陰道細(xì)菌臨床檢驗(yàn)方法的分析與比較

摘要：目的 比較三種不同檢驗(yàn)方法對陰道細(xì)菌的陽性檢出率。方法 采集本院收治的86例陰道疾病患者的陰道分泌物，分別采取細(xì)菌培養(yǎng)法、革蘭染色法及PCR法檢驗(yàn)陰道分泌物，并將檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比分析。結(jié)果 革蘭染色法檢驗(yàn)總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗(yàn)總陽性檢出率為97.06%；PCR法檢驗(yàn)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)法無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗(yàn)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)法有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯性差異，P<0.05。結(jié)論 PCR檢驗(yàn)法具有較高的陽性檢出率，且操作簡便快捷，能夠滿足臨床診斷需要，可于陰道細(xì)菌臨床檢驗(yàn)工作中推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：陰道細(xì)菌；細(xì)菌培養(yǎng)；PCR；革蘭染色法

正常健康女性的陰道內(nèi)各定植菌群保持著相對平衡狀態(tài)，當(dāng)自身抵抗力下降或者陰道內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變時(shí)，各菌群數(shù)量隨之改變而出現(xiàn)比例失衡，從而導(dǎo)致陰道炎的發(fā)生[1]。陰道炎是婦科臨床中一種最為常見的感染性炎癥疾病，如炎癥上行感染可導(dǎo)致異位妊娠、急慢性盆腔炎及不孕癥等嚴(yán)重疾病[2]。我院對陰道疾病患者的分泌物以3種不同的檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢驗(yàn)，以分析出最具有臨床適用性的檢驗(yàn)方法，現(xiàn)將詳細(xì)情況總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1一般資料 以本院2013年1月～3月收治的86例陰道疾病患者作為本院研究資料。年齡為21～48歲，平均（28.63±4.26）歲；全部患者均有明顯陰道炎臨床表現(xiàn)，并伴有不同程度的陰道瘙癢，陰道內(nèi)均可見大量白帶分泌物。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采集全部患者的陰道分泌物后分別采取A-細(xì)菌培養(yǎng)法、B-革蘭染色法及C-PCR法進(jìn)行檢驗(yàn)。全部患者均取截石位，在無菌陰道鏡下顯示宮頸，于陰道后穹窿處，以無菌棉簽沾取分泌物，準(zhǔn)備好已置入無菌生理鹽水的檢驗(yàn)試管，將取得的分泌物移入試管中。

1.2.2細(xì)菌培養(yǎng)方法 取出試管中的陰道分泌物樣本，于無菌條件下使用無菌接種環(huán)將其接種至細(xì)菌分離專用培養(yǎng)基上，置入二氧化碳培養(yǎng)箱，于35℃條件下孵育48 h，擇取光滑、半透明、灰色的滴露狀菌株依據(jù)生化鑒定標(biāo)準(zhǔn)行生化檢驗(yàn)。

1.2.3革蘭染色方法 以95%乙醇溶液浸泡清潔玻片，拭干備用；取試管中的陰道分泌樣本均勻涂于玻片上，于醫(yī)用顯微鏡下對涂片進(jìn)行檢驗(yàn)分析。

1.2.4 PCR方法 提取500 μL試管中的陰道分泌物樣本放入至生理鹽水中，以12000 r/min速度離心 10 min后去清除上清液，加入帶有適當(dāng)堿性的裂解液，于98℃溫度下加熱10 min，以12000 r/min速度再次離心5 min，取上清液制備為DNA模板。進(jìn)行PCR細(xì)菌檢驗(yàn)陰性與陽性對比時(shí)，選取與陰道分泌物DNA模板相同的PCR試劑，將無添加物的DNA作為陰性組，添加了DNA模板后的PCR擴(kuò)容作為陽性組。將兩組進(jìn)行對比分析，檢查 PCR的產(chǎn)物與擴(kuò)容情況，自總體積當(dāng)中取得25 μL引物、模板、緩沖液及離子水，以無菌石蠟油30μl將其覆蓋，進(jìn)入至PCR循環(huán)，循環(huán)共32環(huán)[3]，PCR循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)為：95℃ 5 min、94℃ 1 min、58℃ 1 min、72℃ 1 min，最后一環(huán)于72℃條件下延伸5 min。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析法 3種檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行循環(huán)對比，采取χ2檢驗(yàn)，使用SPSS 19.0軟件進(jìn)行計(jì)算；以細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算革蘭染色法與PCR法陽性檢出率。

