傳統藥對附子-炮姜的配伍研究Δ

葉 強，付 昆，彭 成，郭 力（.成都中醫藥大學藥學院，成都 6007；.成都市第三人民醫院，成都 6003）

復方用藥是中醫藥的特點和優勢，是在中醫藥理論指導下將藥物進行合理的組織，調其偏性，制其毒性，增強或改變原有功能，消除或緩解其對人體的不良因素，發揮其相輔相成或相反相成的綜合作用，從而使各具特性的群藥組合成一個新的有機整體的過程[1-2]。炮姜為姜科多年生草本植物姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根莖的炮制品，以干姜砂燙至鼓起、表面棕褐色入藥，性溫，味苦、澀，歸脾、肝經。炮制后姜的散烈之性已減弱，具有溫經止血、溫中止痛的功效[3]。《姚氏集驗方》與《世醫得效方》中以附子、炮姜配伍，附子發揮散寒止痛的功效，并促進炮姜發揮溫經止血、溫中止痛的作用，主治脾虛冷瀉和寒性吐血、便血不止之證[4]。本試驗以附子-炮姜藥對為研究對象，研究配伍前后物質基礎的變化，為附子配伍炮姜的傳統理論提供科學詮釋。

1 材料

1.1 儀器

1200型高效液相色譜（HPLC）儀，含二極管陣列檢測器（DAD）、色譜工作站等（美國Agilent公司）；650型紫外-可見分光光度計（英國Perkins Elmer公司）；BT125D型十萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；R-210/R-215型旋轉蒸發器（瑞士Buchi公司）；JCD-1036型超聲波震蕩儀（深圳市君馳達超聲波設備有限公司）。

1.2 試劑

烏頭堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:0720-200807）；甲醇、乙腈、四氫呋喃為色譜純，水為自制重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

1.3 藥材

生附子飲片（產地:四川江油）購自四川江油恒源藥業有限公司，炮姜（產地:四川犍為）購自成都西部藥業有限公司，均由成都中醫藥大學中藥鑒定教研室嚴鑄云教授鑒定，符合《中國藥典》要求。

2 方法與結果

附子總生物堿類成分被認為是其主要藥效組分，酯型生物堿則被看作毒性組分[5]，故本試驗采用溴甲酚綠染色法測定附子總生物堿、異羥肟酸鐵染色法測定附子酯型生物堿，并結合HPLC指紋圖譜揭示其總體成分的變化情況。

2.1 附子總生物堿含量測定（溴甲酚綠染色法[6]）

2.1.1 對照品溶液的制備 取烏頭堿對照品約8mg，精密稱定（7.78mg），置于50ml量瓶中，加適量三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為0.1556mg/ml的烏頭堿對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取附子藥材粗粉約20 g，精密稱定，與炮姜藥材粗粉按1∶0、1∶0.5、1∶1、1∶2（m/m）配伍，分別置圓底燒瓶中，加10倍量水回流提取1 h，濾過，減壓濃縮至100ml，即得。

2.1.3 附子與炮姜按不同比例配伍后的總生物堿含量測定 取上述對照品溶液與供試品溶液，按文獻[6]方法于415nm波長處測定樣品中總生物堿的含量。紫外掃描圖見圖1；標準曲線見表1、圖2；樣品含量測定結果見表2、圖3。

圖1 烏頭堿溴甲酚綠染色溶液的紫外掃描圖Fig 1 UV scan spectrum of aconitine bromcresol dyeing solution

表1 附子總生物堿含量測定的標準曲線結果Tab 1 Results of standard curves of the content of total alkaloid fromA.carmichaelii

圖2 附子總生物堿含量測定的標準曲線Fig 2 Standard curves of the content of total alkaloid from A.carmichaelii

表2 附子配伍炮姜后總生物堿與酯型生物堿含量測定結果（%，n＝3）Tab 2 Content determination of total alkaloid and ester alkaloids after compatibility of A.carmichaelii and Zingiber officinale Preparata（%，n＝3）

