瑞舒伐他汀對ApoE基因缺陷小鼠主動脈SR—AⅠ表達的影響

摘要：目的 探討瑞舒伐他汀對ApoE基因缺陷小鼠動脈粥樣硬化以及主動脈AⅠ型清道夫受體（SR-AⅠ）表達的影響。研究瑞舒伐他汀抗動脈粥樣硬化（AS）降脂外的可能機制。方法 20只6 w齡雄性ApoE基因缺陷小鼠隨機分為高脂模型組、瑞舒伐他汀組，高脂飲食喂養13 w；10只野生雄性小鼠作為正常對照組，正常飲食喂養13 w。13 w后處死小鼠后取主動脈，用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色及SR-AⅠ免疫組織化學染色；另一部分標本-80℃保存，提起總蛋白和mRNA，并做Western Blot 和RT-PCR檢測。觀察主動脈血管壁形態學變化，定性和定量分析主動脈組織清道夫受體1（SR-AⅠ）表達強度變化。結果 和正常對照組相比，高脂模型組主動脈粥樣硬化病變程度明顯加重，主動脈SR-AⅠ蛋白和mRNA的表達均明顯增加；和高脂模型組比較，瑞舒伐他汀組主動脈粥樣硬化病變程度減輕，SR-AⅠ蛋白和mRNA的表達均減少。結論 瑞舒伐他汀可減輕主動脈粥樣硬化病變程度并可減少主動脈SR-AⅠ的表達；瑞舒伐他汀抗動脈粥樣硬化的降脂外作用可能與抑制主動脈SR-AⅠ的表達有關。

關鍵詞：瑞舒伐他汀；ApoE基因缺陷小鼠；動脈粥樣硬化；AⅠ型清道夫受體

目前他汀類藥物已被公認為具有抗動脈粥樣硬化作用，越來越多的研究表明它在抗動脈粥樣硬化的形成和發展方面，除了降脂作用外還有很多調脂外的抗動脈粥樣硬化機制，而SR-AI在動脈粥樣硬化的形成中起著重要的作用，本實驗通過研究瑞舒伐他汀對主動脈SR-AI表達的影響，探討其調脂外的抗動脈粥樣硬化機制。

1資料與方法

1.1動物 健康野生型雄性小鼠10只、ApoE基因缺陷雄性小鼠20只，體重18.5～21.2 g/只，購自南京醫科大學實驗動物中心。

1.2藥物 瑞舒伐他汀，商品名可定，由阿斯利康制藥有限公司提供。

1.3飼料 基礎飼料及高脂飼料均由南京醫科大學實驗動物飼料廠提供。高脂飼料配方：含10%豬油，2%膽固醇 0.2%膽酸鈉 87.8%普通飼料。

1.4光鏡病理試劑均由武漢博士德生物工程有限公司生產。ABC免疫組化染色試劑盒、日立7600-010全自動生化分析儀、日本歐林巴斯彩色病理圖像分析系統。

1.5方法

1.5.1動物分組 正常對照組（A組）：6 w齡雄性野生型小鼠10只，給普通飼料、飲水喂養；將20只6 w齡APOE基因缺失雄性小鼠隨機分為二組：高脂模型組10只（B組）：予高脂飲食、飲水；瑞舒伐他汀藥物干預組10只（C組）：給予高脂飲食、飲水和瑞舒伐他汀10 mg/Kg/d； 三組喂養時間均為13 w。

1.5.2樣本采集 樣本采集前12 h禁飲禁食，采用眼球摘取采血約1.5 mL，離心取血清。小鼠引頸法處死，開胸剝離主動脈全長（從主動脈弓起始到腹主動脈分支處），生理鹽水沖洗后，放入10%甲醛固定，取主動脈弓部動脈，常規酒精脫水、石蠟包埋、切片，用于常規形態學及免疫組化檢測。

1.5.3病理觀察 HE染色后光鏡下觀察各組主動脈內膜病變。

1.5.4免疫組化 檢測通過ABC法染色，觀察各組主動脈血管壁組織SR-AⅠ表達水平。

1.5.5 Western blot 根據試劑盒檢測，觀察各組主動脈血管壁組織SR-AⅠ蛋白表達水平。

1.5.6 RT-PCR 根據試劑盒檢測[1]，觀察各組主動脈血管壁組織SR-AⅠmRNA表達水平。

1.5.7統計學方法 各數據以均數±標準差（x±s）表示，組間比較首先行方差齊性檢驗，方差不齊，使用非參數檢驗（Kruskal Wallis test），方差齊采用方差分析，采用SPSS 17.0統計軟件對實驗數據進行統計學處理。P≤0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1動脈粥樣硬化程度 正常對照組小鼠動脈血管各層結構完整，內膜薄，無動脈硬化斑塊。高脂飲食組內膜明顯增厚，脂質斑塊彌漫，泡沫細胞大量聚集，管腔明顯狹窄。瑞舒伐他汀干預組斑塊厚度減輕，泡沫細胞減少，管腔狹窄減輕，見圖1。

2.2主動脈壁SR-AⅠ蛋白和mRNA表達 瑞舒伐他汀組主動脈SR-AⅠ蛋白表達量輝度值（值越低表達水平越高）為（130.3±6.7），與正常對照組的（122.4±12.5）相比P>0.05，但高于高脂模型組的（88.8±2.4），P<0.05。瑞舒伐他汀組主動脈壁SR-AⅠmRNA表達量（值越高表達水平越高）為（95.6±5.8），低于正常對照組的（99.2±4.6），P>0.05，低于高脂模型組（195.3±7.7），P<0.05，見圖2、3。

