復(fù)合螺旋藻多糖對小鼠抗輻射損傷的作用機(jī)制研究

劉永舉　唐超　葛蔚　王清吉

摘要[目的]研究復(fù)合螺旋藻多糖對X射線輻射損傷小鼠的保護(hù)作用。[方法]將螺旋藻多糖（PSP）與銀杏葉提取物（GBE）按1∶1比例配制不同濃度的復(fù)合螺旋藻多糖。昆明種小白鼠隨機(jī)分為5組（空白對照組、對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組），空白對照組不做處理，對照組灌服生理鹽水，高、中、低劑量組灌服相應(yīng)藥物，連續(xù)14 d，對小鼠進(jìn)行X射線全身照射，照射后繼續(xù)灌服藥物7 d。[結(jié)果]高、中、低劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)與對照組差異性均顯著（P<0.01），并可顯著提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)（P<0.01），CD4+/CD8+比例上升（P<0.01），細(xì)胞恢復(fù)明顯加快，高劑量組CD4+/CD8+比例更接近空白對照組。[結(jié)論]復(fù)合螺旋藻多糖對X射線輻射損傷小鼠的免疫功能有一定的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞復(fù)合螺旋藻多糖；X射線；白細(xì)胞；脾指數(shù)；胸腺指數(shù)；CD4+/CD8+

中圖分類號(hào)S986.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2014）22-07305-02

隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和人們生活的現(xiàn)代化，人們越來越多地接觸射線如電腦、手機(jī)、電視機(jī)、微波爐、空調(diào)以及醫(yī)療設(shè)備等，輻射性損害日益受到重視。因此，近年來輻射生物學(xué)、生物耐輻射機(jī)理及抗輻射藥物的開發(fā)利用等研究引起了人們的極大關(guān)注[1-2]。多糖類物質(zhì)是一種天然的非特異性免疫增強(qiáng)劑，通過被作用于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞參與調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的合成、抗體的生成、補(bǔ)體的生成以及對各種細(xì)胞因子表達(dá)功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[3]。螺旋藻具有超強(qiáng)的抗電離輻射能力，某些藻株對60Coγ射線的致死劑量高于6.4 kGy [4]，同時(shí)螺旋藻多糖能明顯提高蠶豆和小鼠等其他生物抵抗電離輻射的生理活性，并且已開發(fā)出抗輻射醫(yī)藥保健品[1，5-6]。研究表明，螺旋藻多糖和銀杏葉提取物單獨(dú)使用具有較好的抗輻射作用[7-9] 。筆者將螺旋藻多糖和銀杏葉提取物按1∶1復(fù)合，觀察不同劑量復(fù)合物的抗輻射作用，為進(jìn)一步闡明復(fù)合螺旋藻多糖的抗輻射機(jī)理、開發(fā)高效能的天然抗輻射新藥物等提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1螺旋藻多糖與銀杏葉提取物供試螺旋藻購于中國科學(xué)院南海海洋研究所三亞站，為淺綠色粉末。采用三氯乙酸除蛋白法提取螺旋藻多糖（PSP），多糖含量93%以上；銀杏葉提取物（GBE）為實(shí)驗(yàn)室自提，總黃酮含量≥24%，萜內(nèi)酯含量≥6%。

1.2動(dòng)物及腫瘤細(xì)胞供試?yán)ッ鞣N小白鼠購于青島市藥檢所，體重20～24 g，雌雄各半。

1.3試劑抗小鼠單克隆抗體FITCCD4+，F(xiàn)ITCCD8+（欣博盛生物科技有限公司），紅細(xì)胞裂解液（Solarbio公司）。

1.4小鼠飼養(yǎng)管理小鼠自由采食，自由飲水（涼開水），自然光照，定期更換墊料。

1.5照射條件X射線一次性全身均勻照射，源皮距100 cm，劑量率為250 pps，照射量4 Gy。

1.6試驗(yàn)設(shè)計(jì)藥品均以螺旋藻多糖與銀杏葉提取物1∶1復(fù)合。將小鼠隨機(jī)分為5組：空白對照組（不處理），對照組（生理鹽水），高劑量組（300 mg/（kg·d）），中劑量組（200 mg/（kg·d）），低劑量組（100 mg/（kg·d））。除空白對照組外，用灌胃器給各組小鼠灌服生理鹽水及相應(yīng)藥物，一日一次，連續(xù)灌服14 d，對小鼠進(jìn)行X射線全身照射，照射后繼續(xù)灌服藥物。

1.7指標(biāo)測定與方法

1.7.1外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)。小鼠于照射前和照射后1、7 d，眼底采血20 μl，加入WBC（白細(xì)胞）稀釋液380 μl，混勻，加入血球計(jì)數(shù)板中，顯微鏡下進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.7.2免疫器官指數(shù)的測定。在小鼠輻射7 d后，眼眶放血處死小鼠，稱體重，解剖后取胸腺和脾臟，并且稱重，計(jì)算各組小鼠的胸腺指數(shù)、脾指數(shù)。

1.7.3CD4+和CD8+含量的測定。在小鼠輻射7 d后，各取抗凝血100 μl，分別加入2 ml紅細(xì)胞裂解液，室溫15 min，離心，棄上清后加入1 ml PBS，混勻，離心，再棄上清后加100 μl PBS重懸，再各加相應(yīng)抗體混勻，避光孵育15 min，加入400 μl的PBS，離心，棄上清，加入濃度1%甲醛PBS 500 μl，固定30 min，過200目篩，上流式細(xì)胞儀檢測。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)用x±s表示。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用LSD分析法來比較各指標(biāo)組間差異，P<0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

2.1復(fù)合螺旋藻多糖對輻射損傷小鼠外周白細(xì)胞數(shù)的影響由表1可知，輻射前，空白對照組與對照組白細(xì)胞數(shù)差異不顯著（P>0.01），復(fù)合組白細(xì)胞數(shù)與對照組和空白對照組差異顯著（P<0.01），輻射后對照組與復(fù)合組白細(xì)胞數(shù)都下降，與空白對照組差異顯著（P<0.01），但復(fù)合組優(yōu)于對照組，且復(fù)合組中的高劑量組白細(xì)胞數(shù)更接近于空白對照組水平。這說明復(fù)合螺旋藻多糖對輻射損傷小鼠恢復(fù)骨髓造血功能有明顯的促進(jìn)作用。