顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定

黃豪萬，常明泉，李 玲，陳 芳

顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定

黃豪萬1，常明泉2*，李 玲1，陳 芳2

目的 建立顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水(88∶12)；檢測波長210 nm，進樣量20 μL，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。結果 熊果酸在2.1～63.0 μg/mL 范圍內線性關系良好，y=1.793 5x+0.528 2(r=0.999 8),回收率為98.9%,RSD=1.48%(n=9)。結論 所建方法便捷、專屬性強,適用于顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定。

顛胃酸口服液；熊果酸；含量測定

0 引言

嬰幼兒因感染、食物過敏、酶缺乏、免疫低下、營養不良或因胃寒、胃冷、食積等先天因素，易出現食后嘔吐、胃腸痙攣、腹瀉癥狀，這些癥狀在幼兒中頻發、常見。顛胃酸口服液是一個針對上述癥狀和嬰幼兒生理特點而開發的一個口服液[1]。該制劑以純中藥提取物為原料組方，主要成分為山楂提液、顛茄提取液、生姜提取液，輔以其他相應成分制備。山楂提取液是顛胃酸口服液中主要成分之一，具有健胃消食的功效，與6-姜辣素結合起到止瀉的作用。顛茄提取液中的莨菪堿類物質用高效液相色譜法已能準確測定其含量[2-3]。生姜提取液中6-姜辣素按藥典方法也可測得，之前該制劑中山楂提取液的含量測定還是空白。為了健全質量控制體系，確保臨床用藥安全、有效，本試驗以熊果酸為指標，用高效液相色譜法對其含量進行測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

戴安3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司);定量用熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110876-201054)；顛胃酸口服液(本院自制，批號：20130515、20130516、20130517)；甲醇為色譜純，水為純化水和超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[4-5]色譜柱：Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水(88∶12)；檢測波長210 nm，進樣量20 μL，流速1.0 mL/min，柱溫25 ℃。

2.2 溶液的制備 ①對照品溶液：精密稱取熊果酸對照品10.5 mg于50 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，既得濃度為0.21 mg/mL的對照儲備液，精密吸取該溶液1.0于10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得21.0 μg/mL溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得；②供試品溶液：精密吸取顛胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得；③陰性樣品溶液：精密吸取不含山楂提取液的顛胃酸口服液2.0 mL于100 mL容量瓶中，按供試品溶液方法制備，即得。

2.3 系統適用性試驗 分別取“2.2”項下的各溶液在“2.1”色譜條件下進樣，記錄色譜圖，結果除陰性樣品溶液外，對照品溶液、供試品溶液在同一時間均有相同色譜峰出現，理論塔板數為6 450，分離度為1.88，對照品溶液重復性試驗RSD為0.94%(n=5)，拖尾因子為0.98，說明制劑中的其他成分對熊果酸含量測定無干擾。圖1為系統適用性試驗色譜圖。

圖1 高效液相色譜色譜圖注：A對照品；B供試品；C陰性樣品；1 熊果酸

2.4 標準曲線的建立 分別取“2.2” 項下濃度為0.21 mg/mL的對照品儲備液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL置10 mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，即得每mL含熊果酸2.1、10.5、21.0、31.5、42.0、52.5、63.0 μg的溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液在“2.1”色譜條件下進樣，重復操作3次，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),熊果酸在2.1～63.0 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.5 精密度性試驗 取“2.2”項下的對照品溶液，在“2.1”色譜條件下分別進樣5次，記錄熊果酸的峰面積值，結果RSD為0.94%

2.6 穩定性試驗 取“2.2”項下的供試品溶液，在“2.1”色譜條件下分別于0、3、6、12、24 h進樣，測定熊果酸的峰面積值，結果RSD為1.49%，說明樣品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取同一批號(20130410)的顛胃酸口服液樣品，按“2.2”項下供試品溶液方法制備,共5份，在“2.1”色譜條件下進樣,測定熊果酸的平均含量，結果RSD為1.01%。

2.8 回收率試驗 精密吸取不含山楂提取液的顛胃酸口服液樣品2.0 mL于100 mL容量瓶中，共9份，每3份1組，按已測知樣品含量的80%、100%、120%分別加入適量對照品溶液，按“2.2”項下供試品溶液方法制備，在“2.1”色譜條件下進樣，測定樣品峰面積值，按外標法計算熊果酸的含量，結果見表1。

2.9 含量測定 取顛胃酸口服液樣品3批，各精密吸取2.0 mL于100 mL容量瓶中，按“2.2 ”項下供試品溶液方法制備，在“2.1”色譜條件下進樣測定峰面積，按外標法計算熊果酸的含量，結果見表2。

表1 顛胃酸口服液熊果酸回收率實驗結果(n=9)