3討論

本實驗結果顯示與陽性對照組比較，瑞舒伐他汀組小鼠的動脈粥樣硬化形態學改變較陽性對照組明顯減輕，說明瑞舒伐他汀鈣可產生抗AS作用， 減少動脈粥樣斑塊形成。陽性對照組動脈SR-AⅠ的表達均明顯高于陰性對照組， 差異有統計學意義， 提示SR-AⅠ表達在AS的發病過程中起著重要的作用。瑞舒伐他汀鈣干預組與陽性對照組相比SR-AI的表達明顯減少， 差異有統計學意義，進一步證明SR-AI表達在AS的發病過程中起著重要的作用。

研究表明，清道夫受體（Scavenger Receptor， SR） 是一種跨膜糖蛋白，可與多種帶負電荷的大分子如ox-LDL結合，并迅速轉移至細胞內降解，致使膽固醇及膽固醇酯在細胞內聚集，形成泡沫細胞，因而SR在動脈粥樣硬化的形成中起著重要的作用[2]。在巨噬細胞、血管內皮細胞、血管平滑肌細胞和肝細胞都有SR 表達。現階段已明確的能在AS病變部位檢測到，在泡沫細胞的形成中發揮作用的SR包括：SR-A、CD36、SR-BⅠ（SR-B）、CD68（SR-D）、LOX-1（SR-E）、SREC（SR-F）及SR-PSOX（SR-G）。其中SR的A型（SR-AⅠ、SR-AⅡ）和B型（SR-BⅠ、CD36）與AS密切相關。SR-A以三聚體形式存在。它存在3種異構體，即SR-AⅠ、SR-AⅡ和SR-AⅢ。Ⅰ型與Ⅱ型SR-A可與OX-LDL結合，在泡沫細胞和動脈粥樣硬化的形成中起重要的作用[3]。Babaev VR等[4]用SR-AⅠ/Ⅱ基因缺陷小鼠模型研究表明，敲除SR-AⅠ/Ⅱ基因的小鼠和未敲除的小鼠相比主動脈粥樣病變的面積減少60%，從而證明SR-AⅠ/Ⅱ明顯有助于動脈粥樣硬化的形成。Hiltunen TP[5]研究表明WHHL （watanabe heritable hyperlipidemic rabbits ）兔的脂質條紋里有大量的SR-AⅠ表達。Nakagawa- Toyama Y 等[6]通過人類的尸體解剖研究揭示從彌漫性內膜增厚到動脈粥樣斑塊的區域都有SR-AⅠ/Ⅱ的表達。本研究表明高脂模型組主動脈SR-AⅠ表達和陰性對照組相比明顯增加，這和上述的研究是相符的。

研究表明，他汀類藥物可以通過降低LDL以及某些降脂外的作用而起到抗動脈粥樣硬化的作用[7]。本實驗中瑞舒伐他汀組和高脂模型組相比主動脈粥樣硬化病變減輕，表明瑞舒伐他汀有肯定的抗動脈粥樣硬化作用。，和高脂模型組相比，瑞舒伐他汀組主動脈組織SR-AⅠ下調，提示我們瑞舒伐他汀抑制主動脈SR-AⅠ的表達可能為其調脂外的抗動脈粥樣硬化機制之一，但具體機制尚不明確，需完善相關實驗進一步明確。

參考文獻：

[1]DeWitte-Orr SJ， Collins SE， Bauer CMT， et al. An Accessory to the 'Trinity'： SR-As Are Essential Pathogen Sensors of Extracellular dsRNA， Mediating Entry and Leading to Subsequent Type I IFN Responses[J].PLoS Pathogens，2010，6（3）： e1000829.

[2] Jalkanen J， Leppnen P， Nrvnen O， et al. Adenovirus-mediated gene transfer of a secreted decoy human macrophage scavenger receptor （SR-AI） in LDL receptor knock-out mice[J]. Atherosclerosis，2003，169（1）：95-103.

[3]Dhaliwal BS， Steinbrecher UP. Scavenger receptors and oxidized low density lipoproteins[J].Clin Chim Acta，1999， 286（1-2）：191-205.

[4]Babaev VR， Gleaves LA， Carter KJ， et al. Reduced atherosclerotic lesions in mice deficient for total or macrophage-specific expression of scavenger receptor-A[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2000， 20（12）：2593-2599.

[5]Hiltunen TP， Gough PJ， Greaves DR， et al. Rabbit atherosclerotic lesions express scavenger receptor AIII mRNA， a naturally occurring splice variant that encodes a non-functional， dominant negative form of the macrophage scavenger receptor[J]. Atherosclerosis，2001，154（2）：415-419.

[6]Nakagawa-Toyama Y， Yamashita S， Miyagawa J， et al.Localization of CD36 and scavenger receptor class A in human coronary arteries-a possible difference in the contribution of both receptors to plaque formation[J].Atherosclerosis，2001，156（2）：297-305.

[7]Feig JE， Shang Y， Rotllan N， et al. Statins Promote the Regression of Atherosclerosis via Activation of the CCR7-Dependent Emigration Pathway in Macrophages[J].PLoS One，2011，6（12）：e28534. Epub 2011 Dec 6.

編輯/張燕