強化食品中賴氨酸的薄層 分離定性\\定量法

本報告用薄層層析（TLC）定性、定量強化食品中賴氨酸。

原理：樣品經處理后，點板、展開、噴以茚三酮顯色，根據TLC法的比移植（Rf）與標準比較定性；將色斑刮下，洗脫液在510nm波長測定吸光度，與標準比較定量。

樣品處理：稱取10g~20g樣品，加蒸餾水溶解，定容至25ml，混勻，放置數分鐘，過濾，濾液備用。

薄層分離：制板稱取4.5g硅膠G制成15cm×5cm板4塊，100℃活化后置干燥器中備用

點樣：用微量注射器在以活化的硅膠G板上分別點賴氨酸標準溶液（2mg/ml）1.0、2.0、3.0、4.0、5.0（μl）及樣品提取液5μl，于8.0℃以下干燥。

展開：以正丁醇：醋酸（1：1）為展開劑展開（約4h時展至板頂端），揮去溶劑，再放入烘箱內至干。

顯色定性取出薄板，噴以0.5%茚三酮溶液，80℃烘箱中放置10min，根據顯示紅色斑點的Rf值與標準比較定性。

定量：小心將紅色斑點刮下（同時刮下相當的硅膠G作為空白），放入10ml比色管中，分別加入5ml洗脫液（75%乙醇：0.2%硫酸銅39:1）搖勻數分鐘，靜置20min，離心10min（2000rpm），取上清液于510nm，1cm比色杯吸光度，并繪制標準曲線，求出樣品中賴氨酸的含量。

計算：

賴氨酸（mg/100g）=[A×1000w×V2V1×100]

式中A——樣品溶液中相當賴氨酸量，μg；V2——點樣量，μl；V1——樣品定容積，ml；W——取樣重量，g。

結果：本法線性濃度范圍2μg~10μg；最低檢出量0.2μg；添加回收率82%~119%。