Delta-catenin和Rac1蛋白在肺癌組織中共表達的臨床意義

張俊毅，董彩鳳

（1.赤峰學院醫學院病理教研室；2.赤峰學院附屬醫院呼吸內科，內蒙古 赤峰 024000）

Delta-catenin和Rac1蛋白在肺癌組織中共表達的臨床意義

張俊毅1，董彩鳳2

（1.赤峰學院醫學院病理教研室；2.赤峰學院附屬醫院呼吸內科，內蒙古 赤峰 024000）

張俊毅，男，漢族，1977年3月出生于內蒙古烏蘭察布市商都縣。2000年畢業于內蒙古醫科大學臨床醫學專業，2003-2006年于河北醫科大學攻讀病理學碩士學位，2007-2010年于中國醫科大學攻讀病理學博士學位，2012年9月進入汕頭大學醫學院基礎醫學博士后流動站從事博士后科研工作。現任赤峰學院醫學院副教授，呼吸內科副主任醫師。

目的：探討Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌組織中是否存在共表達及其臨床意義.方法：用免疫組化方法檢測60例非小細胞肺癌標本中Delta-catenin和Racl蛋白的表達，并分析它們表達的相關性及其與患者臨床病理因素之間的關系.結果：Delta-catenin在肺癌組織中的陽性表達率為65.0%(39/60)，明顯高于正常肺組織的表達（0%，0/20）；而Racl的陽性表達率為61.7%(37/60)，也顯著高于正常肺組織的表達（0%，0/20）.此外，Delta-catenin的陽性表達和Racl的陽性表達具有明顯的相關性（P＜0.05）.與高分化、低pTNM分期和無淋巴結轉移的病例相比，Delta-catenin和Racl的共表達率在低分化、高pTNM分期和有淋巴結轉移的病例中顯著增高（P＜0.05或0.01）.Delta-catenin和Racl共表達患者的術后生存時間也明顯短于非共表達的患者（P＜0.05）.結論：Delta-catenin和Racl在肺癌組織中的共表達與患者的不良預后顯著相關.

Delta-catenin；Racl；非小細胞肺癌

有報道揭示Delta-catenin的高表達與腫瘤的侵襲轉移等惡性行為密切相關[1]，而細胞突起的形成和數量是腫瘤細胞具備侵襲轉移能力的重要形態學標志，且研究也發現Delta-catenin的表達能夠促進細胞突起的形成[2-3]，而細胞突起的形成常常與細胞骨架的裝配有關，并且小GTP酶（如Racl）是細胞骨架裝配的重要調節因子[4-5]，因此筆者推測Delta-catenin促進腫瘤細胞的侵襲轉移很可能是通過調節小GTP酶的活性、進而影響細胞骨架的裝配而實現的.新近的報道雖然也揭示了在肺癌細胞系中Delta-catenin通過調節小GTP酶的活性而促進瘤細胞的侵襲轉移[6]，然而在肺癌組織中Delta -catenin與小GTP酶是否存在共表達及其與患者的臨床病理因素及預后是否相關并不清楚.

本研究應用免疫組化方法對60例非小細胞肺癌標本中Delta-catenin和Racl蛋白的表達情況進行了檢測，并分析了它們的共表達與患者臨床病理因素及預后的關系.

1 材料與方法

1.1 組織標本與病人資料

60例非小細胞肺癌及20例癌旁正常肺組織標本選自赤峰學院附屬醫院病理科2004～2009年的存檔蠟塊.患者術前未接受放化療.其中男性38例，女性22例，平均年齡56歲.根據世界衛生組織（WHO）2004年肺腫瘤組織學分類標準[7]：鱗癌26例，腺癌34例.高分化19例，中分化26例，低分化15例.按照國際抗癌聯盟（UICC）的腫瘤pTNM分期標準[8]：Ⅰ期16例，Ⅱ期28例，Ⅲ期13例，Ⅳ期3例.我們對所有患者進行了術后隨訪，生存時間是從手術日期到死亡（由于復發或轉移所引起）或末次隨訪日期為止.以上所有標本的使用均征得了赤峰學院附屬醫院醫學倫理委員會的同意且患者本人或家屬知情.

1.2 免疫組織化學染色與結果判定

標本制成4μm連續切片，采用SP免疫組織化學方法進行染色.小鼠抗人單克隆抗體Deltacatenin(美國Santa Cruz公司)、Racl(美國pierce公司)的稀釋度均為l:100.SP染色試劑盒和DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術公司.PBS代替一抗做陰性對照.

計數400個腫瘤細胞并統計陽性染色細胞所占的百分數.參照文獻描述的Delta-catenin評分標準[1]：免疫染色的強度（0=negative,1=weak,2= moderate,3=strong），免疫染色的陽性細胞數（0=absent,1=1～25%，2=26～50%，3=51～75%，4=≥76%），標本的最終評分為兩項評分的乘積.為了便于統計，將評分結果分為兩組：陰性表達定義為＜2，陽性表達定義為≥2.Rac1的評分標準參照文獻[9]：陽性細胞數≤25%為(+)，26-75%為(++)，≥76%為(+++).(-)～(+)定義為正常表達，(++)～(+++)為過表達.Delta-catenin陽性表達和Rac1過表達被定義為共表達.

