產蛋雞免疫程序對卵黃抗體效價的影響

藏玉婷 張楊 王彬 宋揚 孫德君 丁國杰

摘 要：試驗用小鵝瘟免疫原按8種免疫程序接種120日齡產蛋雞，分別在接種后不同時間瓊脂擴散試驗試驗檢測卵黃抗體效價，篩選出最佳免疫接種程序?；A免疫，產蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；在基礎免疫后14 d進行第2次接種，加強免疫，產蛋雞每只肌肉多點注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL；在加強免疫后14 d進行第3次接種，強化免疫，產蛋雞每只肌肉多點注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL。

關鍵詞：卵黃抗體；抗體效價；產蛋雞；免疫程序

雞卵黃免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk，IgY）是母雞受到免疫刺激后選擇性將其血清中相應的特異性IgG轉移至卵黃中并蓄積而成的[1]。目前在IgY的形成、生物學特性等方面已研究得比較清楚，并且IgY作為診斷試劑和防治藥物的研究愈來愈受到關注[2-3]。為此，本實驗將產蛋雞按不同免疫程序接種免疫原，通過比較抗小鵝瘟IgY效價高低來確定雞群免疫程序，現將試驗結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 小鵝瘟免疫原 小鵝瘟活疫苗（GD株），疫苗批號GD201001；小鵝瘟滅活疫苗（H株），疫苗批號H201001；上述兩種疫苗均由哈藥集團生物疫苗有限公司制備。

1.1.2 試驗用產蛋雞 120日齡產蛋雞420只，由哈藥集團生物疫苗有限公司實驗動物中心提供；達到《生產用產蛋雞質量標準》要求。

1.1.3 小鵝瘟陽性血清 東北農業大學王君偉教授惠贈。

1.1.4 小鵝瘟瓊擴抗原 參照“小鵝瘟診斷技術” [4]的方法制備。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 將400只產蛋雞分成8組，每組50只。同時另設健康對照20只，隔離飼養。

1.2.2 免疫程序設定 基礎免疫，其中4組產蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份），另外4組產蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟滅活疫苗1.0 mL；加強免疫，在基礎免疫后14 d進行第2次接種，產蛋雞每只肌肉多點注射不同劑量小鵝瘟滅活疫苗；強化免疫，在加強免疫后14 d進行第3次接種，產蛋雞每只肌肉多點注射不同劑量小鵝瘟滅活疫苗，對照組與試驗組同時進行生理鹽水注射，具體免疫程序見表1。

1.2.3 抽樣 分別于基礎免疫前、加強免疫前、強化免疫前和強化免疫后14 d 4個時間點采集雞蛋，每個時間點從不同組分別收集雞蛋10枚，打蛋分離卵黃，無菌混合卵黃液各10 mL作為待檢樣品，用于抗體效價測定。

1.2.4 抗體效價測定 在8.0%氯化鈉溶液100 mL中加入1 g優質瓊脂粉，加熱融化后，加入終濃度為0.01%硫柳汞防腐，澆制凝膠板。在其上按中央1孔外圍6孔打孔，孔徑5 mm，間距3 mm。將抗體作2倍系列稀釋后進行試驗，抗原及其抗體加樣量以孔滿為度（約25 μL），加樣后置37～38℃濕盒孵育24～48 h。當陰、陽性血清對照成立時，與標準抗原形成白色沉淀線的抗體最大稀釋倍數即為卵黃抗體的效價。

2 結果

2.1 不同時間點抗體測定結果

8組免疫程序接種產蛋雞后不同時間點，瓊脂擴散試驗檢測卵黃抗體效價，基礎免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）的免疫效果優于小鵝瘟滅活疫苗（H株）的免疫效果，而在以活苗作為基礎免疫的試驗組中，第4組=第3組>第2組>第1組。第4組和第3組抗體效價無差異，確定第3組免疫程序為小鵝瘟卵黃抗體最佳免疫程序（表2）。

2.2 小鵝瘟卵黃抗體最佳免疫程序

小鵝瘟卵黃抗體最佳免疫程序詳見表3。

3 討論

用小鵝瘟免疫原按不同免疫程序接種120日齡產蛋雞，8組免疫程序接種產蛋雞后不同時間點卵黃抗體效價檢測，基礎免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）免疫后14 d，瓊擴效價達到1∶8，而基礎免疫中小鵝瘟滅活疫苗（H株）免疫后14 d，瓊擴效價只達到1∶4，因此基礎免疫中小鵝瘟活疫苗（GD株）的免疫效果優于小鵝瘟滅活疫苗（H株）的免疫效果；而在以活苗作為基礎免疫的試驗組中，加強免疫多點注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL 優于1.0 mL；強化免疫接種3.0 mL與4.0 mL免疫效果相同，考慮到節約疫苗用量以及避免免疫抑制問題，因此，加強免疫選擇肌肉多點注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL。通過比較接種后不同時間卵黃抗體效價，確定小鵝瘟卵黃抗體免疫程序為：基礎免疫接種，產蛋雞每只肌肉注射小鵝瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；加強免疫接種，在基礎免疫后14 d進行第2次接種，產蛋雞每只肌肉多點注射小鵝瘟滅活疫苗2.0 mL；強化免疫接種，在加強免疫后14 d進行第3次接種，產蛋雞每只肌肉多點注射小鵝瘟滅活疫苗3.0 mL?！觯ň庉嫞旱一郏?/p>

參考文獻：

[1] Peterson R. Antibody production and transfer to egg yolk in chicken [J].Immunol.1962，89：272.

[2] 張玲，蒙永祥，等.雞蛋黃免疫球蛋白IgY的特性及其應用[J].新中醫，2003（4）： 78-79.

[3] 羅函祿.高免卵黃抗體的應用及其展望（二）[J].江蘇農業科學，1997（6）： 59-60.

[4] 中國標準出版社第一編輯室編. 動物防疫標準匯編[M].北京：中國標準出版社，2004，473-478.