乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦血清標(biāo)志物模式與血清及乳汁HBV-DNA相關(guān)性研究

朱珉之，杭雙熊，申紅玉

(常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 常州 213001)

·論著·

乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦血清標(biāo)志物模式與血清及乳汁HBV-DNA相關(guān)性研究

朱珉之，杭雙熊，申紅玉

(常州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇 常州 213001)

目的通過檢測(cè)分析乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦血清學(xué)標(biāo)志物與血清、乳汁HBV-DNA陽性率的關(guān)系，以及產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA含量之間的相關(guān)性，旨在指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)。方法選取96例乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦，將其分為大三陽組(54例)、小三陽組(25例)、HbsAg和HbeAg均陽性組（8例）及HbsAg和HbcAb均陽性組（9例）。另選取12例乙肝兩對(duì)半全陰的產(chǎn)婦作為對(duì)照組。ELISA法檢測(cè)乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦乙肝免疫血清學(xué)標(biāo)志物，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分別檢測(cè)產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA含量，并對(duì)所有檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果大三陽組產(chǎn)婦血清和乳汁HBV-DNA陽性率明顯高于其他三組(P＜0.05)。乳汁HBV-DNA在各組中檢出的陽性率均小于血清HBV-DNA，但兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。根據(jù)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物HBeAg是否陽性將96例產(chǎn)婦分為HBeAg陽性組(62例)和HBeAg陰性組(34例)，血清HBeAg陽性產(chǎn)婦的血清和乳汁中HBV-DNA陽性率均明顯高于HBeAg陰性產(chǎn)婦，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。但一部分血清HBeAg陰性產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA亦為陽性。產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA含量呈正相關(guān)(r=0.891，P＜0.05)。結(jié)論乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA檢出的陽性率低于血清HBV-DNA，且乳汁HBV-DNA含量隨血清HBV-DNA含量的升高而增大，因此定量雙重檢測(cè)產(chǎn)婦血清、乳汁中HBV-DNA來確定母嬰乙肝病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)性更為可靠，這將有利于阻斷乙肝傳播，確定哺乳方式，指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)，從而降低乙肝新生兒感染率。

乙型肝炎病毒；HBV-DNA；血清；乳汁

乙型肝炎(Hepatitis B，HB)廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)換成肝硬化或肝癌，也是我國當(dāng)前流行最為廣泛、危害最為嚴(yán)重的一種疾病。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)主要經(jīng)血液和體液傳播。我國約有2～3千萬人為慢性乙肝患者，30%～50%的慢性乙肝病毒是通過母嬰傳播的[1]，而母嬰傳播最為活躍的因素之一就是乳汁傳播[2]。阻斷母嬰傳播對(duì)控制下一代乙型肝炎及相關(guān)疾病具有重要意義。血液或乳汁中HBV-DNA陽性是乙型肝炎具有傳染性的最直接、特異和靈敏的指標(biāo)。因此，本文通過檢測(cè)產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA含量及乙型肝炎各種免疫血清學(xué)模式，對(duì)其相關(guān)性進(jìn)行比較分析，將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象選取2011年9月至2013年9月在我院產(chǎn)科住院分娩的96例乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦作為研究對(duì)象，年齡21～33歲，乙肝診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合2010版的《慢性乙型肝炎防治指南》[3]。另選同期12例乙肝兩對(duì)半全陰的產(chǎn)婦作為對(duì)照組。

1.2 標(biāo)本采集抽取分娩前孕婦靜脈血5 ml置于無抗凝劑試管，離心取血清分裝成兩管，分別進(jìn)行乙肝血清學(xué)標(biāo)志物和HBV-DNA檢測(cè)；產(chǎn)婦分娩2～3 d分泌初乳后，用無菌鹽水清洗乳頭，收集初乳3～5 ml置于無菌干燥試管內(nèi)，離心后取中層乳清進(jìn)行HBV-DNA檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對(duì)產(chǎn)婦乙肝血清學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，試劑由北京萬泰生物藥業(yè)有限公司提供，儀器為BIO-PAD3550型酶標(biāo)儀；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測(cè)產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA含量，試劑由上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供，自動(dòng)熒光PCR擴(kuò)增儀采用美國ABI公司7500型定量PCR儀。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，行χ2檢驗(yàn)。產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA含量相關(guān)性分析采用SPSS19.0軟件進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)婦乙肝血清學(xué)模式及血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA結(jié)果分析由表1可見，乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦的血清HBV-DNA陽性率為71.9%，乳汁HBV-DNA陽性率為60.4%，兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。96例乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦根據(jù)其免疫血清學(xué)模式分為大三陽組(HBsAg、HBeAg、HBcAb陽性)、小三陽組(HBsAg、HBeAb、HbcAb陽性)、HbsAg和HbeAg均陽性組及HbsAg和HbcAb均陽性組。大三陽組產(chǎn)婦血清和乳汁HBV-DNA陽性率明顯高于其他三組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。大三陽組與小三陽組產(chǎn)婦血清、乳汁中HBV-DNA陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。大三陽組產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA陽性率與HbsAg和HbcAb均陽性組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。同一組別中，乳汁HBV-DNA檢出的陽性率均小于血清HBV-DNA，但兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。12例對(duì)照組產(chǎn)婦血清與乳汁HBV-DNA均無陽性結(jié)果。

