帶與亞熱帶地區，在臺灣、福建、湖南、廣東、廣西等省（自治區）栽培廣泛。2008年中國的草菇年產量達437 200 t[2]，僅廣東省的產值就超過1.5億元[3]。草菇不僅味道鮮美、營養價值豐富，更重要的是作為一種草腐性的食用真菌，能夠利用稻草、麥秸、廢棉、蔗渣等農業廢棄物生產出供人們食藥用的子實體，其栽培下腳料還可以制成有機肥料，真正實現了農業固廢循環的高效利用，因此近年來草菇生產規模不斷擴大，相關產業發展迅速，使其成為一個新的經濟增長點。

盡管草菇在中國已有300多年的栽培歷史，但仍有許多問題阻礙了產業的發展，如生物轉化率低（只有10%～40%）、常規冷藏溫度（4 ℃）會引起菌絲體發生自溶、菌種易變異退化等等，因此草菇栽培品種改良成為學者們十分關注的研究課題。由于草菇被認為是一種初級同宗結合的真菌，其菌絲細胞多核且無鎖狀聯合，使得育種者無法從生理形態上區分同核與異核菌絲或親本與雜交種，導致草菇遺傳育種研究進展十分緩慢，只能借助傳統的馴化、組織分離、孢子分離等人工選擇方法育種[4]。隨著分子生物學的發展，尤其是草菇基因組測序的完成，各種分子標記逐步被應用到草菇育種工作中，并獲得了一系列高產、優質、抗逆的新菌株。

1 草菇常用育種技術

1.1 人工選擇育種

人工馴化、組織分離以及孢子分離是人工選擇育種的基本方法，雖然操作簡單，卻是各種育種方法的基礎，并在草菇育種初期獲得了一些優良菌株。如李育岳等[5]通過對草菇低溫菌株的馴化篩選，獲得了菌絲生長與出菇溫度均低于原菌株且產量較高、適宜北方栽培的草菇新菌株。組織分離在草菇菌株選育中應用非常廣泛，草菇V23、V5菌株便是通過子實體組織分離的方法得到的[3]。孢子分離法主要是利用食用菌成熟的有性孢子萌發成菌絲來獲得菌種，其又分為多孢分離與單孢分離兩種[6]。多孢分離[7-8]指將許多擔孢子一起接入同一個培養基中，讓多個擔孢子自由萌發結合而得到純菌種；單孢分離[7]則每次只取1個擔孢子，讓其萌發得到菌絲體進而獲得菌種的方法。鄒伯瓊、曹裕漢研究發現利用草菇單孢分離得到的菌株，其生長速率普遍快于常規菌株，同時發現草菇孢子分離菌株在菌絲形態、生長速率、產厚垣孢子的能力以及產量等性狀上存在較大差異[9-10]。而全面系統地對我國草菇野生資源、栽培品種進行調查、采集、分離、保藏與種性（包括形態特征、生理習性、營養價值、遺傳特性）研究，能夠使人工選擇育種產生更有益的效果。

1.2 雜交育種

雜交育種[7，11]是指通過雜交使親本的染色體片段交換或者重組而獲得新的性狀，并在雜交后代中篩選出優良新菌株的方法。該方法的方向性與目的性較為明確，主要著眼于雙親性狀間的優勢互補或借助其中一個親本的優點來克服另一親本的缺點，是遺傳物質在細胞水平上重組的一種育種方法。雜交育種的關鍵在于雜交種真實性的鑒定，常規的判斷方法如菌絲體是否雙核、是否出現鎖狀聯合等，這些形態學上的鑒定方法在草菇雜交育種中并不適用，主要是由于草菇的菌絲體為多核、無鎖狀聯合且菌落形態多變。研究者也曾試圖利用生化標記來鑒定雜交種，如營養缺陷型與同工酶等，但生化標記存在獲得較難或受環境因素影響較大等缺陷。近年來隨著分子生物學技術在食用菌領域內的不斷應用與發展，新型的分子標記為草菇雜交種的鑒定提供了相對較好的途徑，使得雜交育種技術成為草菇新菌株選育的一種重要育種手段。

