葡萄酒中苯甲酸和山梨酸含量測定方法的研究

摘要：在本文中，建立了高效液相色譜法對葡萄酒中苯甲酸和山梨酸含量進行測定，并以實例檢測表明，用此方式對葡萄酒檢驗能夠有著分離速度快、重現性強、分析結果準確的特點。

關鍵詞：葡萄酒 苯甲酸和山梨酸 測定方法

1 概述

葡萄酒是一種以葡萄為基本原材料，并經過一系列的發酵或者部分發酵而釀成的酒，是屬于發酵酒中的一種，由于其口味鮮美、味道純正而受到人們的廣泛歡迎。在我國的食品衛生標準中，對酒類的配制過程測定的方法進行了一系列的規定，按照規定中指定的方法對葡萄酒進行測定，其中的蛋白質與天然色素等體積較大的分子顆粒非常容易出現對色譜柱進行堵塞，從而使柱壓增大，進而使得相應葡萄酒會由于時間變化大而出現柱效下降的問題，這也會對色譜柱造成非常大的損傷，不僅使其難以修復，還會使其使用的壽命造成非常大的縮短。為此，我們可以通過在實際測定之前對其測試樣品先進行一系列的前處理，從而對這種現象進行適當的解決。

2 測試儀器與方法

2.1 測試儀器 對于測試的儀器部分，我們選擇了LC-10A液相色譜儀；0.45μm微孔濾膜；純化水機；超聲波清洗器等等。

對于甲醇我們選擇的是光譜純類甲醇，去離子水則保證其標準為18.23MΩ/cm。而對于亞鐵氰化鉀的制作，我們先選取102.0g亞鐵氰化鉀，并將其放入水中進行溶解，一直稀釋到1000mL為止。乙酸鋅溶液則先稱量217.0g乙酸鋅，并加入31mL乙酸融入到水中，同樣稀釋到1000mL為止。對于氨水則使用一比一的比例進行選取。碳酸氫鈉溶液制作則將2g的NaHCO3溶解到100mL水中；苯甲酸標準溶液我們將0.1g的苯甲酸中放入5mL的碳酸氫鈉溶液中進行溶解，并將其用純凈水進行稀釋至100mL；對于山梨酸溶液的配置則參考苯甲酸溶液；另外對于山梨酸與苯甲酸則由我國的生物食品的制定檢定所中進行購買，作為測試主體的葡萄酒則在當地超市中購買即可。

2.2 色譜條件 色譜柱：對于色譜柱我們選取了規格為6*150mm的shim.packCLC一ODSΦ，而對于預柱則選取了shjm-PackG一ODS。

流動相：使用的甲醇為0.02mmol/L，而其乙酸銨的配比則選取為100。

流速方面則保證其每分鐘的流速為1mL，同時柱溫度應當保持在25攝氏度。檢測的波長則以220nm為宜。

2.3 樣品預處理 首先，應當稱量10g的樣品放置到容量為100mL的試驗燒杯中，并將其進行加熱直至其體積為原來總體積的三分之二為止，再將其轉移到容量為50mL的比色管中，并向其中加入20mL的水將其稀釋。之后，再使用氨水對其pH值進行調節，當調節基本為7之后，再向其中加入亞鐵氰化鉀溶液與乙酸鋅溶液各5mL，然后再向其中加水到相應刻度為止，并對其進行后續的搖勻、靜置步驟。最后再去清液經過濾膜過濾之后，就可以安置在一旁等待測量。

2.4 制作標準曲線 在此環節中，我們分別配置一系列濃度不同且從低到高順序的溶液來進行相色譜儀測試工作，并按照其峰面積與質量的濃度不同制作成相應的工作曲線。其現行范圍由下表所示：

表1 山梨酸與苯甲酸標準曲線的線性范圍

2.5 對樣品進行測量 通過我們從市面中選取的三種不同品牌的葡萄酒，并對其進行逐個的測定，得到了下面的實驗結果。從實驗結果中我們可以看出，這幾種不同品牌的葡萄酒其山梨酸與苯甲酸的含量都符合標準，處于正常水平，可以放心的進行飲用。

表2 三品牌葡萄酒測試結果

3 結果討論

3.1 流動相組分比列選擇 對樣品溶液、山梨酸鉀溶液使用入不同流動相比列進行測試，并對各組別的保留時間以及分離效果進行細致的觀察，在不同比例的比列（60：40；70：30，80：20；）測試中，我們發現當乙酸銨同甲醇的比為70：30時，其工作流動線的基線分離情況比較合適，同時其出峰的時間也令人滿意。

3.2 樣品處理

3.2.1 去除乙醇 在葡萄酒中，乙醇是必定占有一定比例的。而從以往經驗來說，乙醇會在色譜測試中出現較大的寬風，從而會對所測定樣品的峰形產生影響。所以，在我們對不同葡萄酒進行取樣之后，就應當以水浴的方式對其進行加熱，從而將乙醇去除。

3.2.2 調節PH值 在葡萄酒中，有機酸的種類有很多，這種情況的存在也會使得酒中含有一定的酸度。為了使我們測試樣品物質的測試標準與測試時間相一致，在實際的實驗過程中就應當適當的使用氨水對其進行調節，而當對pH值進行調節之后，保留時間存在的偏差就可以忽略不計了。

3.2.3 大分子物質的沉淀 大分子物質使我們在測試過程中不能忽略的一部分，而亞鐵氰化鉀則是一種對大分子物質以及蛋白質進行沉淀的物質，在我們目前的食品含量測試工作中經常會被用到，同時其使用方式也非常方便。在實驗中，我們以20%的加入量對其進行了使用，而結果表明，沉淀效果滿足要求。

4 結束語

在本文中，我們以高效液相色譜技術對葡萄酒中的山梨酸以及苯甲酸的含量進行了測定，而且得到了較好的效果。在實際測試過程中，則應當把握每一個細節，從而得到更為準確的測試結果。

參考文獻：

[1]黃慧芬，辜華勝，彭方.高效液相色譜法測定肉制品中苯甲酸和山梨酸[J].中國衛生檢驗雜志.2010（07）：1686-1687.

[2]白靜.高效液相色譜法測定食品中的安賽蜜[J].食品科學.2011（16）：245-248.

[3]王新運，萬新軍，吳鳳義.高效液相色譜法快速測定飲料中苯甲酸的方法研究[J].巢湖學院學報.2009（06）：76-78.