豬瘟疫苗田間免疫效果監測

何長生，朱良強，占松鶴，王 軍，沈 艷，劉 華，周迎春，陳 靜

(安徽省動物疫病預防與控制中心，合肥230091)

豬瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起豬的一種高熱稽留、出血和高病死率為特征的高度接觸性傳染病，嚴重危害全球養豬業，造成巨大的經濟損失［1－2］。世界動物衛生組織(OIE)將其列為必須報告的動物疫病［3］，我國將其列為一類動物傳染病。目前，豬瘟在50多個國家和地區都有不同程度的發生和流行［4－6］。

至今，對該病尚無有效的治療藥物，疫苗免疫是唯一有效預防該病的手段［7］。為有效防控豬瘟，我國將其列為強制免疫病種。生產中使用的豬瘟疫苗為均弱毒活疫苗，主要有兩種:一種是細胞苗，另一種為脾淋組織苗。目前，這兩種疫苗均在安徽省使用，且由不少于20個廠家提供疫苗。為準確掌握豬瘟疫苗免疫效果，給豬瘟防控工作提供依據和參考，2010年下半年至2012年上半年，對投放安徽省的豬瘟疫苗田間免疫效果進行了監測，現報道如下:

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清來源 2010年下半年至2012年上半年全國重大動物疫病集中強制免疫期間，委托安徽省縣級動物疫控機構，采集免疫豬瘟細胞苗或豬瘟脾淋組織苗后1個月左右的豬血清，每個豬場按5%比例隨機采集，共采集了454個豬場的7439份血清。其中，種豬血清1375份，商品豬血清6064份。

1.1.2 檢測試劑 豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒，購自美國IDEXX公司，批號有:43200－V731、43220 －X561、43220 －X681、43220 －2431、43220 －2551、43220 －2571、43220 －2821。

1.1.3 疫苗 豬瘟細胞苗和豬瘟脾淋組織苗，主要由南京、成都、廣西等20家國內豬瘟疫苗廠家生產，田間使用按照產品說明書進行。

1.2 方法 采用ELISA檢測試劑盒對不同廠家生產的豬瘟疫苗對規模場和散養戶飼養的種豬及商品豬的免疫效果進行了監測和比較。

1.2.1 檢測方法 按照豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測試劑盒說明書進行。

1.2.2 判定標準 樣品的陰陽性按照試劑盒說明書進行。樣品阻斷率=(陰性對照平均OD450值－樣品OD450值)/陰性對照平均OD450值×100%。阻斷率大于或等于40%，為陽性樣品;阻斷率小于或等于30%，為陰性樣品;樣品阻斷率在30% ～40%之間，為可疑樣品。

1.2.3 統計方法 采用卡方檢驗(χ2)。

2 結果

2.1 種豬和商品豬豬瘟免疫效果 共檢測了1375份種豬血清、6064份商品豬血清，結果見表1。

表1 不同類型豬群使用豬瘟疫苗免疫效果

可以看出:(1)種豬和商品豬的豬瘟免疫抗體合格率分別為80.07%和74.11%，達到了農業部免疫抗體合格率不低于70%的要求，兩者之間差異不顯著(P＞0.05);(2)種豬的脾淋組織苗和細胞苗的免疫抗體合格率分別為77.39%和92.59%，差異不顯著(P＞0.05);(3)商品豬的脾淋組織苗和細胞苗的免疫抗體合格率分別為76.05%和66.87%，差異極其顯著(P＜0.01)。

由此可見，種豬和商品豬的豬瘟免疫效果總體良好，種豬的脾淋組織苗和細胞苗免疫效果相當，商品豬的脾淋組織苗免疫效果顯著好于細胞苗。

2.2 不同飼養方式豬瘟免疫效果 共檢測了6371份規模場豬血清、1068份散養戶豬血清，結果見表2。

表2 不同飼養方式的豬群使用豬瘟疫苗免疫效果

可以看出:(1)規模場和散養戶豬瘟免疫抗體合格率分別為75.37%和74.25%，達到了農業部免疫抗體合格率不低于70%的要求，兩者之間差異不顯著(P＞0.05);(2)規模場脾淋組織苗和細胞苗的免疫抗體合格分別為76.93%和69.82%，差異顯著(P＜0.05);(2)散養戶脾淋組織苗和細胞苗的免疫抗體合格率分別為73.00%和83.21%，差異不顯著(P ＞0.05)。

由此可見，規模場和散養戶豬瘟免疫效果均較好，規模場的脾淋組織苗免疫效果明顯好于細胞苗，散養戶的脾淋組織苗和細胞苗免疫效果相當。

2.3 不同年份監測的豬瘟免疫效果 共檢測了5913份免疫脾淋組織苗豬血清、1526份免疫細胞苗血清，結果見表3。

表3 不同年份監測的豬瘟免疫效果

可以看出:(1)脾淋組織苗和細胞苗總體抗體合格率分別為76.31%和70.97%，達到了農業部免疫抗體合格率不低于70%的要求，兩者之間差異不顯著(P＞0.05)。2010年和2012年，脾淋組織苗和細胞苗差異不顯著(P＞0.05);2011年，脾淋組織苗和細胞苗差異極其顯著(P＜0.01)。(2)脾淋組織苗總體免疫合格率為76.31%。2010、2011、2012年的抗體合格率分別為79.09%、74.70%和79.45%，差異不顯著(P ＞0.05)。(3)細胞苗總體抗體合格率為70.97%。2010、2011、2012 年的抗體合格率分別為 80.60%、39.47%和 75.28%，2010與2012差異不顯著(P＞0.05)，2011年與其余兩年相比，差異極其顯著(P＜0.01)。

