男性不育患者精子形態與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶關系的研究

邴晏如，莫和國，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫科大學附屬小欖醫院檢驗科，廣東 中山 528415)

·論著·

男性不育患者精子形態與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶關系的研究

邴晏如，莫和國，黃健云，李璐琳，歐水連，黎泳儀，陸小琴，蔡錦梅

(南方醫科大學附屬小欖醫院檢驗科，廣東 中山 528415)

目的研究男性不育患者精子形態與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關系。方法466例男性不育患者分別根據年齡和精子正常形態百分率分成5組和8組，采用Diff-Quik染色法、酶法和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)分別進行精子形態、精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的檢測。結果各年齡組的正常形態精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統計學意義(P＞0.05)，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，其他年齡段精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統計學意義(P＞0.05)。在精子正常形態百分率不同的8組中，年齡差異不具統計學意義，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統計學意義(P＞0.05)，精子正常形態百分率大于7.1%的5組精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統計學意義，其余三組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統計學意義(P＜0.01)。結論精子正常形態百分率不受年齡和精漿彈性硬蛋白酶濃度影響，而隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低，精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導致精子形態畸形的獨立因素。

男性不育；精子形態；中性α-葡糖苷酶；彈性硬蛋白酶

隨著社會發展，不育癥的發病率呈明顯上升趨勢，育齡夫婦不育癥的發病率從20世紀60年代的7%～8%上升到近年來的15%～20%[1-2]。不育原因中20%是單獨由男性因素引起的，其余還有30%～40%與男性因素有關[3]，因此，近年來有關精子質量與男性不育原因的研究越來越引起臨床的重視，而精子形態學正是研究中最受關注的領域之一。本文研究男性不育患者精子形態與精中性α-葡糖苷酶和精漿彈性硬蛋白酶的關系，旨在評價不同因素對患者精子形態的影響程度，為男性不育癥的診斷和治療提供研究依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2012年6月至2013年12月在本院男科門診就診的466例不育男性，且精液常規檢查至少有一項參數結果異常，年齡21～49歲，平均33.6歲，根據年齡分成5組。診斷標準：同居一年及以上；性生活正常；未采用任何避孕措施；女方各項檢查均正常。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集檢查前禁欲3～7 d，手淫法取精于干燥無菌廣口杯內，37℃液化，液化后進行精液常規檢測，新鮮標本液化后立即取部分標本在3 000×g離心10 min，留取精漿，用Eppendorf管分裝數支后-20℃保存，同時分裝數支全精液標本-20℃保存，以上所有分裝標本凍融一次后不再使用。

1.2.2 主要儀器試劑及檢測方法精液常規采用北京偉力WLJY-9000型彩色精子分析儀檢測；精子形態分析采用WHO推薦的Diff-Quik精子形態學快速染色法；精漿中性Q-葡糖苷酶(酶法)和精漿彈性硬蛋白酶(ELISA法)定量試劑盒均購自深圳華康公司；全自動酶標儀為美國Bio-Tek ELx800。

1.2.3 精子形態及精漿生化指標正常參考正常參考值均采用世界衛生組織(WHO)推薦標準或國際認可標準：精子形態按《WHO人類精液及精子—宮頸黏液相互作用實驗室檢測手冊》(第4版)進行分類，精子正常形態百分率正常參考值＞15%。精漿彈性硬蛋白酶正常參考值為＜290 ng/ml，精漿中性Ⅱ-葡糖苷酶正常參考值為≥20 Mu/一次射精(WHO)。

1.2.4 精子形態分析根據精子正常形態百分率從高到低分成8組，其中正常形態精子百分率≥15.0%為一組，輕度畸形：15.0%＞正常形態精子百分率≥10.0%為一組，中度畸形：10.0%＞正常形態精子百分率≥5.0%分成5組，重度畸形：正常形態精子百分率＜5.0%為一組。

1.3 統計學方法應用SPSS統計學軟件進行數據分析，計量數據以均數±標準差(±s)表示，組間均值比較采用方差分析方法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

表1 不同年齡段不育男性精子形態、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果(±s)

表1 不同年齡段不育男性精子形態、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果(±s)

2 結果

2.1 不同年齡段不育男性精子形態、精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶檢測結果466例不育男性根據年齡分成5組，各年齡組的正常形態精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異均無統計學意義(P＞0.05)，精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低(P＜0.01)，其他年齡段精液量和精中性α-葡糖苷酶的活性差異無統計學意義(P＞0.05)見表1。

2.2 不育男性精子形態與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析在精子正常形態百分率不同的8組中年齡差異無統計學意義；精漿彈性硬蛋白酶濃度在這8組中的差異無統計學意義(P＞0.05)；精中性α-葡糖苷酶的活性在精子正常形態百分率大于7.1%的5組中差異無統計學意義，其余3組精中性α-葡糖苷酶的活性與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統計學意義(P＜0.01)，見表2。

表2 不育男性精子形態與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析(±s)

表2 不育男性精子形態與精漿彈性硬蛋白酶和精中性α-葡糖苷酶的關系分析(±s)

