BCRP與P-gp在乳腺癌組織中的表達及其意義

齊彩霞

（山西大同大學醫學院，山西大同037009）

乳腺癌由于其發生部位的特殊性，多數患者容易做到早發現、早手術、早治療，因此在臨床常見的九大惡性腫瘤中，乳腺癌的治療效果以及治愈率一直是比較樂觀的。但是一部分乳腺癌患者綜合治療效果欠佳，容易復發轉移，主要的原因是癌細胞對于化療藥物產生耐藥，減弱其治療作用的發揮，降低了治愈率。目前關于乳腺癌的多藥耐藥機制，國內外學者已做了大量的科學研究。研究結果顯示多數的腫瘤組織中含有大量的藥物轉運蛋白，這些蛋白能夠阻礙化療藥物進入腫瘤細胞，大幅度削弱化療療效，其中關于P-糖蛋白（P-gp）和乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）的研究較多。P-gp是廣泛存在于人體正常組織及癌組織中的一種藥物轉運蛋白，它在惡性腫瘤的多藥耐藥機制中研究的較多。乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）是最近幾年來發現的與耐藥機制相關的一種新的跨膜轉運蛋白,其在腫瘤多藥耐藥機制中發揮的作用也越來越重要[1]。本研究采用免疫組織化學的方法檢測P-gp與BCRP在乳腺癌組織中的表達，并檢測其表達在伴有淋巴結轉移者與非淋巴結轉移者中的不同。

1 材料與方法

1.1 臨床標本

收集大同市第五人民醫院2009-2012年收治的原發性乳腺癌患者43例，留取新鮮手術切除的腫瘤組織及淋巴結標本，標本經病理診斷均為乳腺癌。病理分期為Ⅰ期6例，ⅡA期10例，ⅡB期9例，ⅢA期14例，ⅢB期4例。淋巴結無轉移12例，伴有淋巴結轉移者31例。同時收集24例正常乳腺組織的標本。所有標本4%甲醛固定，石蠟包埋，制成厚4μm的組織切片。

1.2 試劑與方法

鼠抗人P-gp單克隆抗體，鼠抗人BCRP-21單克隆抗體，S-P染色及DAB顯色試劑盒均購自北京中山公司。標本均采用S-P法進行免疫組化染色，用已知陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照。

1.3 陽性結果判定

根據腫瘤細胞被染色的陽性細胞數量及染色的強弱程度來判定結果。P-gp結果判定：按照陽性細胞數量所占比例為＜15%，染色極淺為陰性（－）；陽性細胞數目所占比例＞15%，染色呈淡黃色以及棕黃色均為陽性表達。BCRP結果判定：按照陽性細胞數量所占比例為＜20%，染色極淺為陰性（－）；陽性細胞數目所占比例＞20%，染色呈淡黃色及棕黃色為陽性表達。

1.4 統計學處理

所有數據均采用SPSS統計軟件進行統計學處理：樣本陽性率的比較用χ2檢驗。

2 結果

2.1 BCRP與P-gp在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達情況

BCRP與P-gp在乳腺癌組織中的表達均明顯高于正常乳腺組織，見表1。其中BCRP的正常乳腺組織中的陽性率為58.3%，乳腺癌組織中為90.7%，二者相比χ2=9.761，P=0.001 8；P-gp在正常乳腺組織中的陽性率為41.7%，乳腺癌組織中為83.7%，二者相比χ2=12.659，P=0.000 4。

表1 P-gp與BCRP在乳腺癌組織及正常乳腺組織中的表達

2.2 BCRP與P-gp的陽性表達率與淋巴結轉移的關系

在伴有淋巴結轉移的乳腺癌組織中BCRP與P-gp的陽性表達率均較不伴有淋巴結轉移者為高。其中在不伴有淋巴結轉移的乳腺癌組織中BCRP的陽性表達率為75%，在伴有淋巴結轉移者中的陽性率為96.8%，二者相比χ2=4.862，P=0.028；在不伴有淋巴結轉移的乳腺癌組織中P-gp的陽性表達率為58.3%，在伴有淋巴結轉移者中的陽性率為93.5%，二者相比χ2=7.872，P=0.005,見表2。