與其它食用菌雜交育種一樣，草菇的雜交育種主要指種內不同菌株間進行雜交。福建農林大學謝寶貴等[12]經過三年多的草菇雜交育種試驗，經實驗室小范圍栽培試驗與品比試驗，均發現雜交菌株“農大1號”的產量顯著高于福建省內廣泛栽培的V387，屬較耐高溫的中粒型草菇新菌株。傅俊生等[4]將2個匍匐型不孕的草菇單孢菌株單26、單28進行雜交配對，尖端菌絲細胞分離純化后獲得一氣生型菌株2628，菌種鑒定與品比試驗的結果表明，菌株2628是一個具有優良性狀的雜交新菌株。趙光輝[13]選用草菇菌株V0045分別與V0062、V0073、V0032、V0053（屏優）進行雜交，通過菌株出菇試驗，收集農藝性狀數據，最終獲得了6個草菇優勢雜交菌株。

1.3 誘變育種

誘變育種[7，14]是指在育種工作中采用誘變劑引起菌種的遺傳性狀發生變異，從中挑選出具有優良性狀新菌株的方法。根據誘變劑種類的不同，主要分為物理誘變與化學誘變兩種方法。物理誘變劑包括非電離輻射類的紫外線、激光與電離輻射類的 χ-射線、γ-射線、快中子等；化學誘變劑主要是烷化劑與堿基類似物，此外還有亞硝酸、吖啶橙、部分金屬化合物等。由于誘變育種具有變異效率高、處理方法簡單等優點，使其成為菌種選育的一個重要途徑。該方法中出發菌株的選擇、出發菌株的狀態以及誘變劑的種類、劑量和處理時間都對誘變效果產生較大的影響。通常選擇生產上性狀穩定、優良性狀較多的菌株作為出發菌株，并通過一系列的預試驗來確定誘變劑的最佳劑量與處理時間。草菇育種中借助誘變育種技術獲得的新菌株也越來越多。王波等[15]選用草菇V4菌株作為出發菌株，開展了其原生質體紫外線誘變育種，通過菌絲生長速度、形態特征、營養成分以及產量等方面的比較分析，最終獲得了產量較V4菌株高29.1%的優良誘變新菌株Vp53。林瑞蝦[16]以草菇菌株屏優一號（PY）、屏優一號的2個單孢菌株PYd15、PYd21及雜交菌株PYd15×PYd21為試驗材料，采用60Co-γ射線進行誘變，以產量高于出發菌株、子實體大小優于出發菌株作為篩選條件，最終獲得了14株誘變新菌株，其優良性狀的遺傳穩定性，將在中試試驗中進行進一步驗證。韓業君等[17]以草菇主栽品種V23菌株作為出發菌株，采用紫外線（UV）、60Co-γ射線、硫酸二乙酯（DES）對其原生質體進行復合誘變，經初篩、復篩后獲得耐常規低溫（4 ℃）10 d的菌株VH；栽培實驗結果表明，VH在26 ℃下的生物轉化率顯著高于V23，且味道鮮美，是具有應用價值的優良草菇新菌株。

1.4 原生質體融合育種

原生質體融合[7，18]是指將去除細胞壁后不同遺傳類型的原生質體，在融合劑（或電場）的誘導下進行融合，實現部分或整套基因組的交換與重組，并產生新品種的過程。由于該方法無需通過食用菌的有性生活史便能獲得遺傳重組，因此與常規雜交育種相比，原生質體融合育種受親緣關系的影響較小，為遺傳差距較大的遠緣雜交提供了可能性。與此同時原生質體融合育種中，融合子的鑒定是限制該技術發展的一個難題，雖然有鎖狀聯合、同工酶分析、生長拮抗試驗、出菇試驗及擔孢子分析等鑒定方法，但均存在一定的問題，仍需找到更可靠的鑒定融合子的方法[19]。在進行草菇原生質體融合育種之前，首先需要探索其原生質體制備與再生的最佳條件。韓業君等[20]研究發現，當溶壁酶濃度2%、溫度32 ℃、pH自然、以0.8 mol/L甘露醇作為滲透壓穩定劑時，選用菌齡3 d的菌絲酶解2 h，可達到草菇原生質體再生的最佳效果。溫海祥等[21]在草菇種內進行了原生質體融合育種的研究，利用草菇不同品種間胞外蛋白酶與淀粉酶活性的差異，對原生質體融合后的再生菌株進行了檢測，最終篩選到3個與出發菌株存在顯著差異的融合子。但在草菇種間進行原生質體融合時，Zhao等[22]采用AP-PCR鑒定融合子時并未發現雙倍體現象，表明草菇種間的原生質體融合較種內而言存在一定的難度。

