莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠模型紅細胞壓積的影響①

艾厚喜，孫芳玲，王曉峰，李艷菲,3，張麗，陳乃宏，王文

·基礎研究·

莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠模型紅細胞壓積的影響①

艾厚喜1，孫芳玲1，王曉峰2，李艷菲1,3，張麗1，陳乃宏2，王文1

目的 研究莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注(MCAO)大鼠紅細胞壓積(Hct)的影響。方法改良Longa法制備大鼠MCAO模型，造模后分別給予莫諾苷小劑量(30 mg/kg,n=8)、中劑量(90 mg/kg,n=8)、大劑量(270 mg/kg,n=8)和阿司匹林(n=8)連續灌胃7 d，每天1次。腹主動脈采血，全自動血樣測試儀檢測Hct。結果模型組大鼠Hct較假手術組顯著升高(P＜0.001)；莫諾苷小、中、大劑量組和阿司匹林組的Hct均比模型組降低(P＜0.05)。結論莫諾苷能顯著性抑制局灶性腦缺血再灌注引起的Hct升高。

莫諾苷；局灶性腦缺血；紅細胞壓積；大鼠

[本文著錄格式]艾厚喜，孫芳玲，王曉峰，等.莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠模型紅細胞壓積的影響[J].中國康復理論與實踐,2014,20(3):230-232.

缺血性腦卒中是常見的腦血管疾病，具有高致病率、高致殘率和高致死率。近年來，由于人們生活壓力的增加和飲食習慣的改變等，腦卒中發病率呈現逐年上升的趨勢，嚴重影響人們的生活質量。正常的血液流變性是維持臟器和組織血液灌注、代謝功能的重要條件，血流變異常而導致的微循環灌注不足是許多疾病發生的重要原因。血液流變異常與缺血性腦病的密切聯系開始引起人們的注意，血液黏度與組織血流，特別是腦血流量呈負相關，而紅細胞壓積(hematocrit percentage,Hct)又在評判血液黏度及指導臨床用藥方面有重要作用[1]。Lowe等的研究顯示，成人體內血黏度變化有47.6%歸因于Hct[2]。

中藥山茱萸是山茱萸科植物山茱萸(Cornus offcinalis)的干燥成熟果肉，具有補益肝腎、澀精固脫的作用。莫諾苷為本實驗室從山茱萸中提取的環烯醚萜類化合物。前期研究發現，莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠有神經保護作用[3]，且能有效降低模型的血液黏度升高[4]，抑制血小板聚集[5-6]及抗凝血作用[7]。本研究觀察莫諾苷對局灶性腦缺血再灌注大鼠Hct的作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

莫諾苷：首都醫科大學宣武醫院藥物研究室根據自行研制的工藝從山茱萸的干燥成熟果肉中提取的單體，為白色結晶粉末，HPLC檢測純度為98.5%，臨用前用蒸餾水溶解成所需濃度。阿司匹林(ASA)：購自SIGMA公司，臨用時用蒸餾水溶解，以0.1 mol/L NaHCO3調pH至7.0左右。

1.2 實驗動物

健康雄性Sprague-Dawley大鼠，體重(260±10) g，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(軍)2007-004。SPF級常規飼養，室溫(24±1)℃，濕度(55±5)%，手術前12 h禁食不禁水。

1.3 實驗儀器

尼龍線栓，直徑0.26 mm(2634-100)：北京沙東生物技術有限公司。SF-8600全自動血樣測試儀：北京賽科希德公司。Microfuge低溫離心機：美國BECKMAN公司。肝素抗凝管：湖南瀏陽市醫用儀具廠。