2結(jié)果

2.1檢驗(yàn)結(jié)果 以細(xì)菌培養(yǎng)法為檢驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)，革蘭染色法檢驗(yàn)總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗(yàn)總陽性檢出率為97.06%，見表1。

2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果 PCR法檢驗(yàn)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)法無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗(yàn)結(jié)果與細(xì)菌培養(yǎng)法有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯性差異，P<0.05；見表2。

3討論

細(xì)菌檢驗(yàn)是臨床工作中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，可為感染性疾病的診斷治療提供科學(xué)性指導(dǎo)，并且能夠提高疾病傳播的防控力度[4]。陰道炎的主要致病原因?yàn)殛幍纼?nèi)上皮細(xì)胞組織在陰道內(nèi)環(huán)境的作用下，致細(xì)菌侵潤其表層糖原，使陰道內(nèi)桿菌出現(xiàn)酸堿度改變經(jīng)，桿菌數(shù)量異常減少，致病菌異常增殖，從而引發(fā)陰道炎[5]。陰道炎病起較為緩慢，初期癥狀不嚴(yán)重，不易引起患者重視，因此明確致病菌對于疾病的有效治療至關(guān)重要。陰道細(xì)菌檢驗(yàn)是陰道疾病臨床診斷的重要方法，檢驗(yàn)的準(zhǔn)確度對疾病的診斷與致病菌的確定均具有重要作用。

目前臨床中常用的陰道細(xì)菌檢驗(yàn)方法有細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR法及革蘭染色法等。其中細(xì)菌培養(yǎng)法是臨床公認(rèn)的陰道細(xì)菌檢驗(yàn)金標(biāo)準(zhǔn)，但細(xì)菌培養(yǎng)法的檢驗(yàn)過程較為復(fù)雜，對檢驗(yàn)設(shè)備與環(huán)境的要求高，不易于基層醫(yī)療單位開展，從某種程度上說限制了其臨床應(yīng)用范圍。革蘭染色法具有操作簡便的優(yōu)勢，在臨床中應(yīng)用廣泛，但能夠影響檢驗(yàn)結(jié)果的因素較多，導(dǎo)致革蘭染色法在檢驗(yàn)過程中存在著一定的誤差。常見的誤差原因有：染色過程中的脫色不當(dāng)，脫色過度可致革蘭陽性菌于顯微鏡觀察下被確定為革蘭陰性菌，脫色不足則可致檢驗(yàn)中將革蘭陰性菌判斷為革蘭陽性菌。因此革蘭染色法雖具有操作方面的優(yōu)勢，但其檢驗(yàn)結(jié)果較不理想。PCR技術(shù)最早是由Khorana等于1971年提出的核酸體外擴(kuò)增設(shè)想而逐步形成的。PCR檢測法將PCR技術(shù)的敏感性、雜交DNA的特異性以及光譜學(xué)精確度等優(yōu)點(diǎn)融合于一體，使得PCR檢測具有理想的準(zhǔn)確度同時(shí)操作也更加簡便易行。

本次研究中細(xì)菌培養(yǎng)法的陽性檢出率為79.07%，革蘭染色法為59.30%，PCR法為76.74%；以細(xì)菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)革蘭染色法準(zhǔn)確率為75%，而PCR法的準(zhǔn)確率高達(dá)97.06%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)卡方檢驗(yàn)，細(xì)菌培養(yǎng)法檢驗(yàn)結(jié)果與PCR無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性P>0.05，但與革蘭染色法具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性P<0.01，同時(shí)PCR法檢驗(yàn)結(jié)果明顯優(yōu)于革蘭染色法P<0.05。充分的說明了PCR法在陰道細(xì)菌檢驗(yàn)中具有理想的陽性檢出率，同時(shí)由于其操作簡便，檢驗(yàn)快捷，可于陰道細(xì)菌臨床檢驗(yàn)中推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

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[5]嚴(yán)冬霞，樊尚榮.復(fù)發(fā)性細(xì)菌性陰道病的發(fā)病機(jī)制和治療[J].實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2010，26（2）：85-87.編輯/肖慧