1.5 基因工程育種

基因工程育種[7，14]是一種在基因水平上的遺傳操作，它采用人為手段從供體生物中提取出所需的目的基因，在離體條件下經適當酶切割或修飾后，將其與載體DNA分子連接一并導入受體細胞中進行復制與表達，最終培育出新品種的方法。與常規育種相比，基因工程育種則是以分子生物學理論基礎為指導，定向設計基因藍圖并能夠實現超遠緣雜交的一種育種新技術，該方法可為受常規育種手段制約的食用菌種類的育種帶來新的解決途徑。目的基因的獲取是基因工程育種的前提與基礎。目前草菇中有很多基因已被克隆，如內切葡聚糖酶基因eg1[23]、漆酶基因lac1、lac4[24-25]、S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因[26]等，而草菇全基因組測序的完成與草菇全基因組框架圖的構建[27]大大縮短了目的基因的獲取時間，為草菇基因工程育種的發展奠定了堅實的基礎。遺傳轉化與表達系統的建立是基因工程育種的重要環節。目前食用菌上常用的遺傳轉化方法有PEG法、電激法、基因槍法、農桿菌介導法、限制酶介導法等。郭麗瓊等[28]利用基因槍法，將從瑞典北極云杉卷葉蛾幼蟲中擴增出的抗冷凍蛋白基因afp遺傳轉化到草菇中，低溫脅迫研究結果顯示，轉基因草菇及其后代均具有較強的耐低溫能力。隨后王藝紅等[29]采用PEG介導原生質體法，將表達載體pgVvs-mfc與pvg-afp共同轉化到草菇菌絲原生質體中，羧甲基纖維素鈉酶活和濾紙酶活的試驗結果均表明，整合到草菇基因組中的外源多功能纖維素酶基因mfc提高了草菇的纖維素酶活性，最終使得4個轉基因草菇菌株的生物轉化率都顯著高于對照組。王春暉等[30]則以PEG400、CaCl2為誘導劑，將平菇“湘平992”的DNA導入到了草菇“瀏陽麻菇”的原生質體中，選育出了在溫型、菇型、酶活力以及生物轉化率上較親本有著顯著優勢的新菌株。

1.6 草菇常用育種技術比較

草菇菌種選育，即選擇培育出符合生產實踐需要的優良新菌株，取代原有菌株，以提高產量、品質及抗性等。通過比較草菇常用育種技術（表1），可以發現雜交育種技術雖然育種周期較長，但該方法建立在已知性狀的親本間進行雜交，育種的方向性、預見性較好，培育獲得新菌株的有效性較強，為草菇的定向育種提供了一定的保證[31]。人工選擇育種方法在草菇育種中仍會發揮重要作用，該方法能夠從自然界中引入新的優質草菇種質資源。誘變育種與原生質體融合育種由于自身獨特的優勢，如誘變育種具有變異效率較高的特點，原生質體融合育種則可不經過食用菌有性過程而實現部分或整套基因組的交換與重組等，使二者成為草菇菌種培育的重要途徑。基因工程育種的目標性更強，作為一種新型的草菇育種手段，仍需要大量的研究進行不斷地完善，隨著食用菌基因工程技術的日趨成熟，相信其能夠更好地促進草菇育種工作的開展。

2 草菇育種相關分子標記技術

從本質上來講，分子標記技術是通過檢測生物個體在基因或基因型上的變異來反映生物個體間的差異[32]。分子標記技術在食用菌遺傳育種中應用廣泛，如種質資源評估與菌種鑒定、遺傳多樣性與親緣關系分析、遺傳連鎖圖譜構建與基因定位、分子標記輔助選擇等方面[33-34]。隨著各種分子標記的不斷出現與應用，使分子標記輔助育種成為食用菌育種的一個重要技術支撐[35]。由于食用菌的多數農藝性狀與商品性狀在栽培出菇后才能表現出來，因此常規育種方法不僅費時費力，同時還需要研究人員具備豐富的育種與栽培經驗。而利用分子標記技術能夠篩選到與優良性狀相關的標記，可有效縮短育種周期，提高育種效率，分子標記技術在草菇遺傳育種中的應用越來越多。

