大腸桿菌的分離與藥敏鑒定

王壯志　宋艷東　師曉杰

中圖分類號：S852.65 文獻標識碼：A 文章編號：1001-0769（2014）06-0060-02

摘 要：從20多個養雞場的發病雞中分離出可疑菌株，經常規方法培養、純化、鏡檢及生理生化鑒定，分離鑒定出 18 株雞致病性大腸桿菌（ED1、ED2、ED3、ED4、ED5、SD1、SD2、SD3、SD4、WD1、WD2、WD3、WD4、ND1、ND2、ND3、ND4、ND5），有 12 株分離株被鑒定出血清型，血清型主要有 O78、O35、O36、O1、O2、O5、O18。其中 O78 共有 4 株，占 33.3 %，O35 共有 3 株，占 25 %，藥敏試驗結果表明，分離的大腸桿菌對氟苯尼考，丁胺卡那霉素，新霉素，慶大霉素敏感，對環丙沙星，強力霉素，諾氟沙星中度敏感，而對紅霉素，青霉素，鏈霉素產生了耐藥性。

關鍵詞：雞大腸桿菌病；血清型；分離；鑒定；藥敏試驗

1 前言

大腸桿菌病是由大腸埃希氏菌（Escherchia Coli，E. Coli）的某些血清型所引起的一類傳染病的總稱。但它也是一個非常重要的胚胎病[1]。正常的人類和動物的腸道內寄居絕大多數菌。然而，一些大腸桿菌在漫長的進化過程中，細菌會侵入腸外組織，器官或血液毒性，可引起人類和動物細菌性病。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 病料來源

病料來源于山西地區各養殖場及養殖戶送檢的病、死雞，臨床剖檢有典型心包炎、肝周炎、氣囊炎或卵黃性腹膜炎，疑似為大腸桿菌病。

2.2 方法

2.2.1 大腸桿菌的分離與培養

無菌取病料接種于普通營養瓊脂培養基，37 ℃恒溫培養24 h后觀察菌落的形態。取中等大小、圓形隆起、光滑濕潤、邊緣整齊的菌落，直接劃線接種于麥康凱瓊脂平板、依紅美蘭瓊脂平板和血瓊脂平板，37 ℃培養24 h。置4 ℃冰箱環境保存備用。

2.2.2 生化試驗

選取在伊紅美藍瓊脂上生長出的帶金屬光澤的黑色菌落，選取在麥康凱瓊脂上長出的磚紅色菌落進行生化試驗。作糖發酵試驗、吲哚試驗、M.R試驗、構椽酸鹽利用試驗、V-P試驗、三糖鐵試驗，在37 ℃培養24～48 h之后觀察變化。

2.2.3 藥敏試驗

用藥敏片進行實驗操作：用酒精燈火焰把接種環滅菌，然后接種環挑取一定量的細菌培養物，將細菌涂布到平皿培養基上，涂布的時候用劃線的方式[6]。

判定標準見表1。

3 結果與分析

3.1大腸桿菌的分離

在無菌條件下采取病料，接種到培養基，37 ℃培養 24 h 后，普通肉湯呈均勻混濁，試管底部有淡白色粘稠沉淀，輕輕搖晃呈云霧狀散開，并有臭糞味。在營養瓊脂平板上，為圓形微凸起，表面中等大小，光滑濕潤，淺灰色半透明菌落，在血液瓊脂上出現菌落邊緣整齊，并有隆起的灰白色，菌落較大，多數不溶血。在麥康凱瓊脂平板上形成菌落中等大小表面光滑濕潤呈現粉紅色。在伊紅美藍瓊脂平板上形成菌落帶有金屬光澤呈現紫黑色。

3.2.1 染色鏡檢結果

病死雞心、肝組織及培養物涂片染色鏡檢可見大多數分散排列，偶爾有 2～3個連在一起，兩端鈍圓，兩端濃染的革蘭氏陰性短桿菌。

3.2.2 生化試驗結果

分離到的 18 株菌，各菌均對大多數糖類產酸產氣，如葡萄糖、甘露糖、緩慢發酵蔗糖果糖、乳糖、麥芽糖、，MR 試驗陽性，三糖鐵底層產酸，V-P 試驗陰性，尿素酶試驗陰性產生靛基質（表2）。

3.2.4 藥敏試驗結果（抑菌圈直徑平均值，單位：mm）

由表 3 可以看出：分離的大腸桿菌對氟苯尼考、丁胺卡那霉素、新霉素、慶大霉素敏感，對環丙沙星、強力霉素、諾氟沙星中度敏感，而對紅霉素、青霉素鏈霉素產生了耐藥。

5 結論

藥敏試驗結果表明，分離的大腸桿菌對氟苯尼考，丁胺卡那霉素，新霉素，慶大霉素敏感，對環丙沙星，強力霉素，諾氟沙星中度敏感，而對紅霉素，青霉素，鏈霉素產生了耐藥。

參考文獻：（6篇，略）

□□