1.3 統計分析

應用SPSS for Windows 13.0統計軟件進行數據分析.免疫組化結果采用Pearson's Chi-Square檢驗.患者生存分析采用Kaplan-Meier法，Log-Rank檢驗患者生存率的差別.P＜0.05被認為有統計學差異.

2 結果

2.1 Delta-catenin和Racl蛋白的表達在肺癌組織中顯著增高，且它們的表達具有明顯相關性

表1 Delta-catenin和Racl在肺癌組織中表達的相關性

圖1 Delta-catenin在正常氣道上皮細胞(A)中呈陰性表達，而在肺鱗癌（B）和肺腺癌（C）中呈陽性表達；相似地，Racl在正常氣道上皮細胞(D)中也呈陰性表達，而在肺鱗癌（B）和肺腺癌（C）中呈陽性表達.SP免疫組化法

Delta-catenin在正常肺組織中為陰性表達（0/20，圖1），在60例肺癌病例中有39例陽性表達，陽性率為65.0%(39/60).Racl在肺癌組織中的過表達率為61.7%(37/60)，而它們在正常肺組織中均為陰性表達(0/20).Delta-catenin和Racl均為陽性表達（共表達）的病例有26例，占病例總數的43.3%（26/60），而非共表達的患者占總數的56.7%（34/60）.此外，Delta-catenin的陽性表達和Racl的過表達存在明顯的相關性(p<0.05；表1).

2.2 Delta-catenin和Racl蛋白在肺癌組織中的共表達與患者的不良預后顯著相關

在Delta-catenin和Racl共表達的26例病例中（表2）：低分化有10例，占低分化病例總數的66.7%（10/15），明顯高于高-中分化的35.6%（16/45，p＜0.05）；III-IV期的共表達病例為11例，占68.8%（11/16），顯著高于I-II期的34.1%（15/44，p＜0.01）；有淋巴結轉移的共表達病例為17例，占60.7%（17/28），也明顯高于無淋巴結轉移病例的28.1%（9/32，p＜0.01）.然而，共表達與患者的年齡、性別和組織類型沒有明顯關聯（p＞0.05）.此外，Kaplan-Meier生存曲線顯示Delta-catenin和Racl共表達患者的生存時間顯著短于非共表達的患者（Log-Rank檢驗p＜0.05，圖2）.

表2 Delta-catenin和Racl的共表達與患者臨床病理因素的關系

圖2 Kaplan-Meier生存曲線顯示Delta-catenin和Racl共表達（co-expression）患者的生存時間顯著短于非共表達（Non co-expression）的患者（Log-Rank檢驗，p<0.05）

3 討論

新近的文獻報道Delta-catenin可通過調節小GTP酶活性而促進肺癌細胞的惡性表型[6]，但在肺癌組織中Delta-catenin和小GTP酶的表達是否具有相關性，以及它們的共表達與患者的預后是否有關等問題并不清楚.本研究運用免疫組化方法發現Delta-catenin和Racl在肺癌組織中的表達均比正常肺組織明顯增高，并且Delta-catenin的陽性表達和Racl的過表達具有顯著的相關性.此外，Delta-catenin和Racl的共表達與肺癌組織的低分化、高pTNM分期以及淋巴結轉移密切相關，而且生存分析顯示Delta-catenin和Racl共表達的肺癌患者的術后平均生存時間也顯著縮短.

眾所周知，小GTP酶家族蛋白是細胞骨架重構、信號轉導和基因表達通路的重要調節因子[4-5].目前研究最為深入的有Rac1、Cdc42和RhoA這三個成員，其中Rac1的活性增高可以促進細胞偽足的形成，有利于細胞的運動和游走[10-11].本研究顯示Delta-catenin和Racl在肺癌組織中存在共表達并與患者的不良預后密切相關，這與Delta-catenin與包括Racl在內的小GTP酶相互作用而促進肺癌細胞侵襲轉移的實驗結果相輔相成，進一步完善了Delta-catenin與小GTP酶家族成員在促進肺癌侵襲轉移中的相互作用關系，也為下一步深入探討Delta-catenin在肺癌中的表達調控機制奠定了基礎.

總之，肺癌組織中不僅存在著Delta-catenin的高表達，而且它的表達與Racl的過表達存在著顯著的相關性.Delta-catenin和Racl的共表達不僅與肺癌組織的低分化、高分期和淋巴結轉移有關，還與患者術后顯著降低的生存時間密切相關，因此把Delta-catenin和Racl的表達作為判斷肺癌患者預后的因子具有重要的臨床意義.

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R361+.3

A

1673-260X（2014）07-0016-03

國家自然科學基金（81201844）；內蒙古自然科學基金（2012MS1109）