紫外分光光度法測定烏藥中總生物堿含量

張劍等

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結(jié)果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結(jié)果準確、可靠。

關(guān)鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統(tǒng)的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現(xiàn)代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內(nèi)酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質(zhì)量標準評價有具體的量化指標，根據(jù)烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數(shù)顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領(lǐng)航者生物技術(shù)有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調(diào)節(jié)pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結(jié)論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結(jié)合生成有色的絡(luò)合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩(wěn)定性、精密度、回收率，結(jié)果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質(zhì)量的篩選提供試驗方法和參考依據(jù)。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業(yè)出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2005：53.

[3]中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯和烏藥內(nèi)酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產(chǎn)地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（10）：282-283.endprint

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結(jié)果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結(jié)果準確、可靠。

關(guān)鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統(tǒng)的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現(xiàn)代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內(nèi)酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質(zhì)量標準評價有具體的量化指標，根據(jù)烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數(shù)顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領(lǐng)航者生物技術(shù)有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調(diào)節(jié)pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結(jié)論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結(jié)合生成有色的絡(luò)合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩(wěn)定性、精密度、回收率，結(jié)果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質(zhì)量的篩選提供試驗方法和參考依據(jù)。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業(yè)出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2005：53.

[3]中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯和烏藥內(nèi)酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產(chǎn)地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（10）：282-283.endprint

摘要：用紫外分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。先用索氏提取法提取烏藥中的總生物堿，再以小檗堿為對照品，在pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液中，以溴甲酚綠指示液為顯色劑，在628 nm波長下利用分光光度法測定烏藥中的總生物堿含量。結(jié)果表明，小檗堿對照品在2.0～12.0 mg/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回歸方程為D=0.008 2C+0167 1，r=0.999 1，烏藥中的總生物堿含量為0.301 4%。本方法操作簡便、迅速，測定結(jié)果準確、可靠。

關(guān)鍵詞：烏藥；總生物堿；分光光度法

中圖分類號：R284.1；O657.32 文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）03-0266-02

烏藥[Lindera aggregata （Sims）Kosterm]系樟科（Lauraceae）山胡椒屬（Lindera）植物，為傳統(tǒng)的理氣止痛藥[1]，具有溫中散寒、理氣止痛的功效，最早記載于唐代陳藏器《本草拾遺》。現(xiàn)代藥理學研究表明，烏藥具有廣泛的藥理活性[2-3]。烏藥根的主要有效成分為異喹啉類生物堿及呋喃倍半萜[4]，其中生物堿和呋喃倍半萜及其內(nèi)酯類成分是烏藥的特征性成分[5-7]，具有較強的專屬性，也具有一定的活性。為了確保烏藥的質(zhì)量標準評價有具體的量化指標，根據(jù)烏藥中所含成分的特點，本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的生物堿含量。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

主要儀器：紫外可見分光光度計（尤尼柯UV-4802）；98-1-C數(shù)顯控溫電熱套（天津泰斯特）；索式提取器；電子天平；三氯甲烷（AR）；溴甲酚綠（AR）；小檗堿標準品（成都領(lǐng)航者生物技術(shù)有限公司）；pH值45的醋酸-醋酸鈉緩沖液；0.01 mol/L氫氧化鈉溶液（用乙醇溶解）。

試驗所用中藥材烏藥樣品采自江西贛南。

1.2 試驗方法

本研究所用試驗方法參照文獻[8-10]的方法并加以改進。

1.2.1 緩沖液的配制 pH值4.5緩沖液的配制：將 0.2 mol/L 氫氧化鈉滴加至冰醋酸中，調(diào)節(jié)pH值為45，即得醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。0.04%溴甲酚綠溶液的配制：稱取40 mg溴甲酚綠，加100 mL pH值為4.5的醋酸-醋酸鈉緩沖溶液溶解，過濾。

