239例老年非腸道疾病患者腸道菌群狀況研究＊

傅朝暉，王文麗，張 濱

（1.重慶市第三人民醫院老年科，重慶400014；2.重慶醫科大學公共衛生學院，重慶400015）

239例老年非腸道疾病患者腸道菌群狀況研究＊

傅朝暉1，王文麗1，張 濱2△

（1.重慶市第三人民醫院老年科，重慶400014；2.重慶醫科大學公共衛生學院，重慶400015）

目的了解重慶市不同年齡和不同病種非腸道老年疾病患者菌群變化規律，探索老年疾病與腸道菌群的關系。方法選取重慶市239例確診主要3種非腸道老年疾病患者，觀察大便培養中6種主要的腸道細菌變化，同時與50例非老年疾病患者進行對照。結果在腸道菌群（腸桿菌、腸球菌、擬桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌、梭桿菌）中，老年疾病患者與非老年病患者比較除雙歧菌外其余差異無統計學意義（P＞0.05）；而老年糖尿病患者與非糖尿病，雙歧桿菌、乳桿菌以及雙歧桿菌與腸桿菌的比值（B/E值）顯著下降（P＜0.05），腸桿菌明顯增多（P＜0.05）；而不同年齡段的老年人中，70～89歲B/E值顯著下降（P＜0.05）。結論腸道菌群中，雙歧菌、乳桿菌和腸桿菌與老年糖尿病和老年年齡有關。

腸道菌群；老年疾病；雙歧桿菌

腸道已知的500余種細菌構成了腸道微生態，與人體的營養、生物拮抗、免疫、抗腫瘤和防止衰老有關［1］。老年疾病本質是與人體微生態失衡有關。本研究了解本地區老年人的腸道微生態的狀況，探索與疾病和壽命的關系，為老年疾病的防治提供依據。

1 對象與方法

1.1 對象 為本院近3年確診的重慶市老年疾病患者239例［均大于60歲，平均年齡（78.5±6.6）歲，其中男199例，女40例）］。不同年齡分組（60～69歲組，18例；70～79歲組，121例；80～89歲組，91例；≥90歲組，9例）；另選取本地老年人50例［均大于60歲，平均年齡（69.6±4.26）歲，其中男26例，女24例］作為對照組，兩組年齡比較差異無統計學意義（P＞0.05），所有研究對象近1個月內無腹瀉，未用抗菌藥物，未進食酸奶，飲食為重慶人常進飲食。

1.2 方法 分別測定腸道常見的細菌。標本的采集：用經滅菌的棉簽挑取受試者自然排出的新鮮糞便約3～59g，放入無菌干燥的采便盒內，立即送檢，所需時間嚴格控制在30min之內。標本的處理和接種：稱取送檢的糞便1.0g，用滅菌稀釋液進行連續的10倍稀釋，稀釋至10－8，振蕩混勻，制成均勻懸液，每個不同稀釋度分別取50μL，用“L”棒均勻涂抹于不同的培養基上，分別進行厭氧和需氧培養。同時大便涂片鏡檢找霉菌。培養：腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、酵母菌等（36±1）℃、24 h需氧培養；類桿菌、雙歧菌、乳桿菌、梭菌、擬桿菌（36±1）℃、48h厭氧培養。培養后，計數上述平板培養皿中菌落數，菌落數在第3稀釋度未檢出者即計為陰性。以菌落形態、革蘭染色鏡檢、生化反應等鑒定計數菌落，自菌落群適中的稀釋度，算出同一稀釋度平均菌落數，計算出每克標本中的菌含量即每克濕便中的菌數＝平均菌落數×稀釋倍數×500。鑒定方法如下，腸桿菌：計數發酵乳糖、染色鏡檢為G－桿菌的所有菌落；腸球菌：計數有明顯褐色圈、染色鏡檢為G－球菌的所有菌落；雙歧菌：食品衛生微生物檢驗雙歧菌檢驗；乳桿菌：G＋無芽胞桿菌、觸酶陰性、APICH50；擬桿菌：G－無芽胞桿菌、API20A；梭桿菌：G＋芽胞桿菌。主要計算腸道菌群中的腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌、梭桿菌等6種細菌。

1.3 統計學處理 所有計量數據以±s表達，兩兩比較用t檢驗，多組比較采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 老年患者與正常對照組各種腸道菌群的比較 老年患者與正常對照組各種腸道菌群除梭桿菌外，其余菌群比較差異無統計學意義，見表1。

