椰衣提取物總酚含量及抗氧化活性研究

張軍鋒　杜寧　牛成　張名楠　周雪晴

摘要[目的] 測定椰衣不同提取物的總酚含量，考察椰衣不同提取物的抗氧化活性。[方法] 采用不同極性的溶劑對椰衣粉的60%乙醇提物進行萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等4個提取物，以清除l，l-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的能力評價椰衣提取物的抗氧化活性，并采用Folin-Ciocalteu法測定提取物中總酚含量。[結果] 椰衣各提取物均有不同程度的抗氧化能力，順序為 正丁醇提取物>乙酸乙脂提取物>水提物>石油醚提取物。[結論] 椰衣不同提取物均具有抗氧化能力，其與酚類物質含量基本呈正相關，其乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物具有較強的抗氧化活性。

關鍵詞 椰衣；提取物；抗氧化；總酚含量

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07389-02

為棕擱科椰子屬，是熱帶地區主要油料作物，主要產于我國廣東南部諸島及雷州半島、海南、臺灣及云南南部熱帶地區，是海南島特產之一。椰子具有極高的經濟價值，全株各部分均有用途。在醫藥上椰子殼用于治療楊梅瘡、筋骨痛，熬膏外用于體癬、腳癬，椰肉用于治療姜片蟲病，椰子油用于治療疥癬、凍瘡、神經性皮炎，椰子液用于治療心臟性水腫、口干煩渴[1]。到目前為止， 對椰子總酚含量和抗氧化活性的研究尚未見詳細的報道。筆者在此對這方面問題進行了探討，為椰子的進一步開發利用提供依據。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1 研究對象。椰子，購買于海口市海南大學南門，海南大學園藝園林學院吳友根副教授鑒定為棕櫚科植物椰子（Cocos nucifera Linn.）的果實。

1.1.2 主要儀器。UV-2550紫外可見分光光度計（日本SH IM ADZU公司）； BP211D電子分析天平（d：0.000 1 g，德國Sartorius公司）； DFY-200型粉碎機（浙江溫嶺市大德中藥機械有限公司）；RE-2000A型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

1.1.3 主要試劑。鎢酸鈉、鉬酸鈉、磷酸、鹽酸、雙氧水、硫酸鋰等購自上海國藥集團。沒食子酸和1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）購自美國Sigma公司。

1.2方法

1.2.1 提取物的制備。取粉碎過的干燥椰子外衣（椰衣）100.00 g，加入60%乙醇200 ml，提取3次，每次提取72 h，合并次提取液，減壓濃縮至150 ml，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇對濃縮液進行萃取，所得萃取液減壓濃縮并蒸干待用[2]。

1.2.2 椰衣不同提取物總酚含量的測定[3]。

1.2.2.1Folin-Ciocalteu試劑的配制。稱取20.00 g鎢酸鈉和5.00 g鉬酸鈉于圓底燒瓶中，用140.00 ml蒸餾水溶解，加入85% 磷酸溶液10.00 ml，濃鹽酸50.00 ml，文火回流10 h，然后依次加入3.00 g硫酸鋰及15.00 ml雙氧水，搖勻，去除冷凝器，繼續煮沸15 min，以去除多余的雙氧水，溶液呈金黃色，冷卻后，定容至250 ml，過濾后的濾液即福林酚試劑，置于棕色瓶中保存。

1.2.2.2線性關系考察。稱取沒食子酸0.007 5 g，用蒸餾水溶解并定容至50 ml，得濃度為0.15 mg/ml的標準液。準確吸取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00 ml上述沒食子酸溶液分別用蒸餾水稀釋于10 ml，得沒食子酸標準稀釋溶液。分別取2.00 ml不同濃度的沒食子酸標準稀溶液于10 ml的比色管中，加入2.00 ml福林酚試劑，混勻，在0.5～8 min內加入0.75 ml 7.5%的碳酸鈉溶液，充分混合后用蒸餾水定容至刻度，放置2 h，于765 nm下測定吸光度，空白試劑做參比。以沒食子酸在反應體系中的質量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.2.3椰衣粉總酚含量的測定。分別取石油醚提取物（石油醚相）、乙酸乙酯提取物（乙酸乙酯相）、水提物（水相）、正丁醇相提取物（正丁醇相）20 mg，加入20.00 ml蒸餾水溶解，稀釋5倍，分別得到0.20 mg/ml樣品100 ml，按照上述測定沒食子酸標準曲線的方法，測定它們的吸光度，測定3次，根據公式計算得到總酚含量，取平均值。

1.2.3 椰衣提取物抗氧化能力的測定[4]。

1.2.3.1DPPH標準溶液的配制。精確稱取DPPH 0.004 0 g，置于50 ml的容量瓶中，加入無水乙醇溶解定容后，得濃度為0.08 mg/ml，DPPH標準儲備溶液。置于4 ℃冰箱中保存備用。

1.2.3.2樣品對DPPH的清除能力的測定。分別準確稱取50 mg石油醚相、乙酸乙酯相、水相、正丁醇相的樣品用無水乙醇定容至50 ml，稀釋10倍，得到0.10 mg/ml母液備用。分別移取1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 ml于10 ml比色管中，用無水乙醇定容至刻度得到0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08 mg/ml的樣品稀溶液。分別從比色管取1.00 ml樣品溶液置于試管中，再加入配好的DPPH溶液3.00 ml，充分混勻，室溫避光保存30 min后在517 nm處測定吸光度，以無水乙醇為空白對照。每個試驗重復3次，結果取平均值。清除DPPH的能力按下式計算，即DPPH的清除率d（%）=[1-（A1-A2）/A3]×100%，式中，A1為1.00 ml樣品溶液3.00 ml DPPH溶液的混合液在517 nm處的吸光度；A2為1.00 ml樣品溶液與3.00 ml無水乙醇混合液在517 nm處的吸光度；A3為1.00 ml無水乙醇和3.00 ml DPPH混合液在517 nm處的吸光度。