配方羊奶粉對(duì)小鼠免疫功能影響的研究

楊鵬飛，吳 桐，謝 奎，鄧友田，蔣飛榮，盧素云，侯艷梅＊

1 湖南安生美藥物研究院有限公司，湖南長沙 410000

2 海普諾凱營養(yǎng)品有限公司，湖南長沙 410000

0 引言

乳制品因含有豐富營養(yǎng)物質(zhì)，已成為人們?nèi)粘Ｉ钪谐Ｒ姷氖称坊驙I養(yǎng)品。研究發(fā)現(xiàn)，羊奶中含有豐富的酪蛋白、乳清蛋白、礦物質(zhì)、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性因子，其營養(yǎng)價(jià)值接近人乳，總體上優(yōu)于牛乳，被稱為“奶中之王”[1，2]。憑借著含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，羊奶也具有一定的保健功能。研究表明，羊奶中的蛋白質(zhì)、維生素C、維生素E、超氧化物歧化酶等物質(zhì)使其具有良好的抗氧化活性[3，4]；羊奶可降低大鼠血漿中膽固醇的含量，可能與其含有豐富的中鏈脂肪酸有關(guān)[5]；羊奶對(duì)小鼠腸道菌群及結(jié)腸炎大鼠的炎癥具有一定的調(diào)節(jié)和改善作用，可能與其含有豐富的表皮細(xì)胞生長因子和低聚糖有關(guān)[6，7]。此外，羊奶中營養(yǎng)成分也具有其他的功效作用[8]，如羊奶中的中鏈脂肪酸也被發(fā)現(xiàn)具有抗感染和控制血糖、血脂的功效；羊奶中的低聚糖亦具有抗炎、抗黏附以及增強(qiáng)免疫力的作用；羊奶中的硒具有抗癌、抗氧化、清除自由基等多種功效。

正是因?yàn)檠蚰痰热橹破泛胸S富的營養(yǎng)物質(zhì)，在國家衛(wèi)生健康委員會(huì)食品安全標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測評(píng)估司于2020年2月發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎防治營養(yǎng)膳食指導(dǎo)》中，乳制品被列為重點(diǎn)推薦的食物之一[9]。羊奶中含有多種具有免疫調(diào)節(jié)功能的成分，然而，目前與羊奶增強(qiáng)機(jī)體免疫功能相關(guān)的研究仍比較缺乏。因此，本研究通過構(gòu)建免疫功能低下BALB/c小鼠模型，初步評(píng)價(jià)兩款配方羊奶粉對(duì)去免疫功能低下BALB/c小鼠模型的影響，以期為羊奶粉在科學(xué)膳食及調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能方面提供科學(xué)的指導(dǎo)。

1 材料和方法

（1）受試物

益生菌+益生元配方羊奶粉、高鈣富硒配方羊奶粉，由海普諾凱營養(yǎng)品有限公司提供。成人推薦食用量均為70 g/天，按體表面積換算成小鼠等效劑量為9.1 g/kg，給樣劑量設(shè)為等效劑量的2 倍，給樣體積40 mL/kg。

（2）試驗(yàn)動(dòng)物

BALB/c小鼠，SPF級(jí)，17～19 g，80 只，雄性，生產(chǎn)單位：湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2018-0004，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證：430727201101324683。

（3）儀器設(shè)備

721型分光光度計(jì)，上海菁華科技儀器有限公司；DNM-9606型酶標(biāo)分析儀，北京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司。

（4）試驗(yàn)方法

造模與給藥。檢疫結(jié)束后，試驗(yàn)小鼠按體重隨機(jī)分為A、B組，每組各40 只小鼠，每組再根據(jù)體重分為：①空白對(duì)照組；②模型對(duì)照組；③益生菌+益生元配方羊奶粉組；④高鈣富硒配方羊奶粉組。A組動(dòng)物用于ConA（刀豆球蛋白A）誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和鼠脾NK細(xì)胞活性測定試驗(yàn)，B組用于小鼠碳廓清試驗(yàn)。

模型對(duì)照組、益生菌+益生元配方羊奶粉組和高鈣富硒配方羊奶粉組小鼠自分組當(dāng)天連續(xù)3天腹腔注射80 mg/kg環(huán)磷酰胺，此后，每周強(qiáng)化注射造模1 次，空白對(duì)照組在相同時(shí)期腹腔注射等量0.9%氯化鈉注射液。造模周期為30 天。

造模期內(nèi)，益生菌+益生元配方羊奶粉組和高鈣富硒配方羊奶粉組按40 mL/kg灌胃相應(yīng)劑量羊奶粉，每天給樣1 次，連續(xù)30 天；空白對(duì)照組和模型對(duì)照組每天灌胃相應(yīng)體積的純水。

