可見(jiàn)及紫外分光光度法測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮的比較研究

摘要：目的 研究并比較可見(jiàn)分光光度法及紫外分光光度法測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮含量。方法 可見(jiàn)分光光度法以蘆丁為參照品，顯色劑為NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系，在510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算中藥復(fù)方總黃酮含量；紫外分光光度法以蘆丁為參照品，在359nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算中藥復(fù)方總黃酮含量。結(jié)果 可見(jiàn)分光光度法掃描曲線有較大差異，吸收峰紅移，在510 nm處吸光度值最大。紫外分光光度法掃描曲線在紫外光譜圖上顯示兩個(gè)吸收峰，在359 nm處吸光度值最大，500～800 nm處無(wú)吸收峰； 可見(jiàn)分光光度法測(cè)定的中藥復(fù)方總黃酮含量比紫外分光光度法的測(cè)定值高，含量高低成正比。結(jié)論 采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系可見(jiàn)分光光度法穩(wěn)定中藥復(fù)方總黃酮方法可靠，是測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮含量的理想方法。

關(guān)鍵詞：可見(jiàn)分光光度法；紫外分光光度法；中藥復(fù)方；總黃酮；含量

紫外-可見(jiàn)分光光度法具有穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確度高、儀器設(shè)備操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，常被應(yīng)用與植物中黃酮含量的測(cè)定[1-3]。NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系則是藥典中廣泛應(yīng)用的總黃酮含量測(cè)定法。本文采用可見(jiàn)分光光度法及紫外分光光度法測(cè)定白頭翁湯加減復(fù)方總黃酮的含量，通過(guò)比較直接測(cè)定法與顯色測(cè)定法，為中藥復(fù)方總黃酮含量測(cè)定提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1儀器設(shè)備 紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)（UV-BluestarPlus，北京萊伯泰科儀器有限公司）；分析電子天平（AUW120D，日本津島公司）；臺(tái)式低速多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（TD5A-WS，長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；微量移液器（印pendorf，德國(guó)）；超聲波清洗器（SB-5200 DTN，寧波新芝生物科技股份有限公司）；隔膜真空泵（GM-0.5B，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；雷磁酸度計(jì)PH計(jì)（PHSJ-4A，上海精密科學(xué)儀器公司）；常規(guī)玻璃儀器。

1.2試藥 蘆丁為參照品（批號(hào)：100080-20070，質(zhì)量分?jǐn)?shù)92.5%，中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用）。甲醇、乙醇（分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），純化水、自制超純水。中藥成分為甘草、白頭翁、秦皮、南山楂、粉葛根、車前子、黃連、藿香、地榆、白芍，購(gòu)自安徽滬譙中藥飲片廠（生產(chǎn)許可證號(hào)：皖Y20050027，批號(hào)：060904）。

1.3方法

1.3.1樣品制備 白頭翁湯加減復(fù)方以甘草、白頭翁、秦皮、南山楂、粉葛根、車前子、黃連、藿香、地榆、白芍=1：3：2：4：3：2：115：3：3：2配制。弄成碎末，加水2次煎熬后提取，濃縮，添加乙醇致含醇量為65%，離心去掉沉淀后蒸干，添加甲醇溶解，離心，取上清液加甲醇定容到原藥材量1：1。

1.3.2 參照品溶液制備 取蘆丁參照品12mg，精密稱取，置于50ml瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，得質(zhì)量濃度為0.24mg/ml的蘆丁參照品溶液。

1.3.3紫外-可見(jiàn)分光光度法掃描與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

1.3.3.1可見(jiàn)分光光度法 精密稱定蘆丁參照品溶液1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml、6.00ml分別置25 ml容量瓶中，均加水到6.00ml；加5%的NaNO2溶液1.00 ml，搖勻，放置6min；加10%的Al（NO3）3溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加4%的NaOH溶液10.00 ml，再加水到刻度，搖勻，放置15min。以相應(yīng)試劑為空白，在400～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得510 nm處為可見(jiàn)最大吸收峰。以空白試劑為參照，將6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別在510 nm下測(cè)定吸光度，得回歸方程A=0.00988C+0.00523，r=0.9997。蘆丁濃度在9.6～57.6 mg/L范圍線性關(guān)系佳。

1.3.3.2 紫外分光光度法 精密稱定蘆丁參照品溶液0.10ml、0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml于5ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，搖勻。以甲醇作為空白試劑參照，在400～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得359nm處為紫外最大吸收峰。以空白試劑為參照，將6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別在359nm下測(cè)定吸光度，得回歸方程A=0.02503C+0.02367，r=0.9995。蘆丁濃度在4.8～48mg/L范圍線性關(guān)系佳。

1.3.4紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定中藥復(fù)方總黃酮含量

1.3.4.1可見(jiàn)分光光度法 精密稱定復(fù)方樣品1.00ml置于10ml容量瓶中，加甲醇到刻度，再取1.50ml置于25ml容量瓶中，加水到6.00ml，加5%的NaNO2溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加10%的Al（NO3）3溶液1.00ml，搖勻，放置6min；加4%的NaOH溶液10.00 ml，再加水到刻度，搖勻，放置15min。平行測(cè)定吸光度3次，儀器自動(dòng)計(jì)算樣品總黃酮含量。

1.3.4.2 紫外分光光度法 精密稱定復(fù)方樣品1.00ml置于10ml容量瓶中，再取1.50ml置于25ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，搖勻。平行測(cè)定吸光度3次，儀器自動(dòng)計(jì)算樣品總黃酮含量。

2 結(jié)果

2.1兩種掃描曲線比較 可見(jiàn)分光光度法掃描曲線：蘆丁參照品溶液添加NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系顯色后，在堿性環(huán)境下鋁離子與黃酮化合物形成穩(wěn)定有色金屬絡(luò)合物，吸收光譜的曲線有較大差異，吸收峰紅移，在510 nm處吸光度值最大。紫外分光光度法掃描曲線：按照黃銅的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，在紫外光譜圖上顯示兩個(gè)吸收峰，在359 nm處吸光度值最大，500～800 nm處無(wú)吸收峰。

2.2 兩種測(cè)定法比較 比較可見(jiàn)分光光度法與紫外分光光度法測(cè)定全方與缺藥方中的黃酮含量，如表1所示。結(jié)果表明，可見(jiàn)分光光度法測(cè)定的中藥復(fù)方總黃酮含量比紫外分光光度法測(cè)定值高，含量高低成正比。

3 討論

可見(jiàn)-紫外分光光度法的研究已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可，它在單一成分的測(cè)定中具有穩(wěn)定性好、精密度高等優(yōu)勢(shì)[4]，而對(duì)于成分較多的藥品，因?yàn)槭艿絻x器設(shè)備、數(shù)據(jù)自動(dòng)處理等因素限制，采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH體系可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定更為理想[5]。白頭翁湯加減復(fù)方成分較多，在提取和制備過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生各種化學(xué)反應(yīng)，黃酮類化合物在紫外區(qū)間的吸光度值有變化，添加Al（NO3）3顯色劑后在堿性環(huán)境下可與黃酮組成血紅色螯合物，在510 nm形成新的吸收峰，以測(cè)定黃酮含量。

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編輯/哈濤