肝細胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及臨床意義*

李 蕾，薛如意，沈錫中

·肝癌·

肝細胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1和β-catenin水平及臨床意義*

李 蕾，薛如意，沈錫中

目的探討肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）和慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）患者血清分泌型卷曲相關蛋白-1（secreted frizzled-related proteins，sFRP-1）和β-catenin水平及臨床意義。方法采用ELISA法檢測36例HCC、36例CHB和36例正常人血清sFRP-1和β-catenin水平，應用Spearman相關分析，分析血清sFRP-1和β-catenin水平與年齡、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、白蛋白和總膽紅素等的相關性。結果HCC和CHB患者血清sFRP-1水平分別為（1136.28±332.43）pg/ml和（1194.53±156.84）pg/ml，均顯著低于正常人[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；HCC患者血清β-catenin水平為（527.2±20.9）pg/ml，顯著高于正常人和CHB患者[分別為（369.8±21.5）pg/ml和（374.0±8.3）pg/ml，P＜0.05]；HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-catenin水平與年齡、ALT、白蛋白、總膽紅素無顯著相關性。結論肝細胞癌和慢性乙型肝炎患者血清sFRP-1降低，而肝細胞癌患者血清β-catenin水平升高。

肝細胞癌；慢性乙型肝炎；分泌型卷曲相關蛋白-1；β-catenin

Wnt/β-catenin信號通路是細胞發育和生長調節的一個關鍵途徑，β-catenin是該通路的效應分子，該通路異常激活可以導致腫瘤和纖維增生等疾病的發生[1]。已有研究證實，經典與非經典的Wnt信號途徑均參與肝纖維化的形成[2，3]，而在20%～90%HCC患者顯示經典的Wnt/β-Catenin信號通路被持續激活[4]。Wnt信號通路抑制因子分泌型卷曲相關蛋白-1（secreted frizzled-related protein 1，sFRP-1）作為Wnt信號通路的一個負調節蛋白，在腫瘤形成及調控細胞調亡等方面亦發揮重要作用[5]。目前sFRP-1/β-catenin通路在慢性乙型肝炎及肝細胞癌發病中的作用機制仍不清楚。本研究檢測了CHB和HCC患者血清sFRP-1和β-catenin水平，并分析其與CHB和HCC常見實驗室指標的關系，以探討其判斷肝臟疾病進展的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇自2007年1月～2010年12月在我院門診及住院的HCC患者36例，均為男性，年齡30～60歲，平均年齡（43±14）歲，經臨床、影像學檢查及術后病理學檢查證實。CHB患者36例[（均為男性，年齡30～60歲，平均年齡（40±15）歲]。CHB診斷符合慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）[6]標準。以HBsAg陰性、肝腎功能正常的36例男性健康體檢者為對照組[年齡30～60歲，平均年齡（36±12）歲]。被研究者簽署知情同意書，本研究經中山醫院倫理委員會備案。

1.2 血清sFRP-1和β-catenin水平檢測采用ELISA法（上海武昊經貿有限公司提供試劑，美國USCNK公司生產）。以Bio-rad比色儀在450nm處測吸光度值，參照標準曲線計算其濃度值。

2 結果

2.1 肝功能情況3組人群主要肝功能指標見表1。

表1 3組人群主要肝功能指標（±s）比較

表1 3組人群主要肝功能指標（±s）比較

與另兩組比，①P＜0.01

2.2 肝病患者血清sFRP-1及β-catenin的水平根據標準曲線，通過對OD值的換算得出各組別sFRP-1、β-catenin的表達水平。HCC組和CHB組的血清sFRP-1顯著低于正常組（P＜0.05），而CHB組和HCC組血清sFRP-1水平無顯著差異；HCC組中β-catenin水平顯著高于正常組及CHB組（表2）。

表2 3組人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比較

表2 3組人群血清sFRP-1和β-catenin水平（pg/mL，±s）比較

與正常人比，①P＜0.05；與CHB比，②P＜0.05

2.3 血清sFRP-1和β-catenin水平與其他指標的相關性分析在CHB和HCC患者，未發現血清sFRP-1或β-catenin水平與年齡、ALT、白蛋白、總膽紅素具有相關性（資料未列出）。

3 討論

近年來，研究發現Wnt信號通路在細胞轉運、細胞凋亡及生物發育等生命過程中發揮重要作用[7，8]，其異常活化與多種人類疾病及腫瘤[9，10]的發生密切相關，已經成為腫瘤發病機制研究的熱點。同時，在肝纖維化等慢性肝病及肝癌發病中也發現Wnt信號異常持續激活，提示該途徑在肝臟病理生理過程中有著重要的作用[11]。

越來越多的研究表明，分泌型Wnt受體拮抗劑sFRPs家族成員在Wnt信號傳導中發揮重要作用，其可以在細胞外阻斷異常的Wnt信號通路，從而抑制腫瘤細胞的增殖和誘導腫瘤細胞凋亡[12]。sFRPS通過競爭性結合Wnt配體，阻止Wnt信號傳導入細胞，是Wnt信號通路的負調控因子，在肝臟腫瘤的發生發展中也起到了重要的作用。Shih YL等[13]發現在原發性肝癌組織SFRP-1表達廣泛下調，其啟動子在肝癌組織中甲基化程度明顯高于肝硬化、肝炎及正常肝組織，認為sFRP-1可能通過經典wnt信號途徑抑制肝腫瘤細胞的生長。