2.1 RFLP和RAPD標記

RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）標記，也被稱為第一代DNA分子標記，出現時間最早，是由Bostein D首先提出的基于Southern雜交技術的一種分子標記。該技術使用某一種限制性內切酶切割來自不同個體的基因組DNA或者某一個基因，得到不同長度與數目的酶切片段。由于特異的DNA/限制性內切酶組合所產生的片段是特異的，它可以作為某一DNA的特有“指紋”，直接反映生物的遺傳多態性。余志晟等[36]在對12個草菇栽培菌株DNA多態性分析的研究中，應用PCR-RFLP技術，擴增了rDNA5.8s+ITS區段及mtDNA小區段，并進行限制性酶切分析，結果表明草菇菌株間的rDNA在5.8s+ITS區段的遺傳差異小，據此只能將所測試的12個草菇菌株分為2類；而在mtDNA小區段的檢測中沒能顯示出差異，表明該區段上所測試草菇菌株遺傳相似性很高。

RAPD（Random Amplified Polymolphic DNA）即隨機擴增多態性DNA，由美國人Williams等于1990首次提出。該技術以基因組DNA為模板，以單個人工合成的隨機多態核苷酸序列（通常為10個堿基對）為引物，在熱穩定的DNA聚合酶（Taq酶）作用下進行PCR 擴增。擴增產物經瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測多態性，擴增產物的多態性反映了基因組的多態性。鄧旺秋等[37]對廣東省主要栽培的8個草菇菌株進行了RAPD多態性分析，獲得了這8種草菇菌株的DNA指紋圖譜，構建得到的聚類圖表明：RAPD標記對草菇菌株的分類與草菇形態學上的分類結果基本一致，說明RAPD標記能夠分辨出草菇不同菌株并可快速有效地鑒定草菇商業菌株。余志晟等[36]在對草菇栽培菌株的RAPD分析中指出，RAPD標記技術結合聚類分析可以為草菇育種工作提供科學依據，研究結果還表明所測試的草菇菌株遺傳相似度較高，并建議為了更好地促進草菇育種，需要尋找新的草菇種質資源。徐學鋒等[38]選用20條隨機引物分別對14個草菇菌株進行PCR擴增，研究結果表明：RAPD方法對探索草菇有性世代間的遺傳分離規律有著重要價值。陳劍等[39]也利用RAPD技術對草菇雜交后代進行鑒定，發現不同引物的鑒定效果有差異，同時也證明RAPD技術可以用于鑒定草菇雜交后代。RAPD技術不僅在草菇育種中起重要作用，在其它食用菌育種中也應用廣泛。上官舟建等[40]利用RAPD技術分析了3株新選育的真姬菇菌株，從分子水平上驗證了新菌株遺傳基因間的差異。尚曉冬等[41]從國內外收集了19株杏鮑菇菌株并進行了RAPD指紋圖譜分析。此外RAPD標記在平菇[42]、杏鮑菇[43]、鳳尾菇[44]以及雙孢蘑菇[45]等食用菌中也有相關研究報道。

2.2 SRAP和SCAR標記

SRAP（Sequence-Related Amplified Polymorphism）即序列相關擴增多態性，是一種基于PCR的新型標記。該標記的基本原理：利用基因外顯子內G、C含量豐富，而啟動子與內含子里A、T含量豐富的特點設計一對引物，對開放閱讀框架進行擴增[46]。SRAP標記以其穩定、簡便、產率高、便于目標片段克隆等優點，自創建以來已被廣泛應用于圖譜構建[47]與遺傳多樣性分析[48-50]。傅俊生等[4]將SRAP與RAPD技術相結合成功鑒定了草菇雜交種2628，在該雜交菌株中共發現4個SRAP特異遺傳標記，其中1個來自于親本單孢26，另外3個來自于親本單孢28。SRAP標記除用于草菇育種外，還被用于鳳尾菇菌株的鑒定[44]。

SCAR（Sequence-Characterized Amplified Regions）于1993年由Paran與Michelmore首次提出，該標記技術是在RAPD基礎上發展起來的。SCAR的基本步驟：首先需要進行RAPD分析，把目的RAPD片段進行克隆、測序，然后根據測序結果即原RAPD片段兩末端序列設計的特定引物，最后用此引物對基因組DNA再次進行擴增與分析。與RAPD及其它利用隨機引物的標記技術相比，SCAR具有更好的重復性，并且可通過擴增帶的有無來判斷待測樣品間的差異，該分子標記技術在植物遺傳多樣性、品種鑒定、性別鑒定等方面應用廣泛[51-54]。在草菇雜交育種鑒定中，傅俊生等[55]先借助SRAP技術篩選出草菇親本單26與親本單28的4條遺傳差異條帶，并將其成功轉化為SCAR遺傳標記，應用這4個SCAR標記成功鑒定了草菇菌株2628的雜種性。在真姬菇雜交育種研究中，Lee等[56]對9個真姬菇菌株進行遺傳多樣性分析后獲得了10個特異性片段，進而設計了10條引物，最終試驗結果表明使用其中的4條引物便能夠成功地鑒定出雜交菌株，說明SCAR標記在真姬菇雜交種鑒定中方法可行。