圖3 附子配伍炮姜后總生物堿的含量變化Fig 3 The change of total alkaloid content after compatibility ofA.carmichaelii and Z.officinale Preparata

從表2、圖3結果可知，附子與炮姜配伍后附子總生物堿含量大幅度減少，變化范圍為42.29%～50.66%，以附子配伍炮姜（1∶0.5，m/m）降至42.29%為最低。

2.2 附子酯型生物堿的含量測定（異羥肟酸鐵染色法[7]）

2.2.1 對照品溶液的制備 取烏頭堿對照品約20mg，精密稱定（20.4mg），置10ml量瓶中，加少許無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為2.04mg/ml的烏頭堿對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 同“2.1.2”項下方法制備。

2.2.3 附子與炮姜按不同比例配伍后的酯型生物堿含量測定

取“2.2”項下對照品溶液與供試品溶液，按文獻[7]方法于509nm波長處測定樣品中酯型生物堿的含量。紫外掃描圖見圖4；標準曲線見表3、圖5；樣品含量測定結果見表2、圖6。

從表2、圖6結果可知，附子與炮姜配伍后附子酯型生物堿含量降幅較大，變化范圍為29.91%～47.54%，以附子配伍干姜（1∶1，m/m）降至29.51%為最低。

2.3 附子與炮姜配伍的HPLC指紋圖譜研究

圖4 烏頭堿異羥肟酸鐵染色溶液的紫外掃描圖Fig 4 UV scan spectrum of aconitine ferric hydroxamate dyeing solution

表3 附子酯型生物堿含量測定的標準曲線結果Tab 3 Rusults of standard curves of the content of ester alkaloids fromA.carmichaelii

圖5 附子酯型生物堿含量測定的標準曲線Fig 5 Standard curves of the content of ester alkaloids from A.carmichaelii

圖6 附子配伍炮姜后酯型生物堿的含量變化Fig 6 The change of ester alkaloids content after compatibility ofA.carmichaelii and Z.officinale Preparata

由于中藥材成分相當復雜，因此在進行了附子總生物堿和酯型生物堿研究的基礎上，筆者進一步采用HPLC指紋圖譜，從宏觀方面研究藥材配伍的物質基礎變化情況。為使試驗條件統一、可控，選擇附子-炮姜（1∶1，m/m）藥對作為研究對象，其他比例將在以后進行研究。

2.3.1 色譜條件色譜柱:Dikma Dianonsil C18（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相:乙腈-四氫呋喃（25∶15，V/V）（A）-0.1 mol/L醋酸銨溶液（B），梯度洗脫（洗脫程序見表4）；檢測波長:230nm；流速:1ml/min；柱溫:30 ℃；分析時間:70min。

表4 梯度洗脫程序Tab 4 Gradient elution

2.3.2 供試品溶液的制備 分別取附子、炮姜粗粉各約5 g，精密稱定，再取附子-炮姜（1∶1，m/m）配伍粗粉約10 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，加氨試液3ml、異丙醇-乙酸乙酯（1∶1，V/V）混合溶液50ml，稱定質量，超聲處理（功率:120 W，頻率:40～60 kHz）30min，放冷，再稱定質量，用異丙醇-乙酸乙酯（1∶1，V/V）混合溶液補足減失的質量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1∶1，V/V）混合溶液3ml使溶解，濾過，取續濾液，即得。

2.3.3 附子、炮姜單味藥材與藥對的指紋圖譜研究 按文獻[8]方法進行指紋圖譜研究，詳見圖7。

圖7 附子-炮姜藥對的HPLC指紋圖譜A.配伍溶液（1∶1，m/m）；B.附子單煎；C.炮姜單煎Fig 7 HPLC fingerprintingA.compatible solution（1 ∶1，m/m）；B.single herb decoction of A.carmichaelii；C.single herb decoction of Z.officinale Preparata