3 討論

研究結果顯示，男性不育患者各年齡段的正常形態精子百分率和精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統計學意義(P＞0.05)。在精子正常形態百分率不同的8組中，精漿彈性硬蛋白酶濃度差異無統計學意義(P＞0.05)。Eggert-Kruse等[4]研究發現，不育患者血清及精漿彈性硬蛋白酶含量與精子形態及精子功能各項指標均無相關性；與之相反，Moretti等[5]通過對患者精漿彈性硬蛋白酶的檢測發現，精漿彈性硬蛋白酶含量＞1 000 ng/ml組與精漿彈性硬蛋白酶含量＜290 ng/ml組在頭部畸形方面差異有統計學意義。

本研究還顯示，精中性α-葡糖苷酶的活性在41～50歲年齡段顯著降低，這可能與該年齡段的射精量減少有關。精子正常形態百分率小于7.1%的3組精中性α-葡糖苷酶的活性分別與各組精中性α-葡糖苷酶的活性差異均有統計學意義(P＜0.01)，且精子正常形態百分率在5.1%～6.0%，和5.0%以下兩組的精中性α-葡糖苷酶的活性均值均低于正常參考范圍(≥20 mU/一次射精)。當精中性α-葡糖苷酶的活性低于正常參考范圍時，精子形態表現為重度畸形，且精子正常形態百分率隨著精中性α-葡糖苷酶的活性降低而降低。可見精中性α-葡糖苷酶檢測不僅對輸精管阻塞有診斷價值[6-8]，對精子形態畸形因素的研究也有幫助。精中性α-葡糖苷酶活性的顯著降低可能是導致精子形態畸形的獨立因素。

綜上所述，精子形態與精漿彈性硬蛋白酶濃度無相關性，與精中性α-葡糖苷酶的活性關系密切，男性不育患者除做精液常規檢查外，還需要進一步作精中性α-葡糖苷酶的活性檢測，查找不育原因、評估生育能力并為疾病診斷、療效判定提供了客觀依據。

[1]Gomendio M,Malo AF,Garde J.Sperm traits and male fertility in natural populations[J].Reproduction,2010,134(1):19-20.

[2]柴宇靜.精子形態學檢查的研究進展[J].中國男科學雜志,2011, 25(11):70-72.

[3]王玉豐,吳玲,陳雪銀.不同病因對男性不育患者精子形態的影響[J].中國實驗診斷學,2012,16(7):1236-1238.

[4]Eggert-Kruse W,Zimmermann K,Geissler W,et a1.Clinical relevance of polymorphonuclear(PMN-)elastase determination in semen and serum during infertility investigation[J].Int J Androl,32 (4):317-329

[5]Moretti E,Cosci I,Spreafico A,et a1.Semen characteristics and inflammatory mediators in infertile men with different clinical diagnoses[J].Int JAndrol,2009,32(6):637-646.

[6]袁謙,江洪濤,宿穎嵐,等.精漿中性α-葡糖苷酶與附睪梗阻性無精子癥梗阻部位的相關性研究[J].中華男科學雜志,2013,19 (8):719-721.

[7]易虹,向希映,鮮勝,等.295例男性不育患者精液質量分析[J].海南醫學,2012,23(24):96-97.

[8]鄧順美,文任乾,黃建初,等.少弱精子癥與精漿附性腺標志物的相關性分析[J].海南醫學,2009,16(1):24-25.

Relationship between sperm morphology and neutral a-glucosidase or elastase in male infertile patients.

BING Yan-ru,MO He-guo,HUANG Jian-yun,LI Lu-lin,OU Shui-lian,LI Yong-yi,LU Xiao-Qin,CAI Jin-mei.Department of Clinical Laboratory,Xiaolan Hospital Affiliated to South Medical University,Zhongshan 528415,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the relationship between sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase in male infertile patients.MethodsA total of 466 males with infertility were divided into 5 groups and 8 groups according to age and sperm morphology respectively.Diff-Quik stain,enzyme and ELISA were used to check sperm morphology and neutral α-glucosidase or elastase activity respectively.ResultsThere were no significant differences in the percentage of morphological normal sperm and elastase concentration among different age groups(P＞0.05).The neutral α-glucosidase decreased remarkably in age group 41～50 and there were no significant differences in neutral α-glucosidase among other age groups(P＞0.05).There were no significant differences in age or elastase concentration among 8 morphology groups(P＞0.05).There were no significant differences in neutral α-glucosidase among the 5 morphology groups,in which the percentage of morphologically normal sperm was above 7.1%,while there were significant differences in neutral α-glucosidase among the rest 3 groups and other groups(P＜0.01).ConclusionThe percentage of morphologically normal sperm was not affected by age and elastase concentration,but decreased with the reducing of the activity of neutral a-glucosidase,which could be the independent factor of sperm morphological abnormity.

Male infertility;Sperm morphology;Neutral α-glucosidase;Elastase

R698+.2

A

1003—6350（2014）13—1950—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0756

2014-01-27)

中山市醫學科研基金項目(編號：2013A020207)

莫和國。E-mail：945161386@qq.com