2.3 草菇交配型基因分子標記

汪虹等[57]以草菇交配型基因為分子標記，發明了一種快速篩選草菇雜交菌株的方法，該方法包括：（1）比較草菇單孢分離菌株交配型A位點的基因序列，根據基因序列的保守性，對不同草菇單孢分離菌株設計并合成特異性引物；（2）將草菇單孢分離菌株用PDA培養獲得菌絲體，使用定制的試劑盒檢測草菇菌株的交配型基因類型；（3）將已確定交配型基因類型的菌株兩兩接種在PDA培養基上培養，待菌落相交時，分別從兩個菌落的外側挑取菌塊轉移至試管培養基上進行3次繼代培養；（4）使用預先設計的交配型特異性引物，對草菇雜交后的菌株進行PCR擴增，研究表明雜交菌株能擴增出針對兩個母本交配型的2個條帶，而單孢菌株只能擴增出1個條帶。與常規的形態學檢測、拮抗試驗、出菇試驗等方法相比，該方法具有操作簡便、檢測時間短、準確性高等優點，在草菇雜交育種研究中具有良好的應用前景，能夠推動草菇雜交育種工作更好地向前發展。

2.4 SSR和SNP標記

SSR（Simple Sequence Repeat）也稱為微衛星DNA（microsatellite DNA）、短串聯重復（tendom-repeats）、簡單序列長度多態性（simple sequence length polymorphism）等，通常是以2～3個（少數為1～6個）核苷酸為單位的多次串聯重復的DNA序列。一般每個SSR兩端的序列是相對保守的單拷貝序列，通過這段序列可以設計一段互補的寡聚核苷酸引物，對SSR進行PCR擴增，由于SSR多態性多由簡單序列重復次數的差異引起，通常表現為共顯性[58]。SSR擴增產物通常采用高濃度的瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。該標記技術在植物遺傳圖譜構建上已有應用[59]，在食用菌中也有相關的研究應用。Zhang等[60-61]將SSR技術成功地應用于金針菇與黑木耳的菌株鑒定工作中，分別建立起10個金針菇的SSR標記與17個黑木耳的SSR標記。許占伍等[62]研究特異SSR標記H35在真姬菇中的可傳遞性，他們以SIEF3133菌株的原生質體單核體、孢子單核體及與SIEF3136菌株孢子單核體的雜交菌株為試驗材料，結果表明SSR標記H35與交配型因子A2間具有連鎖性，并能跟蹤含有A2交配型單核體的雜交菌株。

SNP（Single Nucleotide Polymorphism）即單核苷酸多態性，指由于單個核苷酸的變異而導致基因組水平上DNA序列的多態性，主要有單堿基的缺失、插入、轉換及顛換等。作為第三代分子標記技術，SNP具有遺傳穩定性高、位點豐富且分布廣泛、富有代表性、二態性與等位基因性、易實現自動化分析等特點，使其在動植物遺傳育種中發揮著越來越重要的作用[63-65]，但目前其在真菌尤其在食用菌遺傳育種上應用相對較少，可能在未來有著廣闊的應用前景。

3 展望

草菇作為一種營養豐富、經濟價值較高的食用菌，其商業化種植越來越廣泛。作為高溫出菇的草菇，存在低溫貯藏時受冷害嚴重[66]、采后易開傘導致品質下降、生物轉化率低等缺點，為了更好地促進草菇產業的發展，選育出優質的草菇新菌種迫在眉睫。縱觀草菇常用的育種方法，筆者認為雜交育種雖然育種周期較長，但是其育種目標的預見性與方向性較好，在較長的一段時間里可能仍是草菇育種的主要手段，當然草菇育種想要更好地發展也離不開其它育種方法的同步進行。值得一提的是，基因工程育種技術能夠通過導入優良基因，選育出符合生產上需要的草菇新菌株，使其可能成為今后草菇育種工作中的研究熱點。由于草菇菌絲多核且無鎖狀聯合，這在很大程度上制約了草菇新菌株的鑒定，分子標記技術的應用為草菇新菌株的選育提供了一條有效的途徑。隨著草菇全基因組測序的完成與框架圖的構建[27]，各種分子標記（如草菇交配型基因）將會更好地為草菇遺傳育種工作服務。新興的分子標記技術，如SSR與SNP，雖然在草菇育種中尚未有相關研究報道，但是其在動植物和部分食用菌上已有一定的研究進展，相信隨著科學研究的不斷深入，這些高通量的分子標記技術將被廣泛用于草菇種質遺傳多樣性分析、雜交子或融合子鑒定、遺傳連鎖圖譜構建與基因定位等方面，最終會給草菇遺傳育種工作帶來巨大進步。

