HPLC 法測定蒙藥連翹四味湯散劑中連翹苷含量

2014-07-09 01:51:06白玉華

中國民族醫藥雜志 2014年6期

劉芳白玉華

(1.內蒙古自治區人民醫院，內蒙古呼和浩特 010017; 2.內蒙古自治區國際蒙醫醫院，內蒙古呼和浩特 010063)

連翹四味湯散劑(蘇龍嘎-4)收載于蒙藥分冊107頁。由連翹、拳參、木通、麥冬組成。蒙醫用于腸熱，痢疾，腹痛，腹瀉。方中連翹所占比例較大應為主要藥材。原標準僅有薄層鑒別方法，無相對含量檢測方法。本文參照《中國藥典》2010 年版一部連翹相關品種含量測定方法，選擇連翹苷作為指標性成分對本制劑中的連翹苷行高效液相色譜(HPLC)法含量測定。經分析驗證，該方法重現性好，專屬性強，方中其它組分對連翹苷測定無干擾。

1 儀器與試藥

1.1 儀器: 1100 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)，NC-2000 型色譜工作站(大連中北科學技術公司)，IN -180 型柱溫箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D 超生波清洗器(上海昆山)，梅特勒電子天平(d =0.1mg)，TG332A型光電天平(d=0.01mg)。

1.2 試劑與試藥: 連翹苷對照品(批號: 0821 -200104 供含量測定用)由中國藥品生物制品檢定所提供;乙腈為色譜純;水為高純水;其他試劑均為分析純。連翹四味湯散由內蒙古國際蒙醫醫院提供，模擬制劑由內蒙古中醫藥研究所藥物研究室提供。

2 方法學考察

2.1 色譜條件: 色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，試驗采用非納米C18 (4.6mm×200mm，5μm)色譜柱;流動相為乙腈-水-磷酸(28: 2: 0.1);柱溫為30℃;檢測波長為277nm;理論板數按連翹苷峰算應不低于3000。

2.2 測定溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備: 精密稱取連翹苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL 含1.04mg 的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備: 取本品2g，加甲醇10mL，稱重，超生處理(功率250W，頻率40kHz)40min，放冷，稱重，補足減失重量，濾過，取續濾液蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g，攪拌，加到中性氧化鋁柱(100 ～200 目，2.5g，內徑1.2cm)上，用70%乙醇80mL 洗脫，洗脫液蒸至干，加甲醇溶解，轉移至10mL 量瓶內稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

2.3 線性關系考察: 精密吸取對照品溶液0.25、0.5、1、2、4、6(mL)，分別置10mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL 進樣，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值對進樣量進行回歸分析。結果，連翹苷在0.026μg～0.624μg 范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為y =56070 +561423x r=0.9997。

2.4 精密度試驗: 取同一供試品溶液，在上述色譜條件下，連續進樣6 次，測定連翹苷峰面積積分值，RSD 為0.62%，精密度良好。

2.5 提取率的考察: 供試品分別進行20、30、40、50 (min)的超聲提取考察，結果，30min 后連翹苷含量不再增加，確定40min 為最適合提取時間。

2.6 穩定性試驗: 取同一份供試品溶液，分別于0、2、6、8(h)進行測定，結果，連翹苷在12h 內的峰面積積分值基本穩定不變。

2.7 重復性試驗: 取同一批號供試品6 份，各約2.0g，精密稱定，分別按［2.2］方法制備供試品溶液，按上述條件測定。結果供試品平均含量為0. 39 mg·g-1)，RSD 為1.82%。

2.8 回收率試驗取已知含量的供試品6 份，各約2g，精密稱定，分別精密加入連翹苷對照品溶液(1.04mg·mL-1)1mL，加熱揮去甲醇溶液，其余按［2.2］方法試驗，測定每份的含量，計算回收率，結果見表1 。

表1 回收率測定結果

2.9 樣品含量測定: 取醫院制劑3 批次(20100405、20110602 、20121207 )與模擬樣品3 批次(20121201、20121202、20121203)，按上述方法試驗，含量分別為0.39、0.32、0.36(mg·g-1)，模擬供試品含量分別為0.45、0.46、0.42(mg·g-1)，6 批樣品平均含量0.40mg·g-1。

2.10 專屬性考察: 按［2.2］制備供試品溶液、對照品溶液、連翹陰性供試品溶液。在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL，分別注入液相色譜儀測定。結果表明，陰性對照在與連翹苷色譜峰相同的保留時間處無對應峰干擾。見圖1、2、3