1.4 模型制備

參照Longa法[8]制備局灶性腦缺血再灌注大鼠模型并略加改進。大鼠用10%水合氯醛4 ml/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于手術臺上，頸部皮膚用碘伏消毒，正中線剪2 cm左右，鈍性分離右側頸總動脈，微動脈夾暫時夾閉近心端；從頸總動脈分叉處向上分離頸外動脈和頸內動脈，結扎頸外動脈，微動脈夾暫時夾閉頸內動脈，近心端結扎頸總動脈。在距頸總動脈分叉處約2 mm處剪一斜行小動脈切口，插入經多聚左旋賴氨酸處理過的直徑0.26 mm的栓線，深約18 mm時產生阻擋感，說明栓線經頸總動脈分叉處通過頸內動脈入顱進入大腦中動脈(middle cerebral artery, MCA)。記錄栓塞開始時間。栓塞30 min后，將栓線退至頸總動脈切口處。

假手術組大鼠插入栓線深10 mm，其余操作與模型組相同。手術中及再灌注期間死亡大鼠不計入實驗。

大鼠清醒后，進行行為學評分并給藥，自由飲水、進食。

1.5 分組和給藥

動物于術畢清醒后和術后第7天參照Zea Longa法[8]進行神經功能缺損評分：提鼠尾離開地面約30 cm，觀察兩前肢狀況；將大鼠置于地面，觀察行走情況。1分：提鼠尾不能充分伸展對側前肢。2分：提鼠尾對側前肢屈曲。3分：將大鼠置于地面，向對側行走。4分：將大鼠置于地面，向對側轉圈，呈追尾狀。5分：損傷嚴重，對側癱瘓。無神經功能缺損和昏迷的動物剔除，有神經功能的大鼠隨機分為模型組、ASA組(10 mg/kg)、莫諾苷小劑量組(30 mg/kg)、中劑量組(90 mg/kg)、大劑量組(270 mg/kg)，各組大鼠8只。采用灌胃給藥，每天1次，連續給藥7 d。假手術組和模型組相應給予等量蒸餾水。

1.6 Hct測定

取末次給藥后完成神經行為學評分的大鼠，10%水合氯醛400 mg/kg腹腔注射麻醉，腹主動脈采血3 ml，收集入肝素抗凝管內。用SF-8600全自動血樣測試儀檢測Hct值。

1.7 統計學分析

采用SPSS 13.0統計學軟件進行處理。結果用(±s)表示，組間樣本均數比較用單因素方差分析(ANOVA)。顯著性水平α=0.05。

2 結果

模型組大鼠Hct較假手術組顯著升高(P＜0.001)。莫諾苷3個劑量組Hct均比模型組降低(P＜0.05)。ASA組Hct也較模型組顯著降低(P＜0.001)。見表1。

表1 各組大鼠Hct比較(%)

3 討論

缺血性腦血管病(ischemic cerebral vascular disease,ICVD)通常是因為一條或多條腦內動脈被阻塞，進而導致局部或全腦的血流不暢，最終引起腦缺血、甚至發生梗死等一系列病理變化[9]。目前臨床治療缺血性腦卒中確切有效的治療方法就是盡早溶栓[10]，臨床治療藥物中，僅組織纖維蛋白溶酶原激活劑一種藥物被美國FDA批準用于急性腦卒中的治療。開發有效的腦卒中預防、治療藥物具有重大價值。

Hct是指紅細胞在血液中所占的容積比值，是影響血液黏度的重要因素。當紅細胞濃度增加，其表面負電荷相對減少，聚集性增加。血液黏度隨Hct的增加而迅速增高，導致血栓性疾病的發生[11]。Hct＞46%為缺血性腦卒中的危險因素，其水平與梗死灶體積正相關[12]。臨床可通過監測血液Hct的變化，了解腦血栓形成的病理狀態，預測缺血性腦卒中的進展，以及判斷藥物治療的效果。阿司匹林臨床預防和治療ICVD已有確切療效，但有選擇性差、副作用明顯等缺點。中藥活血化瘀方劑在治療腦血管病上有豐富的實踐，紅花、絞股藍、燈盞花素等中藥均有降低血液黏度，改善腦卒中預后的功效[13-14]，且安全性好，不良反應較少。但中藥單體成分通過改善血流變化、降低Hct等治療腦卒中的研究還較少。

