HPV E6/E7 mRNA檢測對宮頸細胞學診斷為ASC-H的分流作用

王振明

（濰坊市人民醫院檢驗科，山東 濰坊 261041）

HPV E6/E7 mRNA檢測對宮頸細胞學診斷為ASC-H的分流作用

王振明

（濰坊市人民醫院檢驗科，山東 濰坊 261041）

目的HPV E6/E7 mRNA檢測對宮頸細胞學診斷為ASC-H的分流作用。方法對68例ASC-H患者進行HPV E6/E7 mRNA及高危型HPV檢測，并行陰道鏡檢查及活檢，分析其結果之間的關系。結果HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2 +宮頸病變的敏感性為63.2%，特異性為75.5%，陽性預測值為50%，陰性預測值為84.1%。HPV E6/E7 mRNA方法的特異性及陽性預測值明顯高于高危HPV方法。結論HPV E6/E7 mRNA可以作為ASC-H患者是否需要陰道鏡檢查的一個分流指標。

HPV；E6/E7；mRNA；ASC-H

2001 TBS宮頸細胞學報告系統將不典型鱗狀上皮細胞（atypical squamous cells，ASC）分為2個類型：不能明確意義的不典型鱗狀上皮細胞（ASC-US）及不除外高度鱗狀細胞病變的不典型鱗狀上皮細胞（ASC-H）。美國陰道鏡與宮頸病理協會主張對ASC-H患者立即作陰道鏡檢查。為避免低風險人群的過度診斷及侵入性檢查，有研究采用高危人乳頭瘤病毒（HR-HPV）檢測作為ASC-H患者分流的工具[1]。高危型HPV中致癌基因為 E6/E7 基因[2]，而 HPV E6/E7 mRNA 含量能較好地反映致癌基因E6/E7的活動度，可以更為直觀的評估高度宮頸鱗狀上皮細胞內病變及宮頸癌的發病風險和預后[3，4]。本研究通過68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA進行檢測，并與高危型HPV檢測比較，探討其對ASC-H患者分流的價值。

表2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA檢測方法對CIN2+的診斷效率

1 材料與方法

1.1 研究對象

選擇2012年10月至2013年10月于濰坊市人民醫院就診，TCT檢查結果為ASC-H；并且行HPV E6/E7 mRNA檢測、HR-HPV檢測及陰道鏡下活檢的68例患者作為研究對象，患者年齡26～69歲，平均年齡45歲。

1.2 方法

1.2.1 標本采集

所有受試者由醫師以窺器暴露子宮頸，擦凈子宮頸口分泌物，用宮頸刷在宮頸口稍用力順時針旋轉3圈后取出，將宮頸脫落細胞標本放入專用保存管中4 ℃保存。

1.2.2 HR-HPV DNA檢測

采用凱普公司的醫用核酸快速雜交儀及配套試劑盒檢測21種HPV亞型，其中13種HR-HPV（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68）。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA檢測

采用以實時多重核酸序列擴增（NABSA）技術為基礎的PreTect HPVProofer檢測法，檢測試劑為NucliSENS EasyQ HPV 1.0試劑盒，能檢測處HPV16、18、31、33和45 五種高危HPV亞型的E6/E7 mRNA表達。

1.2.4 陰道鏡檢查及活檢

對68例ASC-H 患者由臨床醫師進行陰道鏡檢查，并對可疑病灶進行陰道鏡下定位活檢，未見明顯異常者，采取3、6、9、12點活檢。所有病理切片均由資深病理學專家復核。

1.3 統計學處理

用SPSS13.0軟件進行統計學分析，各組間率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA檢測結果比較（表1）。68例ASC-H 患者經陰道鏡活檢，包括19例宮頸炎，30例CIN1，10例CIN2，8例CIN3及1例宮頸癌。CIN2+組HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA陽性率均明顯高于CIN2-組，差異有統計學意義。其中CIN2- 組（包含CIN1及宮頸炎）HPV E6/E7 mRNA陽性率（24.5%）明顯低于HR-HPV DNA的陽性率（44.9%），顯示出較高的特異性。

表1 68例ASC-H 患者HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA檢測結果

2.2 HPV E6/E7 mRNA、HC2 HPV DNA檢測方法對CIN2+的診斷效率的比較（表2）。HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2+宮頸病變的敏感性為63.2%，低于HR-HPV DNA方法，但特異性顯著高于HRHPV DNA方法。HPV E6/E7 mRNA方法檢出ASC-H中CIN2 +的陰性預測值與HR-HPV DNA方法無明顯差別，但陽性預測值明顯高于HRHPV DNA方法。