1.2.2 標準曲線的制備 稱取2 mg干燥至恒重的小檗堿對照品于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷定容至100 mL，搖勻。分別取1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2 mL標準溶液于 20 mL 量瓶中，用三氯甲烷稀釋至10 mL，分別加入5.0 mL pH值為45的緩沖液、2.0 mL 0.04%溴甲酚綠溶液，劇烈振搖5 min后靜置30 min。取5 mL下層液體，加入1.0 mL 0.01 mol/L 氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測吸光度。以小檗堿含量（C）為橫坐標，吸光度（D）為縱坐標制作標準曲線，得回歸方程。

1.2.3 空白溶液的制備 取10 mL三氯甲烷溶液于20 mL容量瓶中，分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）、2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min。取 5 mL 下層液，加入1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液搖勻，作為空白溶液。

1.2.4 烏藥中總生物堿的提取 準確稱取0.5 g烏藥，用適量氨水濕潤后密封放置30 min，索式提取2 h后將提取液置于TLC（薄層色譜），滴加碘化鉍鉀溶液至不顯色為止；回收三氯甲烷，將殘留物放冷至室溫，再用三氯甲烷溶解并定容至20 mL。分別取 0.2 mL 提取物于量瓶中，加三氯甲烷定容至10 mL，混勻作為樣品液。分別取10 mL樣品液于3個20 mL容量瓶中，再分別加入5.0 mL緩沖液（pH值4.5）和2 mL 004%溴甲酚綠溶液，劇烈搖動5 min后靜置30 min；取5 mL下層液，加 1.0 mL 0.01 mol/L氫氧化鈉乙醇溶液，搖勻后于628 nm處測定吸光度，計算生物堿含量與回收率，回收率計算公式為：

3 結(jié)論

本研究采用酸性染料比色法測定烏藥中的總生物堿含量，其原理是生物堿鹽的陽離子與酸性染料的陰離子定量結(jié)合生成有色的絡(luò)合物，可以定量地被某種有機溶劑萃取，因此通過測定萃取液的吸光度可以測定藥材中總生物堿含量。在本試驗中采用的生物堿的酸性染料為溴甲酚綠。同時考察了本方法的線性范圍、穩(wěn)定性、精密度、回收率，結(jié)果表明本方法符合紫外可見分光光度法的測試條件，可以作為烏藥中總生物堿含量的測試方法。

生物堿大多具有復雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有顯著的生物活性，是烏藥中重要的有效成分。本試驗測得烏藥中總生物堿含量為0.301 4%（n=3）。本試驗建立的烏藥中總生物堿含量的測試方法可以為烏藥種源質(zhì)量的篩選提供試驗方法和參考依據(jù)。

參考文獻：

[1]肖培根. 新編中藥志[M]. 北京：化學工業(yè)出版社，2002：230.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典：一部[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2005：53.

[3]中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志：第二冊[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，1981：926.

[4]程顯隆，魏 鋒，馮玉飛，等. RP-HPLC法測定烏藥中烏藥醚內(nèi)酯和烏藥內(nèi)酯的含量[J]. 藥物分析雜志，2003，23（3）：225-227.

[5]許海丹，顧霞敏，葉文國. 烏藥化學成分的分布特性研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2010，21（1）：100-101.

[6]Han Z，Zheng Y，Chen N，et al. Simultaneous determination of four alkaloids in Lindera aggregata by ultra-high-pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A，2008，1212（1/2）：76-81.

[7]Gan L S，Yao W，Mo J X，et al. Alkaloids from Lindera aggregata[J]. Natural Product Communications，2009，4（1）：43-46.

[8]蔣愛芳，楊義芳，黃文武. 酸性染料比色法測定總生物堿的研究進展[J]. 中草藥，2006，37（增刊）：359-362.

[9]蔡大可，李 耿，彭紹忠，等. 酸性染料比色法測定痹痛消膏中烏頭生物堿的含量[J]. 中藥新藥與臨床藥理，2007，18（1）：57-59.

[10]敖茂宏，劉 海，吳明開. 酸性染料比色法測定不同產(chǎn)地流蘇石斛中總生物堿的含量[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2012，40（10）：282-283.endprint