色素上皮衍生因子對高糖刺激下大鼠視網膜Müller細胞凋亡的影響

李夢云 李艷 劉宏波 畢歡麗 張杰

色素上皮衍生因子對高糖刺激下大鼠視網膜Müller細胞凋亡的影響

李夢云 李艷 劉宏波 畢歡麗 張杰

色素上皮衍生因子；高糖刺激；Müller細胞；bcl-2基因；bax基因；細胞凋亡

目的探討色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)對高糖刺激下視網膜Müller 細胞凋亡的影響，為PEDF治療糖尿病視網膜病變提供實驗依據。方法實驗分3組，分別是正常對照組、高糖模型(HG)組(培養基內含有25 mmol·L-1的葡萄糖)和PEDF處理高糖模型(HG+ PEDF)組(在高糖培養基礎上加入25 mg·L-1的PEDF)。反復胰蛋白酶消化法培養純化SD大鼠視網膜Müller細胞，免疫熒光雙標鑒定純度；應用倒置相差顯微鏡觀察Müller 細胞形態，AnnexinV-FITC、PI染色流式細胞技術檢測Müller 細胞的凋亡率，RT-PCR測定Müller細胞bcl-2、bax mRNA的表達變化。結果原代培養的Müller細胞傳至3代時純度為95%以上。正常對照組、HG組、HG+PEDF組Müller細胞早期凋亡率分別為(1.223±0.106)%、(2.657±0.120)%、(1.907±0.117)%，bax mRNA相對灰度值分別為0.269±0.041、0.804±0.052、0.528±0.018，bcl-2 mRNA相對灰度值分別為0.904±0.021、0.413±0.015、0.521±0.010。HG組與正常對照組相比，Müller細胞形態發生明顯改變，細胞凋亡率顯著增加(P<0.001)，bax mRNA表達顯著升高，bcl-2 mRNA表達顯著降低(均為P<0.01)；HG+PEDF組Müller細胞凋亡率較HG組顯著降低(P<0.001)，bax mRNA表達顯著降低，bcl-2 mRNA表達顯著升高(均為P<0.01)，但仍有別于正常對照組(均為P<0.05)。結論外源給予PEDF可以顯著減少高糖刺激引起的Müller細胞的凋亡，對視網膜Müller 細胞具有顯著的保護作用。

[眼科新進展，2014，34(6)：526-529]

糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病致盲的主要原因之一。研究表明，DR不僅有微血管病變，而且視網膜神經細胞亦發生了性狀及功能的改變[1]。Müller細胞是視網膜中主要的膠質細胞，貫穿整個視網膜，包繞著幾乎所有神經元的胞體及突觸，具有星形膠質細胞和少突膠質細胞的共同功能，在維持視網膜正常結構、代謝及調節血-視網膜屏障等方面發揮重要作用。糖尿病時Müller細胞形態、功能均發生異常[2]。色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的一員，不僅是一種天然的新生血管抑制劑，還是一種重要的神經營養和神經保護因子[3]。……