DC—CIK治療晚期惡性腫瘤的研究

摘要：目的 分析DC-CIK細胞治療晚期惡性腫瘤的臨床意義。方法 對我院治療的50例Ⅲ、Ⅳ期惡性腫瘤患者化放療后1個月行DC-CIK細胞治療患者資料進行回顧性分析，對接受DC-CIK治療4周期前后患者的癥狀、腫瘤負荷及T細胞亞群結果進行隨訪觀察，評價治療有效率。結果 DC-CIK治療前后腫瘤客觀緩解率（ORR）為23.8%，CD3、CD4、CD8、CD16、CD56均有明顯的升高，生活質量評分顯著改善，僅少數患者輸注過程中出現發熱，未見其他不良反應。結論 采用DC-CIK細胞治療晚期惡性腫瘤患者能改善患者免疫功能，改善患者生活治療，延長生存期，具有一定的臨床使用價值。

關鍵詞：晚期惡性腫瘤；DC-CIK；過繼免疫治療

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2012年9月～2013年10月在我院行放化療治療后1個月的晚期惡性腫瘤患者，Karnofsky評分>60分。

1.2 DC-CIK細胞制備與治療

1.2.1 CIK細胞的制備 采集PBMC，經人淋巴細胞分離液密度梯度分離（2 000 r/min，離心20 min）。取白膜層細胞， 以生理鹽水洗滌3次，懸浮于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基中，調整細胞濃度為2×106/mL，第0 d加入IFN-γ 1000 U/mL，37℃5%CO 孵箱中培養。24 h后加入鼠抗人CD3單克隆抗體50 ng/mL、IL-1 100 U/mL、IL-2 500 U/mL，繼續培養。每3 d半量換液，補足細胞因子。

1.2.2 DC細胞的制備 在1.2.1獲得的貼壁的單個核細胞中加入含GM-CSF 1000 U/mL、rhIL-4 1000 U/mL的AIM2V培養基，在37℃、體積分數為5% 的CO2中培養，換液1次/3 d。第3 d將腫瘤抗原加入DC培養液內，第5 d加入腫瘤壞死因子2α（TNF2α）1000 U/rnl，共培養7～10 d。DC細胞皮下注射地1、3、5、7 d，CIK細胞回輸第5、7 d。DC-CIK細胞治療4周期，1次/月。

1.3 T細胞亞群分析 空腹取5 mL靜脈血抗凝，利用流式細胞儀進行T細胞亞群檢測。

1.4 隨訪 所有入組病例全部隨訪，至2013年10月，隨訪6～12個月，中位隨訪10個月。

1.5統計學處理 采用SPSS 13.0進行統計分析，計量資料以均數±標準誤（x±s）表示，比較采用兩樣本均數t檢驗；生存資料分析采用Kaplan-Meier法及Log rank檢驗。檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1 DC-CIK細胞治療前后免疫指標的變化 患者治療前外周血CD3、CD4、CD8 等免疫指標均明顯降低，顯示晚期惡性腫瘤患者存在著嚴重細胞免疫功能缺陷。經DC-CIK治療后上述指標數值顯著提高（P<0.05），見表1。

2.2治療后實體瘤療效評價 50例患者均可評價療效。其中1例 CR（腎癌患者），9例PR （非小細胞肺癌4例，乳腺癌2例，胃癌1例，結腸癌1例，鼻咽癌1例），35例SD，5例PD （肝癌3例，小細胞肺癌1例，胰腺癌1例），ORR為20.0%。

2.3不良反應情況 絕大部分患者輸注DC-CIK過程中無明顯不良反應，僅5例出現一過性發熱，體溫最高為38.8℃，經處理后很快緩解，未影響治療。

2.4癥狀改善情況 研究組平均提高17分，其中改善30例，穩定15例，進展5例。生物治療后kamofsky評分總提高率分別為90.0%。

3討論

細胞因子誘導的殺傷細胞是繼淋巴因子激活的殺傷細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞后的新型細胞，其增殖能力和殺傷活性顯著高于LAK細胞，主要效應細胞是CD3+CD56+細胞，是一種安全的輔助治療手段[1]。

DC作為體內功能強大的專職抗原遞呈細胞，在細胞毒性T細胞的活化過程中發揮著重要的作用[2]。CIK細胞和DC聯合應用，不僅可增強免疫效應細胞的抗腫瘤活性，還可以使效應細胞對腫瘤靶細胞的殺傷更具特異性。

體外及動物研究證實CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對正常骨髓造血前體細胞毒性小等多種優勢。單獨應用CIK等免疫效應細胞進行過繼免疫治療時，部分患者的治療效果不太理想，這可能與腫瘤患者功能性DC細胞缺乏有關。DC作為體內功能最強大的抗原遞呈細胞，能誘導出抗原特異性細胞毒T淋巴細胞反應（Cytotoxic T lymphocyte，C，IIJ），在人抗腫瘤免疫的治療中發揮了重要的作用。將CIK細胞和DC細胞聯合起來治療惡性腫瘤，將有助于解除部分腫瘤患者T細胞的免疫無能，從而最大程度發揮其協同抗腫瘤作用[3-4]。

術后輔助化療后，體內化療敏感的殘存腫瘤細胞大部分得到清除，但化療會在一定程度上造成機體免疫功能的低下，因此化療結束后是免疫治療的較好時機。術后化療后進行CIK細胞治療可改善患者免疫功能，延長患者生存期。

晚期惡性腫瘤患者由于機體一般狀態差，KPS評分低，無法耐受手術、放療、化療等治療手段，而單純的姑息治療效果又不理想，因此尋找更有效、安全的治療手段成為目前研究關注的焦點。在眾多的治療手段中，生物治療憑借其獨特的作用逐漸發展成為腫瘤綜合治療的第四大模式，作為手術、放療、化療的有益補充。在這其中以DC-CIK細胞治療最具代表性，臨床應用也最廣泛。本研究中90%晚期惡性腫瘤患者經DC-CIK治療后生活質量明顯改善，生存期延長。

綜上所述：DC-CIK治療作為一種新的抗腫瘤方法，有一定的應用前景和推廣價值，值得進行更廣泛的臨床研究。

參考文獻：

[1]Schmidt-Wolf IG，Lefterova P，Mehta BA，et al.Phenotypic characterization and identification of effector cells involved in tumor cell recognition of cytokine-induced killer cells[J]. Exp Hematol，1993，21（13）：1673-1679.

[2]Avigan D.Dendritic cells： development，function and potention use for cancer immunotherapy[J].Blood Rev，1999，13：51-64.

[3]Scheffold C， Brandt K， Johnston V， et al.Potential of autologous immunologic effector cells for bone marrow purging in patients with chronic myeloid leukemia[J].Bone Marrow Transplant，1995，15（1）：33-39.

[4]Verneris MR，Kornacker M，Mailander V et al.Resistance of ex vivo expanded CD3+CD56+T cells to Fas-mediated apoptosis[J].Cancer Immunol Immunother，2000，49（6）：335-345.

編輯/肖慧