殼聚糖對小兒解表止咳口服液澄清效果的影響

張俊俠，魏燦英，焦小珂，肖禾（.成都大學醫護學院，成都 637；.四川廣元蓉成制藥有限公司，四川 廣元 68000）

小兒解表止咳口服液是集六十余載臨床實踐而形成的經驗方，該經驗方取《傷寒論》麻黃湯之義，選麻黃、杏仁、半夏等構成，用于治療小兒呼吸道感染引起的咳嗽、痰多等癥，具有解表清熱、止咳祛痰、逐邪寧肺的功效，標本同治，療效確切。小兒解表止咳口服液外觀為深棕色，不透明。其澄明度較差，且直接影響到產品外觀性狀的觀察和內在質量的穩定性。因此，提高口服液澄明度顯得尤為重要。絮凝澄清法是一種有效的提高藥品質量的澄清方法[1-2]，其中殼聚糖是一種新型的絮凝澄清劑，在中藥中已有成功應用。已有學者從化學成分入手研究發現，殼聚糖對于大部分藥材提取液均能起到一定的澄清作用，并能充分保留有效成分，明顯提高有效成分的轉移率[3-7]。朱寧等[8-9]在丹參提取、排鉛口服液的澄清工藝改進中應用殼聚糖絮凝法，既不影響中藥質量，又可節省生產成本，較傳統的中藥純化方法好。筆者以殼聚糖作為澄清劑對小兒解表止咳口服液進行澄清處理，選擇最佳澄清工藝，并與醇沉法相比較，結合分光光度法觀察其澄清效果，并采用高效液相色譜（HPLC）法測定指標性成分鹽酸麻黃堿的含量，以確保澄清工藝的合理性。

1 材料

1.1 儀器

SPD-10Avp HPLC儀、G1314A-UV紫外檢測器（日本島津公司）；2TU-1901紫外-可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；BP211D分析天平（德國Sartorius公司）；微孔濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司，孔徑:0.45 μm）；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）。

1.2 藥品與試劑

小兒解表止咳口服液（四川廣元蓉成制藥有限公司，批號:121101）；殼聚糖（青島海維康生物制品有限公司，批號:01106）；鹽酸麻黃堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:171241-201007，供含量測定用）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 殼聚糖溶液的制備

精密稱取殼聚糖1 g，加入1%醋酸溶液100ml，待溶脹后用磁力攪拌器攪拌使之完全溶解，即得1%殼聚糖溶液。

2.2 吸光度的測定

精密量取小兒解表止咳口服液1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以純水為空白對照，按分光光度法，采用l cm的石英吸收池，在520nm波長下測定吸光度，吸光度值大小與溶液澄清效果成反比。

2.3 鹽酸麻黃堿的含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗色譜柱:C18（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液（含0.1%三乙胺）（3∶97，V/V）；檢測波長:205nm；流速:1.0ml/min；進樣量:10μl。在此條件下，鹽酸麻黃堿與其他組分均可達到基線分離，理論板數以鹽酸麻黃堿色譜峰計算應不低于4000。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品2.2507mg，置50ml量瓶中，用0.1 mol/L的鹽酸溶液定容，搖勻，作為對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密量取小兒解表止咳口服液5ml，加水10ml及濃氨試液0.5ml，用乙醚振搖提取5次（30、30、20、20、20ml），合并乙醚液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）2ml，混勻，低溫回收溶劑至干，殘渣用乙醇5ml溶解并轉移至25ml量瓶中，加0.1 mol/L的鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得。

2.3.4 線性關系考察 取鹽酸麻黃堿對照品適量，加0.1 mol/L的鹽酸溶液制成質量濃度分別為10、20、40、80、160μg/ml的系列對照品溶液，精密吸取系列對照品溶液適量，注入色譜儀進行分析。以鹽酸麻黃堿峰面積積分值（y）為縱坐標，質量濃度（x）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為y＝29378x－12327（r＝0.9999）。結果表明，鹽酸麻黃堿質量濃度在10～160μg/ml范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.4 單因素試驗考察澄清工藝

2.4.1 殼聚糖用量對澄清效果的影響 取小兒解表止咳口服液5份，各50ml，水浴加熱至80℃，分別按5%、10%、15%、20%、25%的用量加入1%的殼聚糖溶液，同時以100 r/min的速度勻速攪拌10min。4℃下靜置24h后，上清液濾過，轉移至100ml量瓶中，加水至刻度。取此溶液1ml，置50ml量瓶中，加水定容，在520nm波長下測定吸光度，并比較溶液的沉淀和澄明度情況以及鹽酸麻黃堿質量濃度。殼聚糖用量對澄清效果的影響見表1。

表1 殼聚糖用量對澄清效果的影響Tab 1 Effects of the amounts of chitosan on the clarification

2.4.2 澄清溫度對澄清效果的影響 取小兒解表止咳口服液9份，各50ml，分別用水浴加熱至10、20、…、80、90 ℃，按15%的用量加入1%殼聚糖溶液，其余同“2.4.1”項下操作。澄清溫度對澄清效果的影響見表2。