表1 乙型肝炎血清學(xué)模式及血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA結(jié)果

2.2 血清HBeAg陽性組與HBeAg陰性組產(chǎn)婦乳汁HBV-DNA檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性分析根據(jù)乙型肝炎血清學(xué)標(biāo)志物HBeAg是否陽性將96例產(chǎn)婦分為HBeAg陽性組(62例)和HBeAg陰性組(34例)，其中HBeAg陽性組產(chǎn)婦的乳汁HBV-DNA陽性數(shù)為49例，陽性率達(dá)79.0%；HBeAg陰性組產(chǎn)婦的乳汁HBV-DNA陽性數(shù)僅有9例，陽性率為26.5%。可知血清HBeAg陽性產(chǎn)婦的乳汁中HBV-DNA陽性率明顯高于HBeAg陽性產(chǎn)婦，兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=23.01，P＜0.01)。

2.3 產(chǎn)婦血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果由表2可知，乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦血清與乳汁中HBV-DNA均陽性者，血清乙肝病毒載量高于乳汁中病毒載量，且乳汁HBV-DNA含量隨著血清HBV-DNA含量的升高而增大，呈正相關(guān)(r=0.891，P＜0.05)。

表2 血清HBV-DNA與乳汁HBV-DNA定量檢測(cè)結(jié)果

3 討論

母乳是嬰兒成長(zhǎng)最理想的天然食品，它是嬰兒獲取營養(yǎng)成分和免疫物質(zhì)最直接和重要的方法。但是，對(duì)于攜帶乙肝病毒的乳母來說，母乳喂養(yǎng)會(huì)增加?jì)雰焊腥綡BV的概率。我國是乙肝高發(fā)區(qū)，母嬰垂直傳播是其主要傳染途徑之一。乙肝病毒一般通過3種途徑進(jìn)行母嬰傳播：妊娠時(shí)經(jīng)胎盤宮內(nèi)感染；分娩時(shí)胎兒經(jīng)過產(chǎn)道，因吞進(jìn)羊水、血、陰道分泌物而引起感染；產(chǎn)后密切接觸或母乳喂養(yǎng)獲得感染[4-5]。由于新生兒的免疫功能尚不完善，當(dāng)任何一處消化道黏膜發(fā)生炎性反應(yīng)或者破損時(shí)，母乳中的HBV就可能通過毛細(xì)血管進(jìn)入嬰兒血液循環(huán)，導(dǎo)致乙肝病毒感染[6]。

HBV免疫血清學(xué)標(biāo)志物中HBsAg、HBeAg陽性通常被認(rèn)為是HBV感染的證據(jù)，其中HBeAg是HBV復(fù)制過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物，較HBsAg出現(xiàn)晚、消失早，HBeAg的存在說明傳染性強(qiáng)，是HBV活躍復(fù)制的一個(gè)指標(biāo)[7]。HBV-DNA是HBV的基因組成和復(fù)制模板，其檢出與否和復(fù)制拷貝數(shù)是衡量乙肝傳染性強(qiáng)弱和治療有效與否最直接的指標(biāo)。

本研究結(jié)果表明，乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦血清HBV-DNA檢測(cè)呈陽性者，其乳汁中亦可能存在HBV-DNA，且其含量與血清HBV-DNA含量呈正相關(guān)(r=0.891，P＜0.05)，但其檢出的陽性率均小于血清HBV-DNA，雖然兩者的檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但是定量雙重檢測(cè)產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA，可以降低乙肝病毒母嬰垂直傳播的概率。血清HBeAg陽性產(chǎn)婦的血清和乳汁中HBV-DNA陽性率均明顯高于HBeAg陰性產(chǎn)婦，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，提示產(chǎn)婦血清和乳汁中HBV-DNA的表達(dá)與其血清HBeAg的表達(dá)存在一定相關(guān)性。然而一部分血清HBeAg陰性產(chǎn)婦的血清和乳汁中HBV-DNA亦為陽性，如果只單純檢測(cè)其免疫血清學(xué)標(biāo)志物，就容易忽視乳汁的傳播性。因此，聯(lián)合檢測(cè)產(chǎn)婦血清中的免疫血清學(xué)標(biāo)志物、HBV-DNA和乳汁中的HBV-DNA對(duì)確定乙肝病毒母嬰垂直傳播的風(fēng)險(xiǎn)性更為可靠。

