熒光原位雜交技術在異基因外周血造血干細胞移植治療白血病探討

【摘要】目的對熒光原位雜交技術在異基因外周血造血干細胞移植治療白血病中的應用意義進行分析。方法資料選自2011年3月——2013年11月在我院行異基因外周血造血干細胞移植后的白血病患者64例，并選取不同性別之間的移植41例，同性別之間的移植23例，采用基因探針和X、Y性染色體特異性雙色DNA探針進行檢測，分析患者的骨髓嵌合率和病灶殘留率。結果不同性別受、供者的41例白血病患者移植后第28d的檢測結果顯示，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，MRD為陰性；12例患者的嵌合率相對較低，MRD均為陰性；2例患者檢測出MRD為陽性，均原病復發。23例同性移植患者在移植后第28d的檢測中，沒有檢測到原有異常基因的為17例，存在微量病灶的患者為3例；3例患者移植后的1-4月后復發。結論熒光原位雜交技術具有特異性強、快速、準確的應用優勢，應用于異基因外周血造血干細胞移植的預后判斷，具有重要意義。

【關鍵詞】熒光原位雜交；造血干細胞；白血病；細胞移植

050文章編號：1004-7484（2014）-06-3044-01

在目前白血病的治療中，異基因造血干細胞移植方法已逐步的發展成為確保患者長期存活率和完全治愈效果較好的選擇。同時，熒光原位雜交技術主要應用于異性基因造血干細胞移植后微量殘留病灶和植入狀態的監測。我院采用X、Y性染色體特異性雙色DNA探針對異性異基因造血干細胞移植后的植活情況進行檢測，主要用以臨床治療決策的制定。

1資料和方法

1.1一般資料資料選自2011年3月——2013年5月在我院行異基因外周血造血干細胞移植后的白血病患者64例。男37例，女27例。并且患者的選取滿足以下條件：①融合基因為陽性表達；②受和供的性別不同，患者應滿足全部條件，或是其中的一個條件。并選取不同性別之間的移植41例，同性別之間的移植23例。在原發病當中，41例為慢性粒細胞白血病，7例為急性非淋巴細胞白血病，16例為急性淋巴細胞白血病。

1.2檢測的項目所有患者均在行異基因外周血造血干細胞移植治療后的第28d，進行骨髓的采集。采用熒光原位雜交技術對受者的性染色體和融合基因進行檢測，用做評價受、供患者骨髓和微量白血殘留病灶比例及骨髓嵌合狀態的評價，并進行后續的觀察和隨訪。其中23例性別相同，但具有特殊染色體異常的異基因外周血造血干細胞移植受者，通過熒光原位雜交技術檢測患者殘留的微量病灶，其余的41例受者則進行骨髓嵌合狀態和融合基因狀態的檢測。

1.3檢測方法在進行檢測時，采用BCR和X探針用作綠色熒光的標記，而ABL和Y探針則用于紅色熒光的標記。進而根據試劑盒所提示的相應操作說明，實施標本的處理、雜交和變性后的洗脫操作。同時在熒光顯微鏡之下，結合三色濾光鏡的應用，對熒光信號進行觀察。其中綠色的信號為BCR、ETO和X信號，紅色信號為ABL、Y和AML1信號，而融合基因則屬于紅、綠信號的并集。

2結果

2.1異基因外周血造血干細胞移植治療后28天的熒光原位雜交技術檢測結果表1為患者經異基因外周血造血干細胞移植治療后28天的熒光原位雜交技術檢測結果。

2.2不同性別移植后的熒光原位雜交技術檢測結果在患者行異基因外周血造血干細胞移植治療后的第28d，進行的熒光原位雜交檢測結果顯示，不同性別受、供者的41例白血病患者當中，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，并且MRD為陰性。但其中12例患者的嵌合率相對較低，其中11例為95%-97%，1例僅為83%，但MRD均為陰性。該類患者在接受減少或停用供者淋巴細胞輸注和免疫抑制劑處理后，其嵌合率均達到99%以上。但同時其中的2例患者檢測出MRD為陽性，經過相應的處理后，其嵌合率出現下降的趨勢，并且融合基因存在上升的趨勢，均原病復發。

2.3同性別移植后的熒光原位雜交技術檢測結果在患者完成移植后的第28d進行熒光原位雜交技術檢測的結果中，23例患者當中，沒有檢測到原有異常基因的為17例，存在微量病灶的患者為3例，但經過減少供者淋巴細胞的輸注和免疫抑制劑之后，殘留病灶減少至1%，最后均得到緩解。另外3例患者存在殘留病灶的量達到0.5%-7.0%，但經過多次的熒光原位雜交技術檢測之后，MRD均呈現上升的趨勢，在移植后的1-4月后復發。

3討論

熒光原位雜交技術為用于性別染色體和融合基因的常用檢測技術，并且在異基因外周血造血干細胞移植的預后判斷中具有廣泛的應用。在目前用于融合基因的技術的重要為熒光原位雜交技術和PCR技術，兩者各有各的應用優勢，但前者的應用和RQ-PCR具有較好的相關性。同時，嵌合體和白血病患者移植是否成功具有較大的關系。因此，需應用相應的技術，對供體細胞在受者體中的情況進行檢測。若是供體細胞的嵌合率下降，其導致的原因和原病復發、移植物被排斥，具有較大的聯系。基于此，對嵌合狀態的準確分析，可有效的指導白血病患者抑制之后應用免疫抑制劑的量，以及可較好的對供者淋巴細胞輸注數量和時間進行控制，同時還可用作疾病的檢測，以及植物抗宿主病的預防。

在本次研究中，患者行異基因外周血造血干細胞移植治療后的第28d所進行的熒光原位雜交檢測結果顯示，不同性別受、供者的41例白血病患者當中，有24例患者的骨髓嵌合率高達99%以上，并且MRD為陰性。但其中12例患者的嵌合率相對較低，其中11例為95%-97%，1例僅為83%，MRD均為陰性。但同時其中的2例患者檢測出MRD為陽性，均原病復發。在患者完成移植后的第28d進行熒光原位雜交技術檢測的結果中，23例患者當中，沒有檢測到原有異常基因的為17例，存在微量病灶的患者為3例。另外3例患者存在殘留病灶的量達到0.5%-7.0%，經過多次的熒光原位雜交技術檢測之后，MRD均呈現上升的趨勢，但在移植后的1-4月后復發。其結果顯示，采用嵌合率和融合基因的檢測，對于單獨應用嵌合率的檢測，具有更為重要的作用。同時，在臨床中存在MRD和嵌合率存在不同步的現象，本組中有1例患者的嵌合率為99.4%，但MRD為陰性。同時微量殘留病灶也會導致原病復發。

綜上所述，熒光原位雜交技術能夠顯示出具備不同比例受者和供者的源性染色體。進而顯示出嵌合體的程度和狀態，并且其具有特異性強、快速、準確的應用優勢，應用于異基因外周血造血干細胞移植的預后判斷，具有重要作用。

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