參考文獻

[1] 鄧優錦， 朱 堅， 謝寶貴. 圖說草菇栽培關鍵技術[M]. 北京： 中國農業出版社， 2011： 4.

[2] Chen B Z， Gui F， Xie B G， et al. Composition and expression of genes encoding carbohydrate-active enzymes in the straw-degrading mushroom Volvariella volvacea[J]. Plos One， 2013， 8（3）： e58 780.

[3] 曾志忠， 曹學文， 蔡月彩， 等. 草菇常用育種技術[J]. 廣東農業科學， 2008（4）： 93-94.

[4] 傅俊生， 朱 堅 謝寶貴， 等. 草菇雜交菌株2628的鑒定與品比試驗[J]. 中國農學通報， 2010， 26（14）： 48-53.

[5] 李育岳，汪 麟. 草菇低溫菌株選育[J]. 中國食用菌， 1990， 9（2）： 7-8.

[6] 邢廣林. 食用菌育種方法[J]. 生物學通報. 1995， 30（11）： 6-8.

[7] 韓繼剛. 草菇生產全書[M]. 北京： 中國農業出版社， 2005： 60-82.

[8] 姚祥坦， 張 敏，徐素琴. 杏鮑菇多孢分離及單孢雜交初步研究[J]. 中國食用菌， 2009， 28（6）： 18-19.

[9] 鄒伯瓊，曹裕漢. 草菇單孢子選育種研究[J]. 廣東農業科學，2001， （4）： 23-24.

[10] 曹裕漢. 草菇有性分離選育種研究[J]. 食用菌， 2003， 25（2）： 12-13.

[11] 張 敏， 陳 平， 李 超. 食用菌育種技術研究綜述[J]. 遼寧農業科學， 2005（1）： 31-32.

[12] 謝寶貴， 余金榮， 阮海東， 等. 草菇雜交菌株“農大1號”的品比試驗初報[J]. 福建農業科技， 1997（4）： 20.

[13] 趙光輝. 草菇雜交育種研究[D]. 福州： 福建農林大學， 2011.

[14] 付立忠， 吳學謙， 魏海龍，等. 我國食用菌育種技術應用研究現狀與展望[J]. 食用菌學報， 2005， 12（3）： 63-68.

[15] 王 波， 唐利民， 鮮 靈， 等. 草菇原生質體誘變菌株Vp53的選育[J]. 西南農業學報， 1999， 12（S1）： 44-47.

[16] 林瑞蝦. 草菇60Co誘變育種研究[D]. 福州： 福建農林大學， 2011.

[17] 韓業君，曹 暉，陳明杰. 草菇耐低溫菌株的誘變選育與鑒定[J]. 菌物學報， 2004， 23（3）： 417-422.

[18] 任 軒， 賈 樂， 楊鳳苓，等. 食用菌原生質體融合育種研究進展[J]. 生物技術通報， 2008（2）： 42-44.

[19] 陳 娟， 蘇開美. 食用菌遺傳育種及種質鑒定研究進展[J]. 中國食用菌， 2008， 27（5）： 3-8.

[20] 韓業君， 曹 暉， 陳明杰，等. 草菇原生質體制備與再生及誘變效應研究[J]. 食用菌學報， 2004， 11（2）： 1-6.

[21] 溫海祥， 肖洪東， 黃劍波，等. 草菇種內原生質體融合育種研究[J]. 北方園藝， 2000（3）： 48-49.

[22] Zhao J， Chang S T. Interspecific hybridization between Volvariella volvacea and V. bombyeina by PEG-induced protoplast fusion[J]. World Journal of Microbiology and Biotehnology， 1997， 13（2）： 145-151.

[23] Ding S J， Wei G， Buswell J A. Endoglucanase I from the edible straw mushroom， Volvariella volvacea purification，charaterization，cloning and expression[J]. European Journal Biochemistry， 2001， 268： 5 687-5 695.

