反相高效液相色譜法在嗎替麥考酚酸酯合成新工藝檢測中的應用

胥秀英，謝云，劉紅，張洪蘭，鄭一敏

(1.重慶理工大學藥學與生物工程學院，重慶 400054;

2.北京大學國際醫院集團重慶大新藥業股份有限公司，重慶 400070; 3.重慶市現代中藥制藥工程技術研究中心，重慶 400054)

Chongqing 400054，China;2.Peking University International Hospital Group，Daxin Pharmaceutical Co.Ltd.，Chongqing 400070，China;3.Chongqing Modern Chinese Medicine Pharmacy Engineering Research Center，Chongqing 400054，China)

反相高效液相色譜法在嗎替麥考酚酸酯合成新工藝檢測中的應用

胥秀英1，3，謝云2，劉紅1，3，張洪蘭2，鄭一敏1，3

(1.重慶理工大學藥學與生物工程學院，重慶 400054;

2.北京大學國際醫院集團重慶大新藥業股份有限公司，重慶 400070; 3.重慶市現代中藥制藥工程技術研究中心，重慶 400054)

采用高效液相色譜法檢測嗎替麥考酚酸酯合成新工藝。采用Boston RP－18柱(4.6 mm×250 mm，5μm)，流動相為乙腈∶0.05%磷酸水(35∶65)，流速為1.0 mL·min－1，檢測波長為251 nm，柱溫為室溫。結果表明:嗎替麥考酚酸酯線性范圍為1.98～9.90 mg·L－1(y= 6.4×105x－3.5×105，r=0.999 1)，加樣回收率為101.82%(n=5)，RSD=1.58%。該方法簡便、準確、靈敏、重復性好，可作為一種檢測手段。

反相高效液相色譜法;麥考酚酸酯;檢測

嗎替麥考酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)是一種新型的免疫抑制劑，臨床上與環孢素及腎上腺皮質激素合用于預防和治療腎、肝、心臟等器官移植后的排斥反應［1］。傳統合成方法獲得的產物顏色較深，后續處理困難，導致產品純度差、收率低。針對上述情況，在合成過程中采用添加鏊合劑的方法，降低反應溫度及反應時間，以達到提高產物純度及收率，實現環境友好的目的。本文采用反相高效液相色譜法對合成過程進行監測。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(Delta 600泵，2487檢測器，Empower工作站);乙腈、甲醇:色譜純;水:重慶理工大學藥學與生物工程學院實驗室自制;嗎替麥考酚酸酯:北大國際醫院集團重慶大新藥業股份有限公司提供(批號為080301);嗎替麥考酚酸酯樣品:重慶理工大學藥學與生物工程學院實驗室自制。

2 實驗方法

2.1 色譜條件選擇

［2－4］，對色譜條件進行了篩選，最終以如下色譜條件分離較好，操作方便。色譜條件:色譜柱為C18(4.6 mm×250 mm，5μm);流動相為乙腈∶0.05%磷酸(35∶65);檢測波長為251 nm，流速為1.0 m L·min－1;柱溫為室溫。

2.2 溶液配制

對照品溶液配制:精密稱取嗎替麥考酚酸酯標準品適量置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成質量體積比為0.99 mg·mL－1的對照品溶液，0.45μm濾膜濾過，備用。

供試品溶液配制:取實驗室自制的嗎替麥考酚酸酯樣品適量置于10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，制成質量體積比為0.2 mg·mL－1的供試品溶液，0.45μm濾膜濾過，備用。

螯合劑溶液制備:取優化后的螯合劑適量，制成質量體積比為0.2 mg·mL－1的溶液，0.45μm濾膜濾過，備用。

底物2－羥乙基嗎啉溶液制備:取2－羥乙基嗎啉10μL，用甲醇稀釋定容為1 m L。

底物麥考酚酸溶液制備:取麥考酚酸適量，用甲醇制成質量體積比為0.2 mg·mL－1的溶液，0. 45μm濾膜濾過，備用。

2.3專屬性實驗

在本文色譜條件下，分別將底物、螯合劑和產物各進樣10μL，記錄色譜圖。結果表明:底物和螯合劑在嗎替麥考酚酸酯相同保留時間處均無吸收峰，提示對樣品測定不干擾(見圖1～5)。

圖1 底物2－羥乙基嗎啉色譜圖

圖2 底物麥考酚酸色譜圖

圖3 螯合劑色譜圖

圖4 嗎替麥考酚酸酯標準品色譜圖

圖5 合成嗎替麥考酚酸酯樣品色譜圖

2.4 線性關系考察

精密量取對照品溶液，在本文色譜條件下，分別進樣2、4、6、8、10μL，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，測得標準曲線為y=6.4×105x～3.5× 105，r=0.999 1，線性范圍1.98～9.90 mg ·mL－1。