2.4.3 澄清時間對澄清效果的影響 取小兒解表止咳口服液4份，各50ml，用水浴加熱至80℃，按15%的用量加入1%的殼聚糖溶液，同時以100 r/min的速度勻速攪拌10min。4℃分別靜置6、12、24、48 h，取上清液，濾過，取續濾液在520nm波長處測定吸光度，并比較溶液的沉淀和澄明度情況以及鹽酸麻黃堿質量濃度。澄清時間對澄清效果的影響見表3。

表2 澄清溫度對澄清效果的影響Tab 2 Effects of clarification temperature of chitosan on the clarification

由表1～表3可知，隨著殼聚糖用量的逐漸增加，絮狀沉淀的量也逐漸增加，過濾也更加容易，澄明度更好，澄清劑加入量＞10%時，達到澄明效果，澄清劑的加入量對其澄明度影響力減小，綜合對口服液有效成分的保留及成本的考慮，選擇15%的殼聚糖加入量最為合適；各溫度下處理的供試品均產生較多絮狀沉淀，濾液顏色為半透明、紅棕色，但80℃處理的供試品溶液澄明度最好；對澄清時間考察發現，當靜置時間超過24h后，澄明度的變化不大。

2.5 正交試驗優選澄清工藝[5]

根據文獻報道，在預試驗的基礎上，選擇殼聚糖用量（A）、澄清溫度（B）、澄清時間（C）為考察因素，以吸光度、鹽酸麻黃堿的質量濃度為評價指標，設定攪拌速度為100 r/min，攪拌時間為10min，用L9（34）正交表安排試驗。因素與水平見表4；正交試驗結果見表5；方差分析結果見表6。

表4 因素與水平Tab 4 Factors and Level

由表5、表6可知，各因素對澄清效果作用的主次順序為A＞B＞C。其中，殼聚糖用量對吸光度和鹽酸麻黃堿質量濃度的影響有統計學意義（P＜0.05），其他兩個因素均無統計學意義，因此著重考慮A因素。綜合比較分析結果，并考慮實際生產需要，優先考慮有效成分鹽酸麻黃堿的保留，最終確定最佳澄清工藝為A2B2C2，即1%殼聚糖溶液用量為15%，澄清溫度為80℃，澄清時間為24h。

2.6 不同澄清工藝的澄清效果比較

2.6.1 醇沉法 取小兒解表止咳口服液50ml，向其中緩緩加入無水乙醇50ml，同時用磁力攪拌器以100 r/min的速度勻速攪拌，至含乙醇量達到50%（原生產工藝）。4℃靜置24h，上清液濾過，回收乙醇至無醇味，轉移至100ml量瓶中，加水至刻度，貯藏，備用。

表5 正交試驗結果Tab 5 Results of orthogonal experiment

表6 方差分析結果Tab 6 Results of variance analysis

2.6.2 殼聚糖法 取小兒解表止咳口服液50ml，按“2.5”項下優選的最佳工藝，用水浴加熱至80℃，加入1%的殼聚糖溶液15%，同時以100 r/min的速度勻速攪拌10min。4℃靜置24h，取上清液，濾過，轉移至100ml量瓶中，加水至刻度，貯藏，備用。

2.6.3 澄清效果比較 分別精密量取“2.6.1”、“2.6.2”項下溶液各1ml，置50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，以蒸餾水為空白對照，照分光光度法，采用1 cm的石英吸收池，在520nm波長處測定吸光度，比較溶液的沉淀和澄明度情況以及鹽酸麻黃堿質量濃度。醇沉法與殼聚糖澄清法澄清效果比較見表7。

由表7可知，無水乙醇與殼聚糖均可以改善小兒解表止咳口服液的澄明度，但殼聚糖法的樣品澄明度優于醇沉法樣品，并且醇沉法產生的沉淀呈細小顆粒狀，給過濾帶來很大困難，而殼聚糖法產生的沉淀呈疏松的絮狀，易于過濾。最佳工藝下的殼聚糖澄清法與醇沉法對鹽酸麻黃堿質量濃度都影響較小且無明顯差異，可有效保留小兒解表止咳口服液的有效成分。綜上，殼聚糖澄清法較醇沉法的澄清效果更好，且工藝簡便、節省時間。

表7 醇沉法與殼聚糖澄清法澄清效果比較Tab 7 Comparison of the clarification of alcohol precipitation process and chitosan clarification method

3 討論

本研究采用殼聚糖作為澄清劑用于小兒解表止咳口服液澄清工藝優化，結合紫外-可見分光光度法與HPLC法檢測澄明度的變化和對鹽酸麻黃堿含量的影響，并通過正交試驗優化出最佳澄清工藝。

通過比較殼聚糖法與醇沉法發現，殼聚糖法所得的小兒解表止咳口服液澄明度優于醇沉法，對鹽酸麻黃堿質量濃度的影響與醇沉法相比無明顯差異，可有效保留有效成分。殼聚糖法操作簡單，殼聚糖用量較少，相比于醇沉法更節約成本，故可以代替醇沉法用于小兒解表止咳口服液以改善其澄明度。總體上講，殼聚糖在中藥口服液澄清方面的研究已經展示出良好的應用前景，加強此方面的研究，有助于其在純化工藝方面的推廣應用。

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