蟲草菌粉對雛雞細胞免疫功能的影響

胡雅婷　潘美慧　李進進　陳如圣　陶明江　張祥華　鄔向東

摘 要：蟲草菌粉是由新鮮冬蟲夏草中分離蝙蝠蛾擬青霉經液體深層發酵所得，具有很好的免疫增強作用。為探討蟲草菌粉對雞免疫力的影響，在蟲草菌粉添加于雞飼料中連續飼喂30 d，通過檢測活性E玫瑰花環試驗和淋巴細胞轉化試驗了解蟲草菌粉對雛雞細胞免疫的影響。結果發現通過飼喂不同劑量的蟲草菌粉后，E玫瑰花環率無顯著差異，但淋巴細胞轉化率有顯著的提高，說明蟲草菌粉能夠顯著提高細胞的免疫水平，增強雛雞免疫力。

關鍵詞：雛雞；蟲草菌粉；細胞免疫

中圖分類號：S816 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2014）06-0052-02

蟲草菌粉為蝙蝠蛾擬青霉Cs-4菌粉，或者又稱為發酵蟲草菌粉，俗稱蟲草粉，蟲草菌粉，蟲草提取物，發酵蟲草粉等。蝙蝠蛾擬青霉菌粉是從新鮮冬蟲夏草菌中分離所得的蟲草菌——蝙蝠蛾擬青霉經液體深層發酵培養、過濾、干燥、粉碎制成的產品。蝙蝠蛾擬青霉菌種是江西國藥有限責任公司與中國醫學科學院藥物研究所衛生部天然藥物生物合成重點實驗室經過10年時間從青海產天然冬蟲夏草中分離純化而得，該菌種生產的發酵蟲草菌粉自1989年獲得衛生部批準為一類原料藥新藥（文號：[89]衛藥準字Z-17號），在十多年的臨床應用當中，其良好的臨床效果以及可靠的安全性，深獲國內外醫藥專家學者的認可。并于2001年3月23日被國家衛生部發文（衛法監發[2001]84號文），確認為可用于保健食品的真菌名單。

蟲草菌粉具有養肺陰，補腎陽的功效，為平補陰陽之品，用于肺癆咳血，陽痿遺精等癥。從現代免疫角度來說，其具有明顯的提高機體免疫力的功能[1-4]。為了解蟲草菌粉對家禽免疫功能的影響，筆者將蟲草菌粉應用于雛雞飼養，通過檢測活性E玫瑰花環形成率、淋巴細胞轉化率來反映雛雞細胞免疫功能變化，為蟲草菌粉應用于畜禽養殖的可能提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 全價雛雞雞飼料

購自南昌正大集團。

1.1.2 雛雞

購自江西省農業科學院畜牧獸醫研究所，10日齡余干烏雞。

1.1.3 蟲草菌粉

由江西國藥集團提供。

1.1.4 主要試劑

雞外周血淋巴細胞分離液、改良型RPMI-1640培養液為賽默飛世爾生物化學制品有限公司產品；Hanks液、植物血凝素（PHA）、胎牛血清等為索萊寶公司產品。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組

將240羽10日齡健康雛雞隨機分為四組，每組60羽，從第11日齡開始試驗，四個組均使用南昌正大全價雛雞飼料為基礎日糧（具體見表1）。

1.2.2 飼喂方法及處理

飼喂至第10、20和30天每組隨機抽取20羽，分別采血用肝素抗凝，一部分全血供活性E花環試驗、淋巴細胞轉化試驗用，另一部提取血清，供細胞因子檢測用。

1.2.3 試驗方法

1.2.3.1 E玫瑰花環試驗，參照文獻方法[5]進行，略有修改。

淋巴細胞的分離：新鮮抗凝血用Hanks液倍比稀釋，用淋巴細胞分離液以2 500 r/min離心 10 min/次的密度梯度離心法分離淋巴細胞，計數后，用Hanks液配成107個/mL淋巴細胞懸液備用。

1 %SRBC懸液的制備：無菌采取綿羊抗凝血，2 500 r/min離心10 min/次，棄上清和白細胞，加Hanks液稀釋后再離心，重復上述操作直到除凈白細胞。用Hanks液配成1 %SRBC懸液備用，細胞濃度約為8×107個/mL。

活性E玫瑰花環試驗：取上述淋巴細胞懸液 100 μL，1 %SRBC 100 μL，胎牛血清50 μL混勻，37 ℃水浴5 min，以500 r/min離心5 min，棄50 μL上清，再加入0.8 %戍二醛1滴，輕輕搖勻，固定數分鐘。取一滴于事先鋪有Hanks液的玻片上，自然干燥，吉姆薩瑞氏染色5 min，油鏡觀察200個淋巴細胞中陽性花環數，計算花環形成率。

1.2.3.2 淋巴細胞轉化試驗 采用形態學檢查法。

取2.2 mL RPMI-1640培養液于細胞培養瓶，同時加入100 μg/mL PHA 0.2 mL，胎牛血清0.6 mL，青霉素、鏈稱素各100 u或100 μg/mL；再加新鮮抗凝血0.2～0.5 mL。將上述細胞培養瓶置于CO2培養箱（37 ℃、5 %CO2、飽和濕度）每天旋轉搖勻2次。培養3 d后，各取一滴進行美蘭染色，油鏡觀察200個淋巴細胞中轉化的細胞數，計算轉化率。

1.2.4 結果統計分析

采用SPSS軟件進行數據處理，單因素方差分析比較兩組間差異。所有數值均以“平均值±標準差”表示。

2 結果

2.1 活性E玫瑰花環試驗結果如表2、圖1

2.2 淋巴細胞轉化試驗結果，見表3、圖2

3 小結與討論

3.1 本次試驗結果表明

雛雞飼喂一定劑量蟲草菌粉后，各組間活性E花環率差異不顯著（P>0.05），僅在飼喂20 d時，中劑量組、高劑量組與空白對照組玫瑰花環率差異顯著（P<0.05）。這與小鼠中相關報道不太相同[6]，說明蟲草菌粉對不同動物的影響不盡相同。

3.2 本試驗證實

雛雞連續飼喂蟲草菌粉10 d時，低劑量組與空白對照組淋巴細胞轉化率差異不顯著（P>0.05），中劑量組、高劑量組與空白對照組淋巴細胞轉化率差異極顯著（P<0.01）。當飼喂20 d時，低劑量組、中劑量組、高劑量組與空白對照組淋巴細胞轉化率差異皆極顯著（P<0.01）。30 d時，低劑量組與空白對照組淋巴細胞轉化率差異顯著（P<0.05），中劑量組、高劑量組與空白對照組淋巴細胞轉化率差異極顯著（P<0.01）。說明蟲草菌粉能夠顯著提高淋巴細胞轉化率，增強細胞的免疫水平，且中高劑量蟲草菌粉比低劑量蟲草菌粉作用更強，這與小鼠中的相關報道相同[7]。

3.2 蟲草菌粉應用前景廣闊

蟲草菌粉不僅可以人類保健中應用，在畜禽養殖中亦可發揮重要作用[8-9]。而且蟲草菌粉是蝙蝠蛾擬青霉經液體深層發酵培養、過濾、干燥、粉碎制成的產品，可常溫保存2年不失效，沒有抗生素的耐藥問題，也沒有飼料添加劑的藥物殘留等問題。以蟲草菌粉的獨特優勢，如作為免疫增效劑推廣應用于畜禽生產，則前景 廣闊。□□

參考文獻：（9篇，略）