HPLC測定食品中維生素B2的研究

本文研究以HPLC分析食品中維生素B2，用HCI從樣品中提取維生素B2，通過C18柱，以甲醇—水為流動相，用熒光檢測器測定，方法準確度高，回收率高，最低檢出量為0.1ng。

維生素B2在營養學上是一種重要化合物，目前的測定方法有比色、極普、熒光和微生物法。極譜法分析靈敏度低，只能用于藥物和維生素B2含量較高的潔凈食物；微生物法可靠性和準確性較好，但使用不便，目前常用的以熒光分光光度法居多。本文提出使用高效液相色譜熒光檢測器法對食品中維生素B2進行測定。

（1）實驗部分

儀器與試劑 高效液相色譜儀；熒光檢測器；甲醇；鹽酸，0.05M、0.1M；0.3M NaOH；維生素B2標準溶液；準確稱取在干燥器內干燥24h的維生素B2 0.0250g于小燒杯中，用0.1M HCI溶解，移入1000ml容量瓶中并稀釋至刻度，濃度為25.0μg/ml。此溶液放棕色瓶中置于冰箱保存。

（2）樣品處理條件的選擇

選擇將含有等量維生素B2的溶液調成不同PH值。PH<2.2時，維生素B2峰高無變化；pH2.63～6.82時，峰高隨pH增高而下降；PH>9.08則峰高顯著下降。pH9.00的溶液放置12天后，峰高由原來的69mm下降至15mm，這可能是由于堿性水解所致。測定時選用pH1.5-2.0為宜。

溫度的影響對餅干成品和半成品（未經烤制的）分別進行多次測定，同時對鮮奶進行了不同溫度的實驗，結果對測定無影響。

（3）樣品處理

強化糕點類：準確稱取含Vit-B2-5μg的研碎樣品一定量放入10ml具塞錐形瓶中，加入0.5M HCI30ml，加塞振蕩10min，靜置30min，經4-5號砂芯漏斗抽濾，提取液供液相色譜分析，進樣4.0μl。

蔬菜、水果、鮮奶類準確稱取含hit-B25--7μg的此類食品于100ml具塞錐形瓶中，加入30ml 0.1M HCI調節pH至2.0，用0.05M HCI定容至100ml，經4-5號砂芯漏斗抽濾，提取液供液相色譜分析，進樣20.0μl。

（4）操作條件選擇

流動相最佳配比：選用甲醇—水系統為流動水相，改變二者配比，當甲醇/水為30/70時，Vit-B2 檢出效果最佳。

色譜條件柱：4×150mm，μ Bondapark C18；流動相：甲醇/水（30/70）；流速：2.0ml/min；熒光檢測器：Ex=450nm，Em=525nm；靈敏度，03AUFS；實驗溫度：室溫。

（5）工作曲線

取一定量Vit-B2標準溶液，用0.05M HCI稀釋成1.0μg/ml的標準使用液，取使用液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl，按上述色譜條件測定，以Vit-B2的峰高為縱坐標，進樣量為橫坐標作圖。本法以Rt定性，外標法定量，最低檢出量為0.1ng。

方法回收率取餅干、蘋果、鮮奶，加入Vit-B2標準液一定量，其回收率為91%～102%。

精密度對餅干和鮮奶各測定10次，其變異系數分別是0.92%和1.22%。