指標(biāo)檢測。參考《保健食品功能評(píng)價(jià)方法（2020年版）（征求意見稿）》中有助于增強(qiáng)免疫力功能的檢驗(yàn)方法評(píng)價(jià)配方羊奶粉對(duì)小鼠免疫功能的影響。檢測指標(biāo)如下：①對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖能力的影響；②對(duì)自然殺傷細(xì)胞（NK）活性的影響；③對(duì)小鼠碳廓清能力的影響。

（5）結(jié)果統(tǒng)計(jì)

本試驗(yàn)數(shù)據(jù)有效數(shù)字修約按照四舍五入進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析選用SPSS16.0，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)。如果滿足正態(tài)性（P＞0.05），用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并根據(jù)方差齊性情況選用LSD+Dunnet（方差齊）或Tamhane’s T2（方差不齊）進(jìn)行比較分析。如果不滿足正態(tài)性（P＜0.05），則用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，并用Mann-Whitney檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以α=0.05為檢驗(yàn)界限，其中P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01表示所檢驗(yàn)的差別有非常顯著性意義。

2 結(jié)果與分析

（1）對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

如圖1所示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力極顯著降低（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，益生菌+益生元配方羊奶粉組和高鈣富硒配方羊奶粉組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力顯著升高（P＜0.05），小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力分別提升33.0%和27.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高鈣富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖能力。

圖1 對(duì)Balb/c小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響（±S ，n=10）

（2）對(duì)NK細(xì)胞活性的影響

如圖2所示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠NK細(xì)胞活性極顯著降低（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，益生菌+益生元配方羊奶粉組和高鈣富硒配方羊奶粉組小鼠NK細(xì)胞活性均極顯著升高（P＜0.01），NK細(xì)胞活性分別提升51.0%和70.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高鈣富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的NK細(xì)胞活性。

圖2 對(duì)Balb/c小鼠NK細(xì)胞活性的影響（±S ，n=10）

（3）小鼠碳廓清能力的影響

如圖3所示，與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠吞噬指數(shù)極顯著降低（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，益生菌+益生元配方羊奶粉組和高鈣富硒配方羊奶粉組小鼠吞噬指數(shù)均極顯著升高（P＜0.01），碳廓清吞噬指數(shù)分別提高34.0%和42.0%。表明生菌+益生元配方羊奶粉和高鈣富硒配方羊奶粉均可提高免疫功能低下小鼠的碳廓清能力。

圖3 對(duì)Balb/c小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)吞噬指數(shù)的影響（±S ，n=10）

3 結(jié)果與討論

免疫系統(tǒng)是人體健康重要防線，均衡的膳食、全面的營養(yǎng)已成為保障和提高人體免疫力的重要方式[10]。羊奶粉憑借其含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)（蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖、不飽和脂肪酸、礦物質(zhì)、維生素等），對(duì)提高人體免疫力有良好的應(yīng)用前景[11]。山羊奶中含有7.4 g/kg乳清蛋白、0.56 mg/100 g鋅、0.001 336 mg/100 g硒、185 IU/100 mL VA、2.3 IU/100 mL VD、1.29 mg/100 mL VC，含量均高于牛奶[12]。除此之外，山羊奶還含有豐富的低聚糖，近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，山羊奶低聚糖能促進(jìn)腸道對(duì)鈣和鎂的吸收，還能對(duì)免疫系統(tǒng)有潛在的積極作用，能夠刺激人體免疫系統(tǒng)釋放細(xì)胞因子，直接抑制炎癥反應(yīng)[13]。針對(duì)不同人群的營養(yǎng)需求，越來越多的研究已經(jīng)開始關(guān)注配方奶粉的功效作用。研究已表明，硒具有抗癌、抗氧化、清除自由基等多種功效[14]，益生元和益生菌具有抗炎、增強(qiáng)免疫力和調(diào)節(jié)腸道菌群的作用[15]，“富硒組分”和“益生元+益生菌”均有助于增強(qiáng)機(jī)體免疫力。本研究中的兩款配方羊奶粉均在原有奶基基礎(chǔ)上分別添加了高鈣富硒成分，以及益生元+益生菌組分。因此，本研究通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)初步評(píng)價(jià)了兩款配方羊奶粉是否具有增強(qiáng)免疫力的作用。

本研究結(jié)果表明，益生元+益生菌配方羊奶粉和高鈣富硒配方羊奶均可提高免疫功能低下小鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖能力、NK細(xì)胞的殺傷活性以及小鼠碳廓清能力，即兩款配方羊奶粉對(duì)小鼠細(xì)胞免疫、單核—巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性均有一定的調(diào)節(jié)作用。參考《保健食品功能評(píng)價(jià)方法（2020年版）（征求意見稿）》中有助于增強(qiáng)免疫力功能的判定標(biāo)準(zhǔn)“在細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、單核—巨噬細(xì)胞功能、NK細(xì)胞活性4 個(gè)方面任兩個(gè)方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強(qiáng)免疫力功能的作用”，因此兩款配方羊奶粉具有有助于增強(qiáng)免疫力功能的作用。