表2 顛胃酸口服液中熊果酸含量測定結果(n=3)

3 討論

山楂中主要含多種水溶性脂肪酸(如蘋果酸、枸櫞酸酸、琥珀酸)、脂溶性三萜酸(熊果酸)、芳香酸(如齊墩果酸、咖啡酸、綠原酸)，這些酸類物質具有助消化作用，而熊果酸是其中具有代表性的成份，其含量的高低決定顛胃酸口服液消化功能的強弱、臨床療效的好壞，它與6-姜辣素按一定比例復合，對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌都具有良好的抑制作用[6]，《中國藥典》[4]只規定了用氫氧化鈉為滴定液滴定有機酸的方法，沒有規定用高效液相色譜法測定、分離多種酸類成份的方法。本文參考相關文獻，建立用高效液相色譜法測定熊果酸的含量。本研究為系統實驗，在現有條件下將逐步摸索方法，對其他酸類成份的含量進行儀器測定。

熊果酸與齊墩果酸為一對異構體，兩者含量測定均采用高效液相色譜法，在測定時顯示兩種成分分離效果均不理想，拖尾因子也比較大[5]，試驗時分別比較了以甲醇-水(88∶12)、乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氫鉀(含0.2%辛烷磺酸鈉)、磷酸二氫銨-磷酸緩沖液(pH 3.0)3種流動相對熊果酸的出峰效果[6]，曾在磷酸二氫銨-磷酸緩沖液(pH 3.0)和乙腈-0.02 mol/mL磷酸二氫鉀(含0.2%辛烷磺酸鈉)溶液中先后加入三乙胺、四丁基氫氧化銨，測定結果顯示，三乙胺對改善拖尾因子和優化峰型無意義，四丁基氫氧化銨加入后，可使峰型收窄，拖尾因子變小，但回收率不理想，而提高甲醇用量，以甲醇-水(88∶12)做流動相時檢測效果最佳。

顛胃酸口服液中還有顛茄提取液、生姜提取液，一些復雜成分的存在可能會對熊果酸的分離產生干擾，所以選擇能充分溶解熊果酸的溶劑和流動相對有效提取該成分十分重要。在供試液制備時，曾參考文獻考察了醇提、水提對熊果酸的檢出率，結果以80%以上甲醇溶液提取效果最好，故使用流動相甲醇-水(88∶12)為提取溶劑，這可能因為熊果酸系脂溶性酸，而甲醇為脂溶性溶劑，在高濃度甲醇溶液中溶解效果好。不需要再另外配制流動相，降低檢測成本。該方法用于顛胃酸口服液中熊果酸的含量測定，專屬性強，結果重現性好。

[1] 常明泉，郝新才，葉立紅，等.顛胃酸口服液的制備與質量控制[J].中國藥師，2011，14(7)：1050-1051.

[2] 常明泉，黃良永，郝新才，等.HPLC法測定顛胃酸口服液中硫酸阿托品的含量[J].中國藥師，2011,14(4)：566-567.

[3] 陳芳，常明泉，肖琴，等.高效液相色譜法測定顛胃酸口服液中東莨菪堿的含量[J].兒科藥學雜志，2012,18(2)：39-41.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社，2010:39-30，176-177.

[5] 周巧霞，顧振綸.山楂中熊果酸和齊墩果酸的高效液相色譜分析[J].中成藥，2010,3(5):862-864.

[6] 王芳.山楂中熊果酸含量的RP-HPLC測定法[J].職業與健康，2011,27(20):2316-2318.

Content detection of ursolic acid in dianweisuan oral liquid

HUANG Hao-wan1,CHANG Ming-quan2*,LI-Ling1,CHEN-Fang2

(1.The People′s Hospital of MaoJian Distrct,Shiyan 442001,China;2.Shiyan Maternal and Child Health Hospital，Shiyan 442000,China)

Objective To establish the content detection method of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.Methods HPLC method was used with Diamonsil-C18column (250 mm×4.6 mm,5 μm)，the mobile phase was methyl alcohol and water (88∶12),the detection wavelength was at 210 nm,injection volume was 20 μL,column temperature was 25 ℃and flow rate was 1.0 mL/min.Results Ursolic acid curve was liner within a range of 2.1～63.0 μg/mL,liner equation was y=1.793 5 x+0.528 2(r=0.999 8),the average recovery was 98.9% withRSDof 1.48%(n=9).Conclusion The established method is simple and with good reproducibility,could be further used to investigate the determination of ursolic acid in dianweisuan oral liquid.

Dianweisuan oral liquid;Ursolic acid;Content detection

2013-08-25

1.湖北省十堰市茅箭區人民醫院，湖北 十堰 442001；2.湖北醫藥學院附屬太和醫院；湖北 十堰 442000

*通信作者