無花果葉和博落回葉提取液對松材線蟲的毒殺作用

秦丹　杜志雯　閆金秀　武培

摘要[目的]研究無花果葉和博落回葉幾種不同有機溶劑提取液對松材線蟲的殺蟲活性。[方法]采用浸漬生測法研究了無花果葉和博落回葉甲醇、乙醇、乙醚、丙酮4種分析純有機溶劑提取液對松材線蟲的抑制作用。[結果]無花果葉和博落回葉的不同溶劑提取液均對松材線蟲有抑制作用，其中無花果葉提取液濃度在200 mg/ml時，甲醇提取液的松材線蟲死亡率（54.5%）最高；博落回葉提取液濃度在200 mg/ml時，蒸餾水對照組和甲醇提取液在72 h校正死亡率分別達到94.4%和88.9%，在20 mg/ml時2種溶劑提取液校正死亡率也分別達到73.3%和67.6%。[結論]為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發利用提供了理論依據。

關鍵詞無花果；博落回；提取物；松材線蟲；毒殺作用

中圖分類號S482.39文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）22-07412-02

松材線蟲病是我國二類檢疫病害，它是由松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）寄生在松樹體內所引起的一種毀滅性病害。松材線蟲主要危害日本黑松、馬尾松、西黃松、歐洲赤松、海岸松和黃山松等松屬植物[1]。目前對松材線蟲有毒殺作用的化學物質由于水溶性、內吸性差、結構復雜以及合成困難、毒性高、成本高等原因影響實際應用，迫切需要研發出經濟環保的新型殺松材線蟲藥劑。

博落回（Macleaya cordata），又名落回、號筒草等，為多年生大型草本，基部灌木狀，主要分布在日本和我國淮河以南。莖葉中的生物堿對蠅蛆[2]和糞線蟲有較好的滅殺活性[3]，葉中分離得到的血根堿能殺滅魚類指環蟲[4]，具有良好的抑菌活性。無花果（Ficus carica Linn），屬于桑科（Moraceae）榕屬（Ficus），葉片寬大，表面光滑，具有抗病毒、抗菌、降血糖、降血脂、抗腫瘤、降血壓、治療白癜風等作用[5]，其所含化學成分有呋喃香豆素、補骨脂素、黃酮、果膠、香檸檬內酯、樹脂、糖類和VC等[6-9]，是一種具有開發應用前景的資源。筆者利用不同溶劑對無花果葉和博落回葉進行了粗提，并對制成的提取液進行了殺松材線蟲活性研究，以期為新型殺松材線蟲藥劑的綜合開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1材料 供試無花果葉和博落回葉采自安徽科技學院；供試線蟲從安徽省鳳陽縣病區松樹分離，在25 ℃培養箱中用玉米粒培養基培養的盤多毛孢（Pestalotia sp.）培養15 d后，用改良貝曼漏斗法分離收集線蟲。

1.2方法

1.2.1 無花果粗提液的制備。無花果鮮葉用清水洗凈泥土，取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中，加少許石英砂和提取劑，在冷水中充分研磨，完全轉移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑，用超聲波振蕩器處理10 min，用保鮮膜封口，靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機上抽濾，濾渣再加入50 ml提取劑，輕輕搖晃并靜置30 min后過濾，合并濾液，制得粗提取液[10]。

1.2.2 博落回粗提液的制備。因博落回有毒，處理材料時要戴手套，洗凈泥土，剪去莖。取10 g晾干后的鮮葉剪碎于研缽中，加少許石英砂和提取劑，在冷水中充分研磨，完全轉移至500 ml錐形瓶中。加入150 ml提取劑，用超聲波振蕩器處理10 min，用保鮮膜封口，靜置過夜。然后將提取液在真空抽濾機上抽濾，濾渣中再加入50 ml提取劑，輕輕搖晃并靜置30 min后過濾，合并濾液，制得粗提取液。

1.2.3 提取液的濃縮。將粗提取液倒入蒸發瓶中，在旋轉蒸發儀上蒸發濃縮至黏稠狀，用少量蒸餾水多次沖洗蒸發瓶，將葉的提取液完全轉移到容量瓶中，用蒸餾水定容。無花果葉提取液定容至50 ml，配制成相當于無花果鮮葉200 mg/ml的溶液；博落回葉提取液分別定容至50和500 ml的溶液，配制成相當于博落回鮮葉200和20 mg/ml的溶液，搖勻，置于4 ℃冰箱中備用[11]。

1.2.4殺線蟲活性的測定。采用浸漬生測法[11]。取3 ml提取物加入直徑為3 cm的培養皿，向培養皿中挑入大小一致、生長狀態良好的松材線蟲30條，每個培養皿作為1個處理，每處理3個重復，對照為蒸餾水。加蓋，置于25 ℃培養箱中培養24、48、72 h，用體式顯微鏡（COVS50G）檢查線蟲死亡或存活數量[12]。各處理校正死亡率按Abbott公式計算，按照文獻[13]方法對殺線蟲活性強弱進行如下分級：“-”表示校正死亡率≤10%，無殺線蟲活性；“+”表示校正死亡率為10%～30%，殺線蟲活性弱；“++”表示校正死亡率為30%～50%，殺線蟲活性中等；“+++”表示校正死亡率為50%～80%，殺線蟲活性較強；“++++”表示校正死亡率>80%，殺線蟲活性強。通過SAS（V6.2）程序求解毒力回歸方程。

2結果與分析

2.1 200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液對松材線蟲的毒力 由表1可知，200 mg/ml無花果葉不同溶劑提取液處理24 h，只有甲醇提取液有殺線蟲活性，72 h后4種溶劑提取液