本研究顯示，從中藥山茱萸中提取的有效單體化合物莫諾苷能明顯降低局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠Hct，其中莫諾苷中劑量、大劑量組改善血液黏度的作用與阿司匹林的效果相似，為莫諾苷的進一步開發提供重要的實驗依據。

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中國康復醫學會康復治療專業委員會第十一屆年會征文通知

中國康復醫學會第十一屆康復治療學術年會將定于2014年10月22～24日在江西南昌召開，屆時將邀請國內外著名康復專家進行專題講座，并同期舉辦第四屆物理治療論壇、第四屆作業治療論壇、第四屆康復輔助用具論壇、第三屆言語治療論壇。會議期間將進行論文交流、討論及優秀論文評選等學術活動，熱烈歡迎全國康復科、理療科、骨科、神經科等相關學科人員參加，本次會議將授予國家Ⅰ類繼續醫學教育項目學分。

征文范圍：康復醫學基礎與臨床研究；骨科康復；神經康復；兒童康復；傳統醫學與康復研究；康復工程；康復教育與學科建設；康復護理；社區康復等。

投稿要求：提交不超過1000字的摘要。摘要應按照期刊要求撰寫。若參加優秀論文評選，須提交全文。論文應為未公開發表的文章，要求具有科學性、先進性、實用性、創新性，數據真實可靠，文字準確精練。如為基金項目，請在文后注明基金來源及編號。來稿請附個人簡歷(100字內)，注明聯系方式(手機、電子郵箱)。

請通過電子郵件發送論文，不接受紙質稿件，郵件主題為：(征文)論文題目。投稿郵箱：kangfu201410@ 163.com。截稿日期為2014年7月31日。如有疑問，請聯系南昌大學附屬第一醫院康復科：張軍、邵秀芹，郵編：330006。聯系電話：0791-88692591。傳真：0791-88698601。

中國康復醫學會康復治療專業委員會

Effect of Morroniside on Hematocrit Percentage in Rat of Focal Cerebral Ischemia/Reperfusion

AI Hou-xi,SUN Fang-ling,WANG Xiao-feng,et al.Department of Pharmacology,Xuanwu Hospital of Capital Medical University,Beijing 100053,China

ObjectiveTo investigate the effect of morroniside on hematocrit percentage in a rat model of focal cerebral ischemia/reperfusion.MethodsAfter the modified model induced with occlusion of middle cerebral artery(MCAO)with suture embolus,morroniside was administered intragastrically at the dose of 30 mg/kg(n=8),90 mg/kg(n=8),and 270 mg/kg(n=8)once a day for 7 d.Acetyl salicylic acid (ASA)was used as positive drug(n=8).Hematocrit percentage was measured with automatic blood tester.ResultsCompared with the sham group,hematocrit percentage of the model group significantly increased(P＜0.001),but increased less in those treated with morroniside and ASA(P＜0.05).ConclusionMorroniside could inhibit the increase of hematocrit percentage in MCAO rats.

morroniside;focal cerebral ischemia;hematocrit percentage;rats

R743.3

A

1006-9771(2014)03-0230-03

2013-06-28

2013-07-18)

1.“重大新藥創制”科技重大專項 (No.2009ZX09102201-106)； 2.國家自然科學基金項目 (No.30973893;No.81173575; No.30973513)；3.北京市自然科學基金項目(No.7102077)；4.北京市教委科技創新平臺項目(No.111219)；5.2011年北京市衛生系統高層次衛生技術人才培養計劃項目；6.第52批中國博士后基金項目；7.北京市博士后科研活動經費項目。

1.首都醫科大學宣武醫院藥物研究室，教育部神經變性病學重點實驗室，北京市老年病醫療研究中心，北京市100053；2.中國醫學科學院藥物研究所，北京市100050；3.河北北方學院，河北張家口市075000。作者簡介：艾厚喜(1956-)，男，北京市人，主管技師，主要研究方向：中藥藥理。通訊作者：王文。

10.3969/j.issn.1006-9771.2014.03.008