綜上所述，采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR法檢測(cè)HBV-DNA具有靈敏度高和特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦無論其免疫血清學(xué)為何種模式，均應(yīng)做血清和乳汁HBV-DNA定量檢測(cè)，從而更準(zhǔn)確地反應(yīng)乙肝病毒在體內(nèi)的復(fù)制情況和宿主的傳染性強(qiáng)弱，進(jìn)而正確的指導(dǎo)母乳喂養(yǎng)，減少嬰兒感染乙肝病毒的幾率。

[1]殷繼明,嚴(yán)艷,李卓,等.HBsAg陽性產(chǎn)婦血清、乳汁和新生兒血清中乙肝病毒DNA檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國婦幼保健,2012,27 (1):35-36.

[2]楊紅櫻,王敏,莊豪.96例乙肝產(chǎn)婦血清及乳汁中HBV DNA檢測(cè)及臨床分析[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2011,6(4):71-72.

[3]賈繼東,李蘭娟.慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J].臨床肝膽病雜志,2011,27(1)113-128.

[4]倪語星.臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)[M].4版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2007:445.

[5]Hill JB,Sheffield JS,Ki MJ,et al.Risk of hepatitis B transmission in breast-fed infants of chronic hepatitis B carriers[J].Obstet Gynecol,2002,99(6):1049-1051.

[6]陳銘,艾彪,何瀚,等.乙型肝炎產(chǎn)婦血清與乳汁HBV標(biāo)志物檢測(cè)意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2010,7(6):517-518,521.

[7]王奕芳,顧春美.乙肝病毒攜帶產(chǎn)婦乳汁乙肝病毒標(biāo)志物檢測(cè)及分析[J].中國實(shí)用醫(yī)藥,2011,6(17):12-13.

Study on the hepatitis B serum markers and the correlation between serum and milk HBV-DNA in HBV-infectious pregnant women.

ZHU Min-zhi,HANG Shuang-xiong,SHEN Hong-yu.Department of Clinical Laboratory,the Third People's Hospital of Changzhou,Changzhou 213001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveThrough analysis of the relationship between the hepatitis B serum markers in HBV-infectious pregnant women and the HBV-DNA positive rate in serum and milk,and the correlation serum and milk HBV-DNA in HBV-infectious pregnant woman,we aimed to explore some instructions on breast-feeding.MethodsNinety-six HBV-infectious pregnant women were divided into four groups,including large three-positivegroup,small three-positive group,HbsAg and HbeAg positive group,and HbsAg and HbcAb positive group.Another 12 women with hepatitis B two pairs of semi-five indicators all negative were chosen as control group.The hepatitis B virus immune markers in serum were detected by ELISA while HBV-DNA level in serum and milk was determined by real time RT-PCR,and the correlation between the detectingResultswere analyzed.ResultsThe positive rates of HBV-DNA in serum and milk of large three positive group were significantly higher than those in the other three groups(P＜0.05).Among all groups,the positive rates of HBV-DNA in milk were less than those in serum with no significant difference(P＞0.05).The HBV-DNA positive rates in serum and milk in HBeAg positive groups were obviously higher than that in HBeAg-negative group(P＜0.01).However,HBV-DNA in serum and milk were also detected in part of the HBeAg-negative pregnancy women.The HBV-DNA content in serum had positive relation with HBVDNA content in milk(r=0.891,P＜0.05).ConclusionIn HBV-infectious pregnant women,it is found that the HBV-DNA positive rate in milk was less than that in serum,and the content of HBV-DNA in milk was increased along with that increased in serum.Therefore,it is more reliable to determine the risk of hepatitis B virus transmission from mother to infant by quantitative measurement of HBV-DNA in serum and milk.It is helpful in interrupting HBV transmission,deciding the mode of breast-feeding,and guiding breast-feeding,so as to decrease the infectious rate of baby.

Hepatitis B virus;HBV-DNA;Serum;Milk

R714.251

A

1003—6350（2014）13—1958—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0759

2013-11-06)

申紅玉。E-mail:shenhongyu_2004@126.com