[24] Chen S C， Wei G， Buswell J A. Biochemical and molecular charaterization of a laccase from the edible straw mushroom，Volvariella volvacea[J]. European Journal Biochemistry， 2004， 271： 318-328.

[25] Chen S C， Wei G， Buswell J A. Molecular cloning of a new laccase from the edible straw mushroom， Volvariella volvacea： possible involvement in fruitbody development[J]. FEMS Microbiology Letters， 2004， 230： 171-176.

[26] 孫曉紅， 陳明杰， 汪 虹，等. 草菇S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因的克隆和序列分析[J]. 食用菌學報， 2010， 17（1）： 22-25.

[27] 鮑大鵬， 趙國屏， 譚 琦， 等. 草菇全基因組框架圖[J]. 食用菌學報， 2010， 17（1）： 1-2.

[28] 郭麗瓊， 林俊芳， 熊 盛，等. 抗冷凍蛋白基因遺傳轉化草菇的研究[J]. 微生物學報， 2005， 45（1）： 39-43.

[29] 王藝紅， 林俊芳， 趙風云， 等. 多功能纖維素酶基因（mfc）遺傳轉化草菇的研究[A]. 第二屆全國食用菌中青年專家學術交流會論文集[C]. 2008： 101-107.

[30] 王春暉， 易 斌， 馮立國，等. 平菇DNA導入草菇原生質體選育優良品種的研究[J]. 中國食用菌， 2008， 27（6）： 49-51.

[31] 陳恒雷，曾憲賢. 食用菌育種方法的研究進展[J]. 食用菌， 2005（3）： 5-7.

[32] 王印肖， 徐秀琴，韓宏偉. 分子標記在品種鑒定中的應用及前景[J]. 河北林業科技， 2006（增刊）： 46-49.

[33] 吳學謙， 李海波， 魏海龍，等. DNA分子標記技術在食用菌研究中的應用及進展[J]. 浙江林業科技， 2004， 24（2）： 75-80.

[34] 張瑞穎， 胡丹丹， 左雪梅，等. 分子標記技術在食用菌遺傳育種中的應用[J]. 中國食用菌， 2011， 30（1）： 3-7.

[35] Fan L， Pan H， Soccol A T， et al. Advances in mushroom research in the last decade[J]. Food Technology and Biotechnology， 2006， 44（3）： 303-311.

[36] 余志晟， 呂作舟，陳明杰，等. 草菇栽培菌株DNA多態性的PCR-RFLP和RAPD分析[J]. 中國農學通報， 2005， 21（6）： 58-62.

[37] 鄧旺秋， 楊小兵， 李泰輝， 等. 廣東省草菇主要栽培菌株RAPD多態性分析[J]. 食用菌學報， 2004， 11（3）： 1-6.

[38] 徐學鋒， 姬宏超， 李巧玲， 等. 草菇有性世代間rDNA序列變異分析及RAPD分析[J]. 食品工業科技， 2012， 33（10）： 198-201.

[39] 陳 劍， 林 原， 謝寶貴，等. 利用RAPD技術鑒定草菇雜交后代[J]. 食藥用菌， 2011，19（2）： 21-23.

[40] 上官舟建， 謝寶貴， 羅聯忠， 等. 真姬菇三個選育菌株的RAPD分析[J]. 中國食用菌， 2004， 23（3）： 12-14.

[41] 尚曉冬， 宋春艷， 沈學香， 等. 杏鮑菇菌株RAPD指紋圖譜分析[J]. 食用菌學報， 2009， 16（3）： 1-4.

[42] Gustavo G F， Eliezer A G， Liana F S， et al. Oyster mushrooms species differentiation through molecular markers RAPD[J]. International Journal of Plant Breeding and Genetics，2008， 2（1）： 13-18.

[43]許 峰，劉 宇，尹永剛，等. 北京地區杏鮑菇菌株遺傳多樣性的RAPD分析[J]. 中國食用菌， 2012， 31（6）： 35-37.

[44] 熊 芳， 鄭閩江， 劉新銳，等. 利用RAPD和SRAP建立快速鑒定鳳尾菇菌株的SCAR標記[J]. 江西農業大學學報， 2010， 32（3）： 601-607.

[45] Moore A J， Challen M P， Warner P J， et al. RAPD discrimination of Agaricus bisporus mushroom cultivars[J]. Applied Microbiology Biotechnology， 2011， 55： 742-749.

