VEGF—VEGFR2，Dll4—Notch1信號通路在基底細(xì)胞癌和鮑溫病中的表達(dá)及關(guān)系

摘要：目的 比較VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路在不同類型上皮源性腫瘤中的表達(dá)及關(guān)系。方法 采用免疫組化方法，對60例基底細(xì)胞癌和26例鮑溫病的石蠟包埋標(biāo)本進(jìn)行VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1蛋白水平的檢測，并進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 VEGF、VEGFR2、在基底細(xì)胞癌中的表達(dá)高于鮑溫病及正常皮膚組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。而Dll4、Notch1在基底細(xì)胞癌中的表達(dá)低于鮑溫病及正常皮膚組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1與不同種類上皮源性皮膚腫瘤的發(fā)展和預(yù)后有關(guān)。

關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長因子；血管內(nèi)皮生長因子受體2；Dll4；Notch1；腫瘤，基底細(xì)胞；鮑溫病；血管生成

基底細(xì)胞癌（basal cell carainoma，BCC）、鮑溫病（（Bowens disease，BD）分屬基底細(xì)胞癌和鱗狀細(xì)胞癌，他們雖均來源于上皮的惡性腫瘤，但其惡性程度及預(yù)后有著極大不同。VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路是調(diào)控血管生成和成熟的重要信號通路，與腫瘤的惡性程度、轉(zhuǎn)移、預(yù)后均有重要聯(lián)系，研究基底細(xì)胞癌與鮑溫病組織中VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路的表達(dá)有助于進(jìn)一步認(rèn)識血管生成因素在上皮源性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用以及對于腫瘤惡性程度以及轉(zhuǎn)移、預(yù)后的影響。

1資料與方法

1.1一般資料 60例基底細(xì)胞癌（BCC組）、26例鮑溫病（BD組）、10例正常皮膚組（NS組）的石蠟包埋標(biāo)本均來自齊魯醫(yī)院病理科，所有標(biāo)本均為手術(shù)切除獲得，術(shù)前未經(jīng)放療和化療，并且均經(jīng)過臨床和病理確診。各組標(biāo)本的臨床資料如下：①基底細(xì)胞癌組（BCC組）60例，男性35例，女性25例，平均年齡58歲。②鮑溫病組（BD組）26例，男性15例，女性11例，平均年齡64.02歲。③正常皮膚組（NS組）10例。

1.2試劑 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1兔抗人一抗、山羊抗兔二抗及顯色劑均購自武漢博士德公司。

1.3方法 采用免疫組織化學(xué)SP法.玻片預(yù)先經(jīng)防脫片處理，組織經(jīng)10%甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，切片經(jīng)常規(guī)脫蠟水化后，3%H2O2消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，檸檬酸熱修復(fù)后，分別加入一抗，工作濃度為1：500；4 ℃過夜，DAB顯色，顯微鏡下觀察結(jié)果。結(jié)果判斷以胞質(zhì)或胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每例組織隨機(jī)選取5個高倍視野（×400倍）計數(shù)陽性細(xì)胞并計算陽性率。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)以 x±s表示，P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1基底細(xì)胞癌與鮑溫病中VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1的表達(dá)比較（表1） VEGF陽性信號主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，呈彌漫性分布的棕黃色顆粒；VEGFR2主要表達(dá)于基底細(xì)胞胞膜及胞質(zhì)中；Dll4陽性表達(dá)主要見于細(xì)胞胞漿和胞膜；Notch1位于角質(zhì)形成細(xì)胞的胞膜和胞質(zhì)中，其表達(dá)從基底層上方開始，延伸到顆粒細(xì)胞層，而且在真皮內(nèi)無明顯表達(dá)。VEGF、VEGFR2在基底細(xì)胞癌和鮑溫病中的陽性率分別為67.5%、43.2%、42.0%、36.3%，高于正常皮膚組織的20.5%、13.1%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Dll4、Notch1在基底細(xì)胞癌及鮑溫病中的陽性率為12.6%、11.9%、17.1%、20.4%，低于正常皮膚組織的21.6%、24.7%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 VEGF、VEGFR2、Dll4、Notch1在基底細(xì)胞癌和鮑溫病中的蛋白表達(dá)（表2）：用顯微鏡圖像采集系統(tǒng)采集圖像，并用Leica Qwin V3圖像分析軟件進(jìn)行灰度值的半定量分析。利用雙盲法測定VEGF、VEGFR2、Dll4及Notch1染色強(qiáng)度，每張切片隨機(jī)選取5個視野（×200）進(jìn)行光學(xué)灰度值分析，數(shù)值在0～255之間，取其平均值即為該片的灰度值，灰度值越低，蛋白表達(dá)越高。

3討論

VEGF是體內(nèi)最強(qiáng)的一種血管生長因子，它特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，與實體瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)特性密切相關(guān)[1]。VEGF與基底細(xì)胞癌的血管生成正相關(guān)[2]，在基底細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要作用，而且可協(xié)助腫瘤細(xì)胞逃逸T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。

Dll4-Notch1信號通路表達(dá)上調(diào)會抑制血管生成，在多種主要的人類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)了Notch信號的活化。在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中，暴露部位Notch1表達(dá)下降，而生殖器部位侵襲性鱗狀細(xì)胞癌Notch1表達(dá)明顯。Notch1缺陷小鼠可以自發(fā)的形成與人類BCC高度類似的腫瘤，而人BCC中確實存在Notch通路抑制現(xiàn)象。

基底細(xì)胞癌（BCC）是一種最為常見的皮膚惡性腫瘤。本病多見于40歲以上的人群，無自覺疼痛或不適感。BCC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤以及轉(zhuǎn)移中均伴隨著相關(guān)信號通路的信號失調(diào)。鮑溫病（BD）是一種表皮內(nèi)鱗狀細(xì)胞癌，又稱原位鱗狀細(xì)胞癌。與BCC相比，BD的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后都明顯好于前者。本研究通過免疫組化發(fā)現(xiàn)， BCC組以及BD組的血管生成相關(guān)因子VEGF、VEGFR2均高于NS組，而起抑制作用的Dll4、Notch1則低于NS組，說明血管生成及其調(diào)控信號可能與皮膚腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。BD組中促進(jìn)血管生成的VEGF、VEGFR2表達(dá)明顯低于BCC組，而調(diào)控血管生成的Dll4、Notch1蛋白表達(dá)高于BCC組，提示血管生成及其調(diào)控信號可能與皮膚腫瘤的發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)。而其具體機(jī)制，以及VEGF-VEGFR2，Dll4-Notch1信號通路在基底細(xì)胞癌與鮑溫病的發(fā)生、發(fā)展、浸潤以及轉(zhuǎn)移中如何相互影響，仍有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Tammela T， Zarkada G， Wallgard E， et al. Blocking VEGFR-3 suppresses angiogenic sprouting and vascular network formation[J]. Nature， 2008，454： 656-660.

[2]李軼楠，李東寧. ID-1， VEGF及Tsp-1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌和基底細(xì)胞癌組織中的表達(dá)[J].中國皮膚性病學(xué)雜志，2013， 27（8）：767-771.編輯/申磊