表1 老年患者與正常對照組各種腸道菌群的比較（±s）

B/E：雙歧桿菌與腸桿菌的比值；＊：P＜0.05，與正常值梭桿菌比較。

組別n腸桿菌 腸球菌 擬桿菌 雙歧桿菌 乳桿菌 梭桿菌 B/E正常組 50 9.15±2.02 8.37±1.86 7.28±3.86 7.74±2.97 6.81±3.46 4.48±2.55 0.91±0.51老年患者239 9.23±1.25 8.01±1.86 8.01±3.23 8.01±2.16 7.34±2.50 3.35±1.69＊0.89±0.28

2.2 糖尿病與非糖尿病患者腸道菌的比較 糖尿病患者與非糖尿病組比較，腸桿菌增加，雙歧桿菌、乳桿菌減少，雙歧桿菌與腸桿菌的比值下降（表2）。

表2 糖尿病與非糖尿病患者腸道菌的比較（±s）

表2 糖尿病與非糖尿病患者腸道菌的比較（±s）

＊：P＜0.05，與非糖尿病患者比較。

腸道菌 糖尿病（n＝55） 非糖尿病（n＝184）9.140 7±1.285 7腸球菌 8.296 0±1.420 8 7.919 7±1.971 8擬桿菌 8.060 5±2.318 5 7.991 2±3.456 6雙歧桿菌 7.024 5±1.847 3＊8.310 8±2.166 5乳桿菌 6.751 5±2.856 5＊7.516 0±2.358 9梭桿菌 3.282 7±1.911 0 3.376 5±1.617 3 B/E 0.741 0±0.196 0＊腸桿菌 9.535 1±1.076 3＊0.928 0±0.286 0

2.3 不同年齡組腸道菌群的變化 不同年齡組腸道菌群的變化，采用組間的兩兩比較的方差分析。從表3可以看出，70～89歲組老年人B/E值較60～69歲組明顯下降，但是90歲以上老人B/E值又較70～89歲組增加。

表3 不同年齡組腸道菌群的變化（±s）

表3 不同年齡組腸道菌群的變化（±s）

＊：P＜0.05，與60～69歲組比較。

腸道菌 60～69歲（n＝18）70～79歲（n＝121）80～89歲（n＝91）≥90歲（n＝9）8.88±1.34 9.35±1.16 9.22±1.30 8.50±1.55腸球菌 7.45±1.58 7.97±1.89 8.15±1.87 8.17±1.98擬桿菌 7.98±2.94 7.85±3.23 8.25±3.24 7.85±2.35雙歧桿菌 8.93±2.38 7.87±2.20 8.00±2.06 8.17±2.00乳桿菌 7.51±2.14 7.26±2.58 7.44±2.52 7.01±1.98梭桿菌 3.86±2.16 3.10±1.26 3.55±1.94 3.74±2.46 B/E 1.04±0.36 0.85±0.27＊0.89±0.27 0.99±0.27腸桿菌＊

3 討 論

腸道微生態與人的壽命、健康密切相關，構成腸道微生態的已知細菌多達500余種，包括厭氧菌、需氧菌、蒹性厭氧菌、真菌等，其中以雙歧桿菌和乳酸桿菌等專性厭氧菌占絕大多數（稱為益生菌），其次是大腸桿菌和鏈球菌為主的蒹性厭氧菌（稱為共生菌），而具有機會致病性的需氧菌如變形桿菌、單胞菌等（稱為過路菌）極少。正常情況下，這些微生物互相依存，又互相制約，保持一定的數量和比例，維持腸道的微生態平衡，對人體的營養、免疫調節、抗衰老和抗腫瘤等具有重要作用。

腸道的益生菌（以雙歧桿菌為主）的專性厭氧菌，與腸黏膜上皮表面的特異性受體結合或插入細胞間隙，形成相當固定的菌膜結構，具有抑制腸道需氧的潛在致病菌的作用，這種作用稱為腸道定植抗力［2］，一般以雙歧桿菌與腸桿菌的比值（B/E值）來作為腸道抗定植力的指標，其比值小于1表示腸道抗定植力受損［3］。本文發現，重慶地區非腸道老年疾病患者與正常老年人腸道菌群分布比較差異無統計學意義，B/E值總體均小于1，特別是在70歲以后尤為明顯，表明老年人的腸道定植抗力下降，易發生腸道菌群的失調。而老年糖尿病患者B/E值比老年非糖尿病患者明顯下降，兩者之間有顯著差異，說明糖尿病患者腸道定植抗力受損更為明顯。