β-catenin是連環蛋白家族中的一員，具有介導細胞黏附及信號轉導的雙重功能。β-catenin是Wnt通路的效應分子，其可通過核膜進入到細胞核內，與轉錄因子Tcf/Lef結合，激活Wnt途徑靶基因，如c-myc和cyclin D1，調節細胞的增殖，參與腫瘤的形成[14]。Sangkhathat等[15]通過在肝癌細胞內轉染siRNAs引起細胞內β-catenin表達下降，從而達到抑制肝癌細胞增殖的作用。

肝纖維化是指肝臟內彌漫性的、過量的細胞外基質沉積，是許多慢性肝病的共同病理學過程。肝星狀細胞（hepatic stellate cell，HSC）激活是肝纖維化發生的中心環節。近年來一些研究開始關注經典的Wnt信號通路在HSC激活過程中的作用。Myung等[2]研究發現sFRP可抑制HSC激活并抑制Collagen α1和α-SMA生成。葛文松等[16]研究發現，阻斷Wnt/β-Catenin信號通路可抑制HSC增殖，促進其凋亡，減少膠原分泌。

本研究采用ELISA法檢測了HCC和CHB患者血清sFRP-1和β-Catenin水平的變化，發現HCC患者血清sFRP-1顯著低于正常人，與既往研究相符，提示sFRP-1在肝腫瘤發生中發揮抑癌作用，并可能在肝腫瘤組織中發生表觀遺傳學改變而表達降低或缺失，其具體分子機制有待進一步研究。CHB患者血清sFRP-1亦顯著低于正常人，其是否參與了HSC激活及凋亡等機制尚待進一步研究。本研究亦發現HCC組織存在β-catenin高表達，提示β-catenin的異常積聚可能在肝癌發生中起重要作用。隨著Wnt信號通路拮抗劑sFRP1在肝癌組織中表達的逐漸減弱，β-catenin的異常表達增高，表明sFRP1的低表達可能是導致β-catenin異常高表達的因素之一。

Wnt傳導通路與肝癌的發生、發展密切相關。信號抑制蛋白sFRP1的表達減弱可能是導致β-catenin在細胞質和細胞核內積聚以及Wnt信號活化的原因之一，其潛在的臨床價值值得深入研究。關于對經典Wnt信號通路在肝臟病發病中的作用研究，尚有許多基礎機制需要闡明，有許多問題仍需要探討。

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[12]Kongkham PN，Northcott PA，Croul SE，et al.The SFRP family of WNT inhibitors function as novel tumor suppressor genes epigenetically silenced in medulloblastoma.Oncogene，2010，29：3017-3024.

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[15]Sangkhathat S，Kusafuka T，Miao JY，et al.In vitro RNA interference against β-catenin inhibits the proliferation of pediatric hepatic tumors.Int J Oncol，2006，28（3）：715-722.

[16]葛文松，吳建新，范建高，等.siRNA沉默β-Catenin對肝星狀細胞增殖和凋亡的影響.實用肝臟病雜志，2011，14（2）：91-94.

（收稿：2013-09-10）

（校對：陳從新）

Serum levels and clinical significance of sFRP-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma and chronic hepatitis B

Li Lei，Xue Ruyi，Shen Xizhong.
Department of Gastroenterology，Zhongshan Hospital，Fudan University，Shanghai 200032，China

ObjectiveTo evaluate serum levels and clinical significance of secreted frizzled-related proteins（sFRP）-1 and β-catenin in patients with hepatocellular carcinoma（HCC）and chronic hepatitis B（CHB）.Methods Serum levels of sFRP-1 and β-catenin in 36 patients with HCC，36 patients with CHB and 36 healthy persons were detected by ELISA；Spearman correlation analysis was used to estimate the relevance between sFRP-1，β-catenin and age，ALT，albumin，total bilirubin.ResultsThe serum levels of sFRP-1 in patients with HCC and CHB were（1136.28±332.43）pg/ml and（1194.53±156.84）pg/ml，respectively，both significantly higher than that in healthy persons[（1477.26±563.12）pg/ml，P＜0.05]；The serum level of β-catenin in patients with HCC was（527.2± 20.9）pg/ml，significantly higher than those in patients with CHB（374.0±8.3）pg/ml and normal persons（369.8± 21.5）pg/ml，P＜0.05）；No correlation was found between serum sFRP-1 or β-catenin levels with age，ALT，albumin，total bilirubin either in CHB or in HCC group.ConclusionThe serum sFRP-1 levels in patients with HCC and CHB decrease，while the serum β-catenin levels in patients with HCC increase.

Hepatocellular carcinoma；Hepatitis B；Secreted frizzled-related proteins-1；β-catenin

10.3969/j.issn.1672-5069.2014.01.019

國家臨床重點專科建設項目經費資助

200032上海市復旦大學附屬中山醫院消化科

李蕾，女，42歲，醫學博士，主治醫師。主要從事肝纖維化及消化系統腫瘤的防治研究。E-mail：li.lei@zs-hospital.sh.cn

沈錫中，E-mail：shen.xizhong@zs-hospital.sh.cn