從圖7可知，附子藥材主要的特征色譜峰有7個，炮姜有4個，配伍后均可檢測到。但是，配伍后有的附子的成分增多了，有的減少了。因此，為了更好地說明附子成分變化的情況，筆者以加權變化率對其進行測定。將附子的7個峰按峰面積進行加權，按下列公式計算其加權變化率，以判斷其成分總體的變化狀況。附子配伍炮姜后附子各成分的加權變化率見表5。

表5 附子配伍炮姜后附子各成分的加權變化率Tab 5 Percentage of weighting change of each component in A.carmichaelii after combined with Z.officinale Preparata

由表5可知，附子與炮姜配伍后，附子各成分總加權變化率為81.00%，說明總體上附子成分有所減少。

3 討論

3.1 配伍比例

臨床配伍時常常遵循特定的藥物用量比例，比例不同藥效也會不同[9]。附子與炮姜的配伍比例在文獻中未見詳細記載，故筆者借鑒附子與干姜、生姜的傳統配伍規律（大多為1∶1，m/m），選用1∶0.5、1∶1、1∶2三個質量比進行研究。

3.2 總生物堿與酯型生物堿

附子與炮姜配伍使附子總生物堿含量減少了約一半，總堿變化范圍為42.29%～50.66%，表明加入炮姜能減少附子有效成分的溶出，從而降低附子辛熱之性，其回陽救逆和補火助陽的作用被抑制，進而使其發揮溫經、散寒除痹的功效；附子配伍炮姜使附子酯型生物堿含量大幅減少，酯型生物堿變化范圍為29.51%～47.54%，表明加入炮姜能降低附子的毒性。

3.3 指紋圖譜

指紋圖譜能夠提供較為全面的信息，可以比較全面、綜合地從宏觀上對復方配伍的物質基礎進行分析。通過附子-炮姜藥對與其單味藥材的指紋圖譜比較可以看出，其物質基礎在配伍前后發生了明顯變化。本試驗采用加權變化率指標對配伍前后附子主要成分進行了總體評價，發現附子與炮姜配伍后，附子成分總體減少為原來的81.00%。從另一個方面也表明，附子與炮姜配伍后，能減少附子成分的溶出，有利于抑制附子辛熱之性，發揮其溫經、散寒除痹的作用，與炮姜共奏溫經止血之功。

3.4 傳統理論

《本草崇原》[10]有如下論述:“《神農本草經》止有生姜、干姜，而無炮姜，后人以干姜炮黑，謂之炮姜。”《金匱要略》治肺痿用甘草干姜湯，其干姜亦炮，是炮姜之用，仲祖其先之矣。姜味本辛，炮后辛味稍減，散烈之性已減弱，具有溫經止血的功效[11]。附子與炮姜配伍使附子總堿、酯型生物堿、雙酯型生物堿均有較大降幅，附子不致太過辛熱、耗氣傷陰，從而發揮其溫經、散寒、止痛的作用，可主治產后血虛身熱，及寒性吐血、衄血、便血之證。

[1]彭成.中藥藥性理論的科學基礎[R].北京:中華中醫藥科技成果論壇專題報告，2004:3.

[2]李克光.金匱要略講義[M].上海:上海科學技術出版社，1991:45.

[3]張谷才.仲景方劑學[M].上海:上海中醫藥大學出版社，2008:33.

[4]胥慶華.中藥藥對大全[M].北京:中國中醫藥出版社，1996:3-89.

[5]陳信義，李峨，侯麗，等.烏頭類生物堿研究進展與應用前景評述[J].中國中醫藥信息雜志，2004，11（10）:922.

[6]葉強.附子配伍大黃調控藥性物質基礎研究[D].成都:成都中醫藥大學，2005.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].2005年版.北京:化學工業出版社，2005:122-123.

[8]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[S].2010年版.北京:中國醫藥科技出版社，2010:177-178.

[9]由鳳鳴，葉俏波，李晨光.附子功效發揮方向的配伍控制分析[J].江西中醫學院學報，2010，22（1）:63.

[10]（清）張志聰.本草崇原[M].北京:中國中醫藥出版社，2008:1139.

[11]（元）危亦林.世醫得效方[M].北京:中國中醫藥出版社，2009:268.