3 討 論

宮頸細胞學檢查是宮頸病變的重要檢查手段，目前采用國際通用的2001 TBS報告系統。涂片中的異常細胞僅有1個或2個，不足以診斷鱗狀上皮內高度病變時，報告ASC-H。美國陰道鏡與宮頸病理協會主張對ASC-H患者立即作陰道鏡檢查。本次研究在68例ASC-H患者的病理組織學診斷結果中，19例 ASC-H患者（27.9%）為隱藏的CIN2+宮頸病變患者，說明ASC-H患者有較高的高度宮頸鱗狀上皮細胞內病變患病率。但是，研究中也有49例 ASC-H 患者（72.1%）為CIN1與宮頸炎患者，這類患者在診療上僅需要按時隨訪，因此，積極的陰道鏡檢查可能存在過度診斷，由此會給患者帶來不良感受。合理有效地分別對待ASC-H患者的處理，對臨床醫師來說始終是一個不可避免的難題。大量流行病學和生物學研究表明，反復持續的高危型HPV感染是宮頸癌及其癌前病變發病的主要危險因素，針對ASC-H病例HR-HPV檢測呈陽性者，進一步行陰道鏡活檢可以縮小有創檢查的人群范圍，使其成為較好的分流方式[5]。但是，HPV感染的普遍性和感染后有一過性消除的特點，導致HPV檢測的特異性不高。

E6/E7基因是高危型HPV中的兩條癌基因片段，它們是導致宮頸細胞癌變的關鍵。E6蛋白能結合P53蛋白，使P53蛋白失去抑癌作用。E7蛋白能調控Rb家族及細胞周期調控蛋白，從而使細胞無限增殖。一旦HPV 整合入人基因組，E6/E7 mRNA的表達不受限制，將增加到一個引起惡性轉化的水平，檢測這種癌基因的轉錄即能確診高危反復感染者。有文獻報道E6/E7 mRNA 水平與病變的嚴重程度相關，在高級別宮頸病變中對高危HPV mRNA 檢測相比HPV DNA 檢測有更好的特異性[6]。本研究對68例ASC-H患者的HPV E6/E7 mRNA及HR-HPV DNA檢測發現，在檢出CIN2+宮頸病變方面，HPV E6/E7 mRNA較HR-HPV DNA具有更高的特異性和陽性預測值。對HPV E6/E7 mRNA陽性ASC-H患者立即進行陰道鏡活檢，陰性ASC-H患者進行隨訪，我們認為是可行的。作為ASC-H分流的一種新方法，需要進一步擴大樣本量來探討HPV E6/E7 mRNA檢測對ASC-H的分流作用。

[1] 梅平,劉艷輝,李旻,等.高危型人乳頭狀瘤檢測在不除外高度鱗狀上皮內病變的不典型鱗狀上皮細胞中的意義[J].中華病理學雜志,2009,38(5):337-339.

[2] Moody CA,Laimins LA.Human papillomavirus oncoproteins: pathways to transformation[J].Nat Rev Cancer,2010,10(8):550-560.

[3] 盧文波,姜智南,陳順美,等.人乳頭狀瘤病毒E6/E7mRNA檢測宮頸高度病變的臨床評價[J].中華醫院感染學雜志,2009,19(22):3145-3147.

[4] Hovland S,Muller S,Skomedal H,et al.E6/E7 mRNA expression analysis: a test for the objective assessment of cervical adenocarcinoma in clinical prognostic procedure[J].Int J Oncol,2010,36(6):1533-1539.

[5] 盧薇薇,任國平,呂梨.高危型HPV-DNA 檢測對宮頸細胞學診斷為ASC-H的分流作用[J].全科醫學臨床與教育,2009,7(2):102-104.

[6] Ratnam S,Coutlee F,Fontaine D,et al.Clinical performance of the PreTect HPV-Proofer E6/E7 mRNA assay in comparison with that of the Hybrid Capture 2 test for identif i cation of women at risk of cervical cancer[J].J Clin Microbiol,2010,48(8):2779-2785.

Use of HPV E6/E7 mR NA Testing to Deal with Atypical Squamous Cells Cannot Exclude HSIL

WANG Zhen-ming
(Department of Laboratory, Weifang People’s Hospital, Weifang 261041,China)

ObjectiveUse of HPV E6/E7 mRNA testing to deal with atypical squamous cells cannot exclude HSIL.MethodsHPV E6/E7 mRNA and HRHPV DNA were examined in 68 patients with ASC-H. Colposcopic examination and biopsy were taken, all results were evaluated.ResultsThe sensitivity, specificity, the positive predictive value and the negative predictive value for detecting CIN2 + lesions of ASC-H were 63.2%, 75.5%,50%, and 84.1%, respectively, for HPV E6/E7 mRNA test; The HPV E6/E7 mRNA testing is superior to HR-HPV DNA testing in specificity, the positive predictive value.ConclusionsHPV E6/E7 mRNA may serve as a predict select whether a patient with ASC-H should take Colposcopic examination immediately.

Human papillomavirus; E6/E7; mRNA; ASC-H

R711.32

B

1671-8194（2014）21-0070-02