2.5 精密度實驗

在本文色譜條件下，取對照品溶液連續進樣8 μL共5次，計算峰面積RSD為0.69%，結果表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性實驗

取嗎替麥考酚酸酯供試品溶液，在本文色譜條件下，分別在2、4、6、8、16 h各進樣10μL，計算峰面積RSD為1.64%。結果表明，樣品在16 h內穩定性好。

2.7 重復性實驗

取同一批嗎替麥考酚酸酯供試品6份，分別按本文方法制備成樣品溶液，測定峰面積，計算嗎替麥考酚酸酯含量RSD為1.39%。結果表明，測定方法重復性好。

2.8 回收率實驗

稱取一定量嗎替麥考酚酸酯，按對照品與樣品量為1∶1加入對照品，按本文樣品溶液制備方法制備5份供試液。在本文色譜條件下分別進樣10μL，計算回收率為101.82%(n=5)，RSD= 1.58%，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

按2.2節方法制備合成3批嗎替麥考酚酸酯供試品溶液，分別測定峰面積，計算含量，結果見表2，表明該合成工藝穩定。

表1 嗎替麥考酚酸酯回收率試驗結果(n=5)

表2 3批嗎替麥考酚酸酯含量測定結果(n=3)

3 結束語

本文采用RP－HPLC法測定嗎替麥考酚酯含量，底物及螯合劑對測定均沒有影響，說明該方法的專屬性好。同時該方法簡單、快速、穩定性好，適用于嗎替麥考酚酯含量測定。

在色譜篩選過程中，曾采用甲醇－水、甲醇－0.05%冰乙酸或乙腈－水、乙腈－0.05%冰乙酸作為流動相，其分離效果均不如磷酸好，最后篩選確定最佳流動相為乙腈∶0.05%磷酸(35∶65)。

參考文獻:

［1］樊宏偉，朱余兵，于翠霞，等.麥考酚酸酯片在健康人體在藥動學和生物等效性［J］.中國新藥與臨床雜志，2007，26(3):180.

［2］王素卿，賀廣峰，李艷玲.高壓液相色譜法測定麥考酚酸的含量［J］.河北化工，2008，31(1):69.

［3］陽國平，譚鴻毅，劉暢，等.嗎替麥考酚酯膠囊在健康人體中的相對生物利用度［J］.中國醫院藥學雜志，2007，27(4):476.

［4］余自成，江濤，瞿江媛，等.用HPLC－MS/MS法同時測定Caco－2細胞單層轉運介質中嗎替麥考酚酯和麥考酚酸的濃度［J］.藥學服務與研究，2012，12(6):423.

(責任編輯 劉舸)

Application of the RP-HPLC in Synthesis Technology of
M ycophenolate M ofetil

XU Xiu－ying1，3，XIE Yun2，LIU Hong1，3，ZHANG Hong－lan2，ZHENG Yi－min1，3(1.School of Pharmaceutical and Biological Engineering，Chongqing University of Technology，

A method for the simultaneous determination ofmycophenolate mofetil was developed by HPLC.The analysiswas carried outwith boston C18column(4.6mm×250 mm，5μm)，themobile phase was CH3CN－0.05%H3PO4(35∶65)，the flow－rate was 1.0 m L·min－1，the wave－length was 251 nm and the temperaturewas room temperature.The liner range of MMFwas1.98～9.90 mg·L－1(y=6.4×105x－3.5×105，r=0.999 1).Under the conditions，the correlation coefficient was 0.999 1.The average recovery was 101.82%(n=5)with RSD=1.58%.The method is simple，fast and can be used for determining MMF in the synthesis technology.

RP－HPLC;mycophenolate mofetil;determination

R914.5

A

1674－8425(2014)01－0060－03

Chongqing 400054，China;2.Peking University International Hospital Group，Daxin Pharmaceutical Co.Ltd.，Chongqing 400070，China;3.Chongqing Modern Chinese Medicine Pharmacy Engineering Research Center，Chongqing 400054，China)

10.3969/j.issn.1674－8425(z).2014.01.012

2013－06－28

國家科技重大專項課題(2011ZX09203－001－11)

胥秀英(1965—)，女，研究員，主要從事天然藥物質量控制技術、中藥新藥研究。

胥秀英，謝云，劉紅，等.反相高效液相色譜法在嗎替麥考酚酸酯合成新工藝檢測中的應用［J］.重慶理工大學學報:自然科學版，2014(1):60－62.

format:XU Xiu－ying，XIE Yun，LIU Hong，et al.Application of the RP－HPLC in Synthesis Technology ofMycophenolate Mofetil［J］.Journal of Chongqing University of Technology:Natural Science，2014(1):60－62.