丙種球蛋白對(duì)感染柯薩奇B3病毒小鼠 心肌的保護(hù)及心肌炎的治療作用

付西蒙

【中圖分類號(hào)】R542.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1672-8602(2014)04-0023-01

病毒性心肌炎發(fā)病過程免疫反應(yīng)起了重要作用,近年國外在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床上將人血靜脈丙種球蛋白(IVIG) 用于該疾病的防治, 取得了較好的效果。我們探討了不同劑量的國產(chǎn)IVIG對(duì)小鼠感染柯薩 奇B3病毒(CVB3)后心肌的保護(hù)作用及治療效果。

1材料及方法

實(shí)驗(yàn)選用156只雄性、4～5周齡、體重13～15 g的Balb/ c小鼠,隨機(jī)分為IV I G保護(hù)組80只及治療組76只。每只小鼠均腹腔注射含5×105TCID50的CVB30. 1 ml。IV I G保護(hù)組分別按IV I G用量,分為200 mg?kg-1?d-1組、500 mg?kg-1?d-1組、1g?kg-1?d-1組及對(duì)照組4個(gè)組每組各20只。CVB3 接種半小時(shí)后分別腹腔注射上述劑量的IV I G(成都生物制品所提供) ,對(duì)照組注射相應(yīng)劑量的5 %葡萄糖,各7天。治療組則將接種CVB3 后存活到1周的60只小鼠分為劑量不同的3個(gè)用藥組及對(duì)照組各15只,按上述劑量及方法治療7天。兩組動(dòng)物均觀察14天,記錄發(fā)病及死亡情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死存活動(dòng)物,測(cè)體重、心臟重及心臟重/體重,取心臟做病理組織學(xué)檢查,并用計(jì)算機(jī)圖像分析對(duì)心肌病變定量評(píng)價(jià)。生存率分析用Log2rank 檢驗(yàn),體重、心臟重/體重用單因素方差分析,圖像分析結(jié)果用t 檢驗(yàn)。

2結(jié)果

(1) IV I G保護(hù)組中500 mg及1g組無發(fā)病癥狀,生存率100 %(20/ 20) ,鏡檢亦未見心肌炎病變發(fā)生; 200mg組少數(shù)動(dòng)物出現(xiàn)發(fā)病癥狀,死亡1只,生存率95 % ,鏡檢有輕微心肌炎病變發(fā)生。對(duì)照組死亡7只,生存率為65 % ,心肌炎癥呈彌漫性分布。3個(gè)劑量組生存率與對(duì)照相比差異有顯著意義(x2=8. 64 ,P<0. 05) ,但3個(gè)劑量組之間卻無明顯差異(x2= 4. 18 ,P> 0. 05) 。3個(gè)組小鼠體重增加,心臟重/體重比值小于對(duì)照組( F=21. 44 ,P< 0. 05) ,而對(duì)照組體重不增,心臟重/體重比值增大。(2) IVIG治療組生存率,200mg組為80 %(12/ 15) ,500 mg及1 g組均為93. 3 %(14/ 15) ,對(duì)照組為53. 3 %(8/ 15) 。治療組生存率明顯升高,但200mg組與對(duì)照相比差異無顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)200 mg治療組雖然發(fā)病癥狀明顯減輕,從87 %(13/15)降至33 %(4/ 12) ,但組織學(xué)病變與對(duì)照相比無差異; 500mg及1g組治療后癥狀完全消失,病變明顯減輕,病灶平均面積、病灶總面積/所測(cè)心肌總面積與對(duì)照組比較差異顯著。但500mg與1g組間病變無顯著差異。治療組體重均有增加,心臟重/體重比值較小,但200mg組與對(duì)照組相比,上述兩值無顯著差異( q=3. 14 ,P> 0. 05) 。圖像分析結(jié)果見附表。

3討論

病毒性心肌炎的治療,目前仍以對(duì)癥支持療法為主,針對(duì)其發(fā)病機(jī)理中有免疫反應(yīng)參與,國外學(xué)者分別使用多克隆鼠免疫球蛋白及IVIG 進(jìn)行試驗(yàn),證實(shí)在病毒接種前及接種當(dāng)時(shí)用藥可抑制心肌炎發(fā)生,接種后1周用藥可減輕炎癥,提高生存率。臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)患兒血液動(dòng)力學(xué)及一年生存率明顯改善。在我們的實(shí)驗(yàn)中,進(jìn)一步明確了不同劑量間的療效差異,在小鼠感染CVB3 后立即用藥3個(gè)劑量對(duì)動(dòng)物均有明顯保護(hù)作用。500mg及1g劑量組IVIG可完全抑制病毒在體內(nèi)的復(fù)制,不發(fā)生心肌炎性病變。200mg劑量組僅個(gè)別小鼠有輕微炎癥發(fā)生,但生存率與500mg及1g組相比差異無顯著性。因此,在急性病毒血癥期200mg劑量可基本抑制體內(nèi)病毒的復(fù)制,保護(hù)絕大多數(shù)小鼠不發(fā)生心肌炎。IVIG的保護(hù)作用可能是通過其特異性中和抗體實(shí)現(xiàn)的。在感染CVB31周后用藥,仍然可以使心肌炎癥明顯減輕,而此時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的中和抗體滴度與對(duì)照無差異,提示IVIG對(duì)炎癥及免疫反應(yīng)有抑制作用。我們也證實(shí)了IVIG對(duì)心肌炎的療效。除1g?kg-1?d-1劑量外,還選取了兩個(gè)較小劑量,治療后心肌病變、生存率及發(fā)病癥狀均有改善,但200mg組療效與對(duì)照相比較差異無顯著性。而500mg及1g組療效明顯,提示在中等劑量上仍可達(dá)到滿意的效果。從上述結(jié)果看,國產(chǎn)IVIG對(duì)病毒性心肌炎有較好的防治效果,其適宜的治療方案和安全性尚待臨床進(jìn)一步驗(yàn)證。

表1IV I G保護(hù)組及治療組計(jì)算機(jī)圖像分析結(jié)果組別 例數(shù) 病灶數(shù)病變面積

(mm2) 所測(cè)心肌總

面積(mm2)病變平均面積(mm2)t值 病變總面積

所測(cè)心肌總面積 10- 2 t 值保護(hù)及對(duì)照 200mg保護(hù) 20 11 0.19 137.21 0. 017 * 2.71 0. 14 ** 3. 86500mg保護(hù) 20 0 0 - 0 - 1g保護(hù) 20 0 0 - 0 - 對(duì)照組 20 147 15.63 132.61 0. 110 11. 79 治療及對(duì)照 200mg治療 15 98 8.78 131.55 0. 089△ 1.74 6. 68△ 1. 83500mg治療 15 34 1.48 149.34 0. 044△△ 2.28 1. 00 ** 3.751g治療 15 19 0.48 129.75 0. 026△△ 2.43 0. 37 ** 4. 03對(duì)照組 15 154 20.23 142.87 0. 130 14. 16 *P< 0 . 01 ,**P< 0 . 001 ,△P> 0 . 05 ,△△P< 0 .