結果表明，脾淋組織苗和細胞苗免疫效果均較好，但不同年份，脾淋組織苗免疫效果較穩定，細胞苗免疫效果不太穩定。

2.4 不同廠家疫苗豬瘟免疫效果 選取了疫苗用量在我省較大的南京、成都、廣西等地 A、B、C、D、E、F、G等6個廠的疫苗進行免疫效果監測，結果見表4。

可以看出:(1)A廠、E廠、F廠疫苗免疫效果最好，差異不明顯(P＞0.05)，與 C廠、G廠相比，差異極其顯著(P＜0.01)，與B廠、D廠相比，差異顯著(P＜0.05);(2)G廠疫苗免疫效果較差，與B廠、D廠相比，差異顯著(P＜0.05)，與C廠相比，差異不顯著(P＞0.05);(3)B廠、C、廠、D廠疫苗免疫效果相當，差異不顯著(P＞0.05)。

表4 不同廠家疫苗豬瘟疫苗免疫效果

結果表明，不同廠家疫苗質量存在差異，六個廠中，G廠疫苗免疫效果較差，其免疫抗體合格率僅為63.56%，達不到不低于70%的要求。

3 討論

3.1 我省豬瘟疫苗免疫效果總體良好。從監測結果來看，無論是種豬還是商品豬，無論是規模場還是散養戶，無論是種豬場還是商品豬場，豬瘟疫苗的免疫抗體合格率均超過了70%。說明近年來我省大力推行豬瘟疫苗強制免費免疫，提高豬群群體免疫力，已取得了一定的成效。

3.2 從本次監測結果來看，不同廠家疫苗的免疫效果有差異，少數廠家疫苗免疫效果達不到農業部要求。這可能與不同廠家疫苗毒株來源、生產工藝、疫苗抗原含量等因素有關。因此，相關部門要加強疫苗質量監管，從根本上杜絕劣、次、假疫苗流入市場。

3.3 從本次監測結果來看，豬瘟脾淋組織苗免疫效果要優于豬瘟細胞苗，這與曹世禎等［8］試驗結果一致，可能與脾淋組織液中的確含有某些免疫增強因子，能夠明顯增強活疫苗的免疫作用有關［9］。但是，不同年份，豬瘟細胞苗的免疫效果波動性較大。經過分析，2011年之前(包括2011年)我省豬瘟細胞疫苗用量很小，2010年使用的疫苗主要是F廠的，2011年主要是G廠的，而F廠疫苗免疫效果較好，G廠疫苗的免疫效果較差，從而導致2011年豬瘟細胞疫苗免疫抗體合格率只有39.47%。可見加強疫苗質量的監管顯得尤為重要。

3.4 部分豬場豬瘟免疫不到位。本次監測，雖然大多數豬場豬瘟疫苗免疫效果較好，但是仍有少部分豬場豬瘟免疫抗體水平達不到保護水平。推測其原因可能有以下幾種:一是與豬群中廣泛存在豬瘟病毒的持續感染，多病原感染、免疫抑制、母源抗體參差不齊等因素的存在，使常規免疫劑量和完全統一的免疫預防接種，很難達到有效控制豬瘟的目的;二是與疫苗的質量有關，有學者指出，當前我國豬瘟疫苗的生產主要存在兩大問題，即疫苗中病毒含量低和疫苗污染問題［10］。同時，從本次監測結果來看，不同疫苗生產廠家，疫苗免疫效果參差不齊，而且細胞苗免疫效果不穩定;三是可能與疫苗接種技術和豬場管理有關，部分養殖場免疫程序不合理，農村散養戶補免不及時，疫苗使用和保管不當、管理粗放等，往往導致抗體水平較低。因此，規模豬場應定期或不定期開展豬瘟免疫抗體水平監測，及時掌握豬群免疫水平，以利于豬瘟的防控。

［1］Jamin A，Gorin S，Cariolet R，et al.Classical swine fever virus induces activation of plasmacytoid and conventional dendritic cells in tonsil，blood and spleen of infected pigs［J］.Vet Res，2008，39(1):1－17.

［2］Ruggli N，Summerfield A，Fiebach A R，et al.Classical swine fever virus can remain virulent after elimination of the interferon regulatory factor 3 － degrading function of Npro［J］.J Virol，2009，83:817－829.

［3］斯特勞B E.豬病學［M］.9版.北京:中國農業大學出版社，2008.

［4］Pereda A J，Greiser－ Wilke I，Schmitt B，et al.Phylogenetic analysisof classical swine fever virus(CSFV)field isolates from outbreak in South an Central America［J］.Virus Res，2005，110:111－118.

［5］Wu C M，Hsuan S L，Chen Z W，et al.Expression an immunologic studies of classical swine fever virus glycoprotein E2 in the bi－ cistronic baculovirus/larvae expression system［J］.Biosci Biotechnol Biochem，2010，74(7):1343－1349.

［6］楊小燕，劉建奎，魏春華，等.豬瘟病毒福建野毒分離株FJ－1E2基因序列分析［J］.動物醫學進展，2013，34(8):46－50.

［7］蔡寶祥.家畜傳染病學［M］.4版.北京:中國農業出版社，2001.

［8］曹世禎，孟曉琴，孫曉軍，等.不同廠家生產的豬瘟疫苗免疫效果跟蹤對比試驗報告［J］.當代畜牧，2012，(8):55－57.

［9］蔣冬福，施萬球，韋家槐，等.兔脾淋組織對豬瘟疫苗的免疫增強試驗［J］.中國獸藥雜志，2001，37(7):10－11.

［10］萬遂如.關于豬瘟的凈化問題［J］.養豬，2013，(4):97－99.