表2 P-gp與BCRP的表達與淋巴結轉移的關系

3 討論

BCRP在正常人體的腦、肝臟、胎盤、前列腺、小腸等組織中有較高水平的表達[2]。近年來國內外醫學專家也進行了大量的實驗研究，表明在胃癌、大腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤組織中都有BCRP的高度表達。BCRP與P-gp屬于同一家族，作用相似，也是依賴ATP的一種跨膜轉運蛋白，其作用底物為阿霉素、柔紅霉素等乳腺癌患者的常用藥物。它可以有效地將上述藥物在非常短的時間內從細胞內泵出到細胞外，降低腫瘤細胞內藥物分子的聚集數量，使抗腫瘤藥物殺傷腫瘤細胞的能力在很大的程度上被減弱，因此出現耐藥現象[2]。可以說BCRP在乳腺癌患者的多藥耐藥機制中發揮著舉足輕重的作用。Herman等也曾利用PCR的方法對乳腺癌組織中的BCRP含量進行定量檢測，發現BCRP的表達要明顯高于其他的耐藥相關蛋白[3]。本研究證明BCRP在乳腺癌組織中有過度表達，伴有淋巴結轉移的患者BCRP的表達要明顯高于沒有淋巴結轉移的患者，提示BCRP的表達程度的高低與腫瘤細胞的侵襲能力具有一定的相關性。

P-gp是廣泛存在于人體組織中的一種跨膜轉運蛋白，也是目前研究最全面最深入的耐藥相關蛋白。它所作用的底物非常廣泛，包括抗生素類藥物、心血管類藥物、抗精神病藥物、以及抗腫瘤藥物[4]。P-gp表達水平的高低與相應的惡性腫瘤細胞內藥物濃度的高低具有明顯的關聯，其作用機制可能是在ATP的參與下，把已被擴散入腫瘤細胞內的藥物分子主動運輸到細胞外，這樣就使腫瘤細胞內的藥物有效濃度大幅度降低，不能發揮其殺傷腫瘤細胞的作用而發生耐藥[5]。本實驗研究表明P-gp在乳腺癌組織中有高表達，且在伴有淋巴結轉移的患者的癌組織中表達明顯高于無淋巴結轉移患者，這證實了P-gp不僅參與多藥耐藥機制，而且與乳腺癌患者的病理分期也有一定的關系。

總之，BCRP與P-gp與在乳腺癌組織中的過度表達，可能與癌細胞對藥物的多藥耐藥機制有關。要想提高乳腺癌患者的治愈率，就要想辦法降低它們二者的表達水平，這一課題已經成為醫學相關科研工作者的研究熱點。

[1]Doyle L A,Ross D D.Multidrug resistance mediated by the breast cancer resistance protein BCRP（ABCC2）[J].Oncogene,2003,22（47）:7340-7358.

[2]Doyle A L A,Yang W,Abruzzo V L V,et al.A multidrug resistance transporter from human MCF-7 breast cancer cells[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998，95:15665-15670.

[3]Herman B,John A F,M ax ime P L.R N A expression of breast cancer resistance protein,lung resistance-related protein,multidrug resistance-associated protein 1 and 2,and multidrug resistance gene 1 in breast cancer:correlation with chemo-therapeutic re sponse[J].Clin Cancer Res,2003,2(9):827-836.

[4]Kirschbaum K M,Uhr M,Holthoewer D,et al.Pharmacokinetics of acute and sub-chronic aripiprazole in P-glycoprotein deficient mice[J].Neuropharmacology,2010,59(6):474-479.

[5]楊易，許沈華.胃癌P-糖蛋白表達的臨床意義及逆轉[J].中國腫瘤，2006，8（11）：529-532.