HPLC 測定維吾爾藥散寒藥茶丁香酚的含量

2014-07-09 01:51:06司馬義江阿布都熱西提阿依努爾阿木提阿卜來海提阿卜杜瓦伊提

中國民族醫藥雜志 2014年6期

司馬義江·阿布都熱西提阿依努爾·阿木提阿卜來海提·阿卜杜瓦伊提

(新疆喀什地區藥品檢驗所，新疆喀什 844000)

散寒藥茶是新疆維吾爾族名藥之一，具有調解寒性氣質，養胃，助食，爽神等功效。用于濕寒所致的消化不良，關節骨痛，腰腿痛，頭痛神疲。維吾爾藥茶由小豆蔻、纈草、茴芹果、肉桂、草果、肉桂子、高良姜、蓽苃、小茴香、丁香、梔子、芹菜籽等12 味藥材混合，粉碎，過篩，混勻制成。屬部頒標準維吾爾藥分冊收錄品種［1］。這12 味藥材中丁香具有溫中降逆、補腎助養功能，用于脾胃虛寒，呃逆嘔吐，食少吐瀉，心腹冷痛，腎虛陽痿［2］。部頒標準僅采用定性鑒別試驗來控制該制劑的質量。研究該成分的含量測定方法可以更好的反映和控制該制劑的內在質量。

1 儀器和試藥

儀器: 日本島津公司LC 20AT 高效液相色譜系統;島津uv-2450 紫外可見分光光度計;德國賽多利斯BP211D型分析天平;上海必能超聲波有限公司CQX25 -12 型超聲波清洗器。

試藥: 丁香酚對照品(110725 -201213 99.7% ): 中國藥品生物制品鑒定所;樣品: 散寒藥茶新疆維吾爾藥業有限責任公司(市售品批準文號: 國藥準字Z65020178、批號: 130728、130933、131245);甲醇: 色譜純(美國TEDIA 試劑公司);所有色譜用試劑均用O.45μm 微孔濾膜過濾;水為重蒸餾水;其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件: 色譜柱Inertsil ODS - SP (250 ×4. 6mm 5μm);流動相: 甲醇-5%甲醇溶液(50: 50);流速lmL.min-1;檢測波長225 nm;柱溫: 25℃;進樣量: l0μL;分析方法: 外標法［2］。

2.2 溶液的制備: 精密稱取丁香酚對照品0.09993g，置50mL 容量瓶中，加流動相溶解制成每1mL 中含1.9986mg的溶液，作為對照品儲備液，精密量取對照品儲備液5mL置50mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL 中含0.19986mg 的溶液作為對照品溶液。取樣品1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入流動相50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min，擦干，放冷，再稱定重量，用流動相補足減失的重量，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液即得供試品溶液。按散寒藥茶原標準的處方、工藝制備不含丁香的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗: 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液，在2.1 的色譜條件下測定。結果: 供試品溶液相應色譜峰與對照品丁香酚一致。丁香酚對照品保留時間為22min，理論塔板數大于10000。陰性對照溶液無相應的色譜峰出現。結果見圖1。

圖1 丁香酚HPLC 色譜圖

2.3.2 線性關系考察: 精密量取對照品儲備液(1.9986mg.mL-1)2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、10.0mL，置25mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別取10μL，按“2.1”色譜條件下操作，以6 次測定的峰面積平均值。以峰面積A 為縱坐標，丁香酚對照品溶液濃度(μg. mL-1)為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為:

2.3.3 精密度實驗: 精密量取對照品溶液儲備液(1.9986mg.mL-1)5mL 置25mL 量瓶中加流動相稀釋至刻度，搖勻，取10μL，重復進樣5 次，以峰面積計算RSD(n =5)為0.56%。證明本法及儀器精密度良好。

2.3.4 穩定性實驗: 取同一批號本品(批號為131245)，按“2.2”方法配制溶液，分別于O、1、2、4、6h 進樣，進樣量為10μL，測定丁香酚的峰面積，RSD 為1.2%，表明峰面積基本無變化，說明供試品溶液在12h 內穩定。

2.3.5 加樣回收率實驗: 精密量取已知含量的樣品(批號為131245，含量11. 706mg. g-1)稱取1g，精密稱定，置50mL 容量瓶中，精密加入丁香酚對照品溶液儲備液(濃度為1.9986mg.mL-1)5mL，再加流動相適量密塞，超聲處理(功率250W，頻率50kHz)30min，放冷，加流動相至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，取續濾液，作為加樣回收率樣品。同法制備6 份加樣回收率樣品。按照樣品測定項下的方法測定含量，計算回收率，結果見表1。