糖尿病患者由于糖代謝異常，血糖增高，二糖酶活性降低、黏液素分泌增多、腸道通透性增加等一系列生理變化，使腸道細菌黏膜屏障發生改變。研究表明在糖尿病大鼠乳桿菌、雙歧桿菌減少，并隨著糖尿病治療血糖下降而升高［4］。本文發現老年糖尿病患者乳桿菌、雙歧桿菌減少，與別明江等［5］的研究一致。腸道菌群的改變，會影響營養物質的吸收和腸道的免疫力，免疫力的下降使腸道的有害細菌大量繁殖，產生菌群失調。本文也發現老年糖尿病患者腸桿菌增加，B/E值下降，說明糖尿病患者腸道定植抗力下降。研究發現腸道菌群在一定程度上影響糖尿病的發生、發展。在動物實驗和糖尿病患者中發現腸道菌群改變，腸道通透性增加，腸道黏膜免疫改變，使得免疫耐受失敗，導致1型糖尿病的自身免疫［4］。腸道菌群的改變還可以促進2型糖尿病的發生，因為乳桿菌、雙歧桿菌減少，發酵消化食物的作用下降，同時這些細菌產生一種讓脂肪進入人體脂肪細胞的“大門”保持關閉的“引發禁食脂肪細胞因子”（FIAF）的酶減少，物質代謝的改變，能量的內穩態破壞，會導致胰島素抵抗及2型糖尿病的發生［6］。

據研究，雙歧菌具有抗衰老作用，雙歧菌的多少與壽命的長短相關。國內文獻報道長壽老人腸道雙歧桿菌數量增加。本研究發現，在70～89歲老年人B/E值較60～69歲老年人B/E值明顯下降，說明70～89歲老年人腸道定植力受損，但是90歲以上老人B/E值較70～89歲老年人又顯著增加，說明高齡長壽老人腸道定植力增強，年齡和雙歧菌呈正相關［7－8］，也就是說在老年人中雙歧桿菌的數量相對多者，生存年齡相對長，提示雙歧桿菌的多少與高齡有某種關系。

本文通過對重慶地區老年非腸道疾病患者的主要腸道菌群分布的研究，發現腸道菌群中，雙歧桿菌、乳桿菌下降和腸桿菌的升高與老年糖尿病和老年壽命有關。

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Research on the intestinal flora of the 239 patients in the elderly non－intestinal diseases＊

FuChaohui1，WangWenli1，ZhangBin2△
（1.DepartmentofGeriatrics，theThirdPeople＇sHospitalofChongqing，Chongqing400014，China；2.SchoolofPublicHealth，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400015，China）

ObjectiveTo learn the changing rules of the parenteral diseases flora of the old ages at different age and different diseases.Besides，survery the relations between the geriatric diseases and the intestinal floras.MethodsChose 239diagnosed elderly parenteral diease patients of 3kinds and observe the main enteric bacterium′changes，then compared to 50non－elderly patients.ResultsFor the Intestinal floras（the enterobacter，the enterococcuses，the bacteroids，the bifidobacteriums，the lactobacillus，the fusobacteriums），compared the geriatric patients with the non geriatric patients，the coronary heart disease with non coronary heart disease patients，the respiratory with non respiratory patients，the enterobacterias showed no significant difference（P＞0.05）；But the B/E ratio of the elderly and non－elderly diabetes mellitus patients，that of bifidobacteriums and the lactobacillus，the ratio between the bifidobacteriums and the enterobacters were decreasing obviously（P＜0.05）；the B/E was decreasing significantly in the 70－89ages（P＜0.05）.ConclusionThe bifidobacteriums，the lactobacillus and the enterobacters are related to the elderly diabetes mellitus and the olders′life.

intestinal flora；geriatric diseases；bifidobacterium

10.3969/j.issn.1671－8348.2012.23.022

A

1671－8348（2012）23－2400－02

重慶市醫學科研計劃基金資助項目（03－2－020）。△ 通訊作者，Tel：13883266741；E－mail：zhangbin＿127＠163.com。

2011－10－09

2012－01－06）