[46] 徐 操， 趙寶華. SRAP分子標記的研究進展及其應用[J]. 生命科學儀器， 2009， 7（4）： 24-27.

[47] 房 超， 楊志榮， 劉獨臣， 等. 應用SRAP分子標記構建茄子遺傳圖譜初探[J]. 西南農業學報， 2010， 23（5）： 1 591-1 594.

[48] Liao L， Guo Q S， Wang Z Y， et al. Genetic diversity analysis of Prunella vulgaris in China using ISSR and SRAP markers[J]. Biochemical Systematics and Ecology， 2012， 45： 209-217.

[49] Liu C H， Fan X C， Jiang J F， et al. Genetic diversity of Chinese wild grape species SSR and SRAP markers[J]. Biotechnolgy & Biotechnolgical Equipment， 2012， 26（2）： 2 899-2 903.

[50] Wu Z G， Ning W， Wang Y S， et al. Genetic diversity of taraxacum germplasm revealed by sequence-related amplified polymorphism（SRAP）analysis[J]. African Journal of Biotechnology， 2011， 10（47）： 9 557-9 562.

[51] Juthaporn S， Piyaporn S. Genetic diversity and species identification of cultivar species in subtribe cucumerinae （cucurbitaceae）using RAPD and SCAR markers[J]. American Journal of Plant Sciences， 2012（3）： 1 092-1 097.

[52] Shen A H， Li H B， Wang K， et al. Sequence characterized amplified region（SCAR）markers-based rapid molecular typing and identification of cunninghamia lanceolata[J]. African Journal of Biotechnology， 2011， 10（82）： 19 066-19 074.

[53] Cho K H， Shin II S， Kim S H， et al. Identification of Korean pear cultivars using combinations of SCAR markers[J]. Horticulture Environment and Biotechnology. 2012， 53（3）： 228-236.

[54] Khadke G N， Bindu K H， Ravishankar K V. Development of SCAR marker for sex determination in dioecious betelvine （Piper betle L.）[J]. Current Science， 2012， 103（6）： 712-716.

[55] 傅俊生， 劉新銳， 謝寶貴， 等. 草菇SCAR遺傳標記建立及其雜種鑒定應用[J]. 中國農學通報， 2010， 26（17）： 41-46.

[56] Lee C Y， Park J E， Lee J， et al. Development of new strains and related SCAR markers for an edible mushroom， Hypsizygus marmoreus[J]. FEMS Microbiology Letters， 2012， 327： 54-59.

[57] 汪 虹， 陳明杰， 鮑大鵬，等. 一種分子標記快速篩選草菇雜交菌株的方法[P]. 中國專利： CN103060445A， 3013-04-24.

[58] 羅 冉， 吳委林， 張 旸，等. SSR分子標記在作物遺傳育種中的應用[J]. 基因組學與應用生物學， 2010， 29（3）： 137-143.

[59] 金夢陽， 劉列釗， 付福友， 等. 甘藍型油菜SRAP、SSR、AFLP和TRAP標記遺傳圖譜構建[J]. 分子植物育種， 2006， 4（4）： 520-526.

[60] Zhang R Y， Hu D D， Zhang J X， et al. Development and characterization of simple sequence repeat（SSR）markers for the mushroom Flammulina velutipes[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering， 2010， 110（3）： 273-275.

[61] Zhang R Y， Hu D D， Gu J G， et al. Development of SSR markers for typing cultivars in mushroom Auricularia auricular-judae[J]. Mycological Progress， 2012， 11： 587-592.

[62] 許占伍， 陳 輝， 馮志勇，等. SSR特異標記在真姬菇中的可傳遞性[J]. 上海農業學報， 2010， 26（2）： 42-45.

[63] 唐立群， 肖層林， 王偉平. SNP分子標記的研究及其應用進展[J]. 中國農學通報， 2012， 28（12）： 154-158.

[64] 石 磊，岳文斌. SNP的研究進展及其在家畜育種中的應用[J]. 畜禽業， 2007， 215（3）： 25-30.

[65] Lam H M， Xu X， Liu X， et al. Resequencing of 31 wild and cultivated soybean genomes identifies patterns of genetic diversity and selection[J]. Nature Genetics， 2011， 42（4）： 387.

[66] 段學武， 龐學群，張昭其. 草菇低溫貯藏及有關生理變化研究[J]. 熱帶作物